第第 五五 章章巴比妥类药物的分析巴比妥类药物的分析 基本内容基本内容Ø 概述概述Ø 理化性质理化性质Ø 鉴别试验鉴别试验Ø 特殊杂质检查特殊杂质检查Ø 含量测定含量测定 巴比妥类药物是一类临床常用的催眠镇静药由于这类药物应用广泛，容易因不合理使用而引起中毒 本章重点介绍巴比妥类药物的化学结构与分析方法间的关系，介绍鉴别、检查和含量测定的原理与方法 一、巴比妥类药物的基本结构通式一、巴比妥类药物的基本结构通式 丙二酰基脲基 5,5-取代的巴比妥类药物 5 二、理化性质二、理化性质（一）物理性质（一）物理性质 1. 白色结晶或结晶性粉未，具有固定的熔点 2. 游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂 （二）化学性质（二）化学性质 巴比妥类药物分子结构中都有1,3-二酰亚胺基团，能发生酮式和烯醇式的互变异构，在水溶液中可以发生二级电离因此，本类药物的水溶液显弱酸性（pKa为7.3-8.4），可与强碱形成水溶性的盐类 1. 1. 弱酸性弱酸性 与强碱的成盐反应：与强碱的成盐反应： 2. 2. 水解反应水解反应 （1） 与银盐的反应 3 3、与重金属离子的反应、与重金属离子的反应 （2）与铜盐的反应 有色配位化合物有色配位化合物 （3）与钴盐的反应 无水无水; 所用试剂均应不含水分。
所用试剂均应不含水分反应条件：反应条件： 碱性：异丙胺碱性：异丙胺 （4）与汞盐的反应4 4、、 与香草醛（与香草醛（vanillinvanillin）的反应）的反应 5 5、、 紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征A.H2SO4溶液溶液(0.05mol/L)B.缓冲溶液缓冲溶液C.NaOH溶液溶液(0.1mol/L) (pH 13)巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱Anm 硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl 溶液溶液 (0.1mol/L) NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L) 巴比妥类药物巴比妥类药物Ø 紫外吸收光谱特征和其电离的程度有关 5,5-取代的巴比妥类药物Ø 在pH=2的酸性溶液中，因不电离，几乎无明显的紫外吸收Ø 在pH=10的碱性溶液中，发生一级电离于240 nm处有最大吸收Ø 在pH=13的强碱性溶液中，发生二级电离，最大吸收红移至255 nm处 硫代巴比妥类药物硫代巴比妥类药物 在酸性或碱性溶液中，均有较明显的紫外吸收 7 7、显微结晶特征、显微结晶特征Ø 药物本身的晶形巴比妥：长方形； 苯巴比妥：球形→花瓣状Ø 反应产物的晶形巴比妥 ＋ 铜吡啶试液 → 十字形紫色结晶苯巴比妥 ＋ 铜吡啶试液 → 细小不规则或似菱形的浅紫色结晶6 6、薄层色谱行为特征、薄层色谱行为特征Ø 对照品对照鉴别 Ø 概述概述Ø 理化性质理化性质Ø 鉴别试验鉴别试验Ø 特殊杂质检查特殊杂质检查Ø 含量测定含量测定 （1） 与银盐的反应、（二）铜盐反应二、鉴别试验二、鉴别试验（一）、丙二酰脲类反应（二）熔点测定巴比妥类的钠盐＋酸 → 游离巴比妥类药物↓ → 过滤 → 洗涤 → 干燥 →测熔点苯巴比妥钠的鉴别 取本品约0.5 g，加水5 ml溶解后，加稍过量稀盐酸，即析出白色结晶性沉淀，滤过；沉淀用水洗净，在105℃干燥后，依法测定，熔点为174-178℃。
司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪色不饱和烃取代基的反应① 与溴试液或碘试液的反应② 与KMnO4的反应可还原紫色的KMnO4为棕色的MnO2（三） 特殊取代基及元素的反应 ② 与NaNO2—H2SO4反应③ 与甲醛—H2SO4反应①硝化反应芳香取代基的反应 硫元素的反应硫元素的反应 （四）钠盐的鉴别反应1. 焰色反应 取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色2. 与醋酸氧铀锌反应 取供试品的中性溶液，加醋酸氧铀锌试液，即生成黄色↓（五）红外分光光度法 第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查一、苯巴比妥的特殊杂质检查 酸度 乙醇溶液的澄清度 中性或碱性物质二、司可巴比妥钠的特殊杂质检查 溶液的澄清度 中性或碱性物质 Ø 概述概述Ø 理化性质理化性质Ø 鉴别试验鉴别试验Ø 特殊杂质检查特殊杂质检查Ø 含量测定含量测定 终点指示：电位法指示（Ag电极为指示电极，饱和甘汞电极为参比电极） 自身指示 一一 银量法银量法1.原理：反应摩尔比（1∶1）溶剂系统：甲醇+3%无水碳酸钠第四节第四节 含量测定含量测定 苯巴比妥： 取本品约0.2 g，精密称定，加甲醇40 ml使溶解，再加新制的3％无水碳酸钠溶液15 m1，照电位滴定法，用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定。
每1 ml 硝酸银滴定液（0.1 mo1/L）相当于23.22 mg的C12H12N2O3 2. 测定方法与计算 原料药：直接滴定法 3. 注意事项（1）无水碳酸钠应新鲜配制（2）AgNO3滴定液应新鲜配制（3）银电极使用前应进行处理 凡取代基中含有双键的巴比妥类药物，其不饱和键可与溴定量地发生加成反应，故可采用溴量法进行测定如司可巴比妥钠及其胶囊的测定二二 溴量法溴量法1. 原理 I2＋2Na2S2O3＝2NaI＋Na2S4O6KBrO3＋5KBr＋6HCl＝3Br2＋6KCl＋3H2O Br2＋2KI＝2KBr＋I2 司可巴比妥钠：司可巴比妥钠： 12H17N2NaO32. 测定方法与计算 原料药：剩余滴定法 3. 注意事项（1）操作中要防止溴和碘的逸失（2）平行条件进行空白试验可减少溴和碘逸失带来的误差 1. 在水—醇混合溶剂中的滴定法 弱酸性 pK 异戊巴比妥异戊巴比妥水水——醇醇溶解溶解麝香草酚酞麝香草酚酞NaOHNaOH淡蓝色淡蓝色三三 酸碱滴定法酸碱滴定法此法终点判断较困难 取本品约0.5 g，精密称定，加乙醇20 m1溶解后，加麝香草酚酞指示液6滴，用氢氧化钠滴定液（0.1 mo1/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正，即得。
