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1、实实 验验 四四放放线菌、霉菌和酵母菌菌、霉菌和酵母菌形形 态 的的 观 察察一、实验目的要求一、实验目的要求1.学学习习掌握察看放掌握察看放线线菌、霉菌和酵母菌形菌、霉菌和酵母菌形状的根本方法。状的根本方法。2.加深了解放加深了解放线线菌、霉菌和酵母菌的形状菌、霉菌和酵母菌的形状特征。特征。原核类：细菌、古生菌、放线菌、蓝细菌、支原体、原核类：细菌、古生菌、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体、衣原体等。立克次氏体、衣原体等。 真核类：真菌酵母菌、霉菌、蕈菌、原生动物、真核类：真菌酵母菌、霉菌、蕈菌、原生动物、 显微藻类。显微藻类。 非细胞类：病毒、亚病毒类病毒、朊病毒等非细胞类：病毒、亚病毒
2、类病毒、朊病毒等二、实验原理二、实验原理放线菌、霉菌和酵母菌分类位置放线菌、霉菌和酵母菌分类位置二、实验原理二、实验原理1 1放放线线菌：是一菌：是一类类主要呈菌主要呈菌丝丝状生状生长长和和孢孢子繁子繁衍的衍的陆陆生性生性较较强强的革的革兰兰氏阳性氏阳性细细菌，广泛分布菌，广泛分布于含水量低、有机于含水量低、有机质质丰富的微碱性土壤中。丰富的微碱性土壤中。 放放线线菌的菌落形状特征菌的菌落形状特征为为：构成枯燥、不透明、：构成枯燥、不透明、外表呈致密外表呈致密丝绒丝绒状，上有一状，上有一层层彩色彩色“干粉的干粉的菌落。菌落与培育基菌落。菌落与培育基衔衔接接严严密，密，难难以挑取，菌以挑取，菌落
3、正反面落正反面颜颜色不一致，在菌落色不一致，在菌落边缘边缘的的琼琼脂平板脂平板上有上有变变形的景象，有泥腥味。形的景象，有泥腥味。链链霉霉菌菌不不同同类类型型孢孢子子丝丝2 2酵母菌：酵母的菌酵母菌：酵母的菌落形状与细菌的相仿，落形状与细菌的相仿，由于酵菌细胞比细菌的由于酵菌细胞比细菌的大，细胞间隙含水量较大，细胞间隙含水量较少，不能运动，菌落较少，不能运动，菌落较大、较厚，外观较稠、大、较厚，外观较稠、不透明，菌落颜色多为不透明，菌落颜色多为乳白色或矿烛色。乳白色或矿烛色。二、实验原理二、实验原理1 1形状察看：不运动、单细胞、真核生物，比形状察看：不运动、单细胞、真核生物，比常见细胞大几倍
4、甚至十几倍。常见细胞大几倍甚至十几倍。 大多数以出芽方式大多数以出芽方式无性繁衍，分裂繁衍；有性繁衍是经过结合产生无性繁衍，分裂繁衍；有性繁衍是经过结合产生子囊孢子。子囊孢子。2 2死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，复原型呈无色。用美蓝对酵母的活化型呈蓝色，复原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进展染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细细胞进展染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的复原才干，能使美蓝由蓝色的氧胞内具有较强的复原才干，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的复原型。因此，具有复原才干的化型变为无色的复原型。因此，具有复原才干的酵母活
5、细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞那么成蓝色或淡蓝色。的衰老细胞那么成蓝色或淡蓝色。二、实验原理二、实验原理2酵母菌酵母菌酵母菌的菌落酵母菌的菌落啤酒酵母啤酒酵母1、菌落较大、较厚、菌落较大、较厚、外观较稠和较不透明。外观较稠和较不透明。2、与培育基结合不严、与培育基结合不严密，易挑起。密，易挑起。3、正面和反面、边缘、正面和反面、边缘与中央颜色一致。与中央颜色一致。3 3霉菌：霉菌的菌丝和孢子比放线菌的粗得多。霉菌：霉菌的菌丝和孢子比放线菌的粗得多。菌落形状较大，质地蔬松，外观枯燥，不透明，菌落形状较大，质地蔬松，外观枯燥，不透明，菌落与