每l ml氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）相当于22.63 mg的C11H18N2O3 异戊巴比妥的含量测定异戊巴比妥的含量测定 溶 剂：二甲基甲酰胺 滴定剂：甲醇钠（钾） 指示剂：麝香草酚蓝 3. 非水溶液滴定法2. 在胶束水溶液中进行的滴定法溶 剂：表面活性剂-溴化十六烷基三甲基苄胺水溶液滴定剂：氢氧化钠滴定液指示剂：麝香草酚肽 四 紫外分光光度法紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 本法是将样品溶解后，根据溶液的pH值选用其相应的max处进行直接测定 1. 1. 吸收系数法吸收系数法2. 2. 标准曲线法标准曲线法 单组分定量方法：单组分定量方法： 3. 3. 对照法对照法 取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液；另取硫喷妥对照品，精密称定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液照分光光度法，在304nm的波长处分别测定A，根据每支的平均装量计算。
11H17N2NaO2S 如注射用硫喷妥钠的含量测定如注射用硫喷妥钠的含量测定 （（三三））多多组组分分混混合合物物不不经经分分离离的的定定量量方方法法 —— ——计算分光光度法计算分光光度法双波长分光光度法；差示分光光度法；导数光谱法 （二）经提取分离后的紫外分光光度法（二）经提取分离后的紫外分光光度法 干扰物质去除 取取两两份份相相等等的的供供试试溶溶液液，，分分别别制制成成两两种种不不同同的的化化学学环环境境（（如如在在其其一一中中加加酸酸、、碱碱或或缓缓冲冲液液改改变变溶溶液液的的pH，，或或在在其其一一中中加加能能与与供供试试品品发发生生某某种种化化学学反反应应的的试试剂剂）），，然然后后将将两两者者分分别别稀稀释释至至同同样样浓浓度度，，一一份份置置样样品品池池中中，，另另一一份份置置参参比比池池中中，，于于适适当当波波长长处处，，测测其其吸吸收收度的差值（度的差值（ A值）差示分光光度法（A法）1. 1. 测定方法测定方法 2. 2. 必要条件必要条件 （1）供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。
（2）干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变 供试品在两种不同的化学环境中分别以x、y 表示，干扰物用 z 表示3. 3. 定量依据定量依据 即，吸收度差值（即，吸收度差值（ A）仅与待测组分的浓度有）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除 可用对照法或标准曲线法定量 保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰点，又无需事先分离，并能消除干扰4. 4. 特点特点5. 5. 应用应用（（1 1）于波长）于波长240 nm240 nm处，测定处，测定pH10pH10和和pH2pH2两种溶两种溶液的吸收度之差液的吸收度之差（（2 2）于波长）于波长260 nm260 nm处，测定处，测定pH10pH10和强碱溶液和强碱溶液的吸收度之差的吸收度之差 HPLCHPLC法同时测定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的浓度法同时测定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的浓度色谱条件：色谱柱 AgilentZORBAX SB- C18柱( 250 ×4.6mm , 5µm) , 流动相为甲醇∶水∶乙腈(45∶45∶10 ） 流速1.0m l/m in, 柱温30℃, 检测波长254nm。
血样处理：取内标溶液100µL，60℃水浴氮气吹干，加200µL待测血清, 加提取液（氯仿：乙酸乙醋=50：50）2ml, 旋涡混合5min, 以4000转/分离心10min, 用吸管吸取上层水层, 弃去用移液管移取有机相置带盖尖底塑料离心管中, 于60℃水浴中氮气吹干, 用流动相200µL溶解, 取20µL进样测定五五 高效液相色谱高效液相色谱 方法验证：标准曲线与线性、精密度（RSD< 3%) 、方法回收率、提取回收率（大于87%）、稳定性等均符合中国药典的要求 六六 电泳法电泳法七七 气相色谱气相色谱-质谱联用质谱联用 §我们都知道气相色谱由于它具有高灵敏度、高检测性能所以在石油、化工、医药、农业、生物和环保等方面得到广泛应用气相色谱的核心部分就是色谱柱，因此在选择色谱柱时就要根据我们的实际检测要求而定一个好的色谱柱它具有如下的特性：1.要有高的分离度2.具有足够的塔板理论数影响这两方面就的因数有：1.色谱柱长度、孔径大小2.载体颗粒的大小3.固定相中固定液的性质我们现在只讨论第三种影响因数，我们知道固定液一般是涂布在载体上形成一层漠，这个漠就能够把我们复杂的样品组分进行很好的分离，它的分离原理是“相似相溶”原理，即极性溶于极性，非极性溶于非极性。
因此在色谱柱分离过程中，被分离的样品组分极性与固定液极性相同的组分后出峰（组分出峰先后顺序还与本身组分的融沸点有关），所以如果要得到很好分离效果的谱图就需要选择固定液与样品中被分离大多数组分极性相近的色谱柱。