6、培育基间衔接严密，不易挑取，菌落正反菌落与培育基间衔接严密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可明晰察看味。菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可明晰察看到有隔或无隔菌丝和孢子及宏大的孢子囊。到有隔或无隔菌丝和孢子及宏大的孢子囊。二、实验原理二、实验原理黑曲霉黑曲霉三、实验资料三、实验资料1.1.放放线菌培育物：菌培育物：链霉菌霉菌( (医学院学生分医学院学生分别)4)4天培育物。天培育物。2.2.啤酒酵母啤酒酵母2424至至28h28h培育物。培育物。3.3.黑曲霉黑曲霉4d4d平面培育物。平面培育物
7、。 显微镜、载玻片、接种环、解剖刀、酒精灯、镊子、显微镜、载玻片、接种环、解剖刀、酒精灯、镊子、酒精、蒸馏水等。酒精、蒸馏水等。四、实验步骤四、实验步骤察看放察看放线菌的形状菌的形状察看酵母菌的形状察看酵母菌的形状察看霉菌的形状察看霉菌的形状1. 1. 放线菌孢子丝形状察看放线菌孢子丝形状察看( (插片法插片法) )1 1 融化高氏融化高氏1 1号培育基，冷却至号培育基，冷却至5050度倒平板，度倒平板，平板要厚一些，以利于插片。接种、插片、培育。平板要厚一些，以利于插片。接种、插片、培育。2 2染色：用镊子小心取出盖玻片，并将其反面染色：用镊子小心取出盖玻片，并将其反面附着的菌丝体擦干净，用
8、附着的菌丝体擦干净，用0.05%0.05%美蓝染色约美蓝染色约1min1min后后水洗。然后将盖玻片无菌丝体的面放在载玻片上。水洗。然后将盖玻片无菌丝体的面放在载玻片上。3 3镜检：晾干后用镜检：晾干后用100X100X油镜察看孢子丝形状特油镜察看孢子丝形状特征。征。四、实验步骤四、实验步骤留意：染色水洗时水流要缓，以免破坏孢子丝形状。留意：染色水洗时水流要缓，以免破坏孢子丝形状。10092436俞佩枫拍摄俞佩枫拍摄放线菌放线菌放线菌放线菌2. 2. 酵母菌形状察看及死活细胞鉴别：酵母菌形状察看及死活细胞鉴别：美蓝浸片的察看美蓝浸片的察看: :1 1滴一小滴滴一小滴0.050.05吕氏碱性美蓝
9、染色液于载玻片吕氏碱性美蓝染色液于载玻片中央，按无菌操作取少量酵母菌与其混合均匀。中央，按无菌操作取少量酵母菌与其混合均匀。用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌体接触，用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌体接触，渐渐将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。渐渐将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。放置约放置约3min3min后，先用低倍镜后用后，先用低倍镜后用40X40X高倍镜高倍镜( (不用油不用油镜镜),),察看酵母的形状和出芽情况，并根据颜色区别察看酵母的形状和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。死活细胞。2 2染色染色0.5h0.5h后再次察看，留意死细胞能否添加。后再次察看，留意死细胞能否添加。 四、实验步
10、骤四、实验步骤本卷须知：本卷须知：用接种环将菌体与染液混合时不要猛烈涂抹，用接种环将菌体与染液混合时不要猛烈涂抹，以免破坏细胞。以免破坏细胞。滴加染液要适中，否那么用盖玻片覆盖时，滴加染液要适中，否那么用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。四、实验步骤四、实验步骤2. 酵母菌形状察看及死活细胞鉴别：酵母菌形状察看及死活细胞鉴别：3分钟分钟10092436俞佩枫拍摄俞佩枫拍摄30分钟分钟10092436俞佩枫拍摄俞佩枫拍摄3. 3. 霉菌的形状察看：霉菌的形状察看：1 1在载
11、玻片上滴加一滴在载玻片上滴加一滴0.05%0.05%美蓝染液；美蓝染液；2 2用解剖针或镊子从霉菌菌落底部小心挑用解剖针或镊子从霉菌菌落底部小心挑取少量曾经产孢子的霉菌菌丝；取少量曾经产孢子的霉菌菌丝；3 3放在载玻片上的染液中，用解剖针小心放在载玻片上的染液中，用解剖针小心将菌丝分开；将菌丝分开；4 4盖上盖玻片，置于盖上盖玻片，置于10X10X低倍镜下察看，低倍镜下察看，必要时换必要时换40X40X高倍镜高倍镜.(.(不用油镜不用油镜!)!)四、实验步骤四、实验步骤黑曲霉黑曲霉10092436俞佩枫拍摄俞佩枫拍摄3. 3. 霉菌的形状察看霉菌的形状察看留意：留意：用镊子取菌和用解剖针分散菌
12、丝时要细心，用镊子取菌和用解剖针分散菌丝时要细心，尽量减少菌丝断裂及形状被破坏，盖盖玻尽量减少菌丝断裂及形状被破坏，盖盖玻片时防止气泡产生。片时防止气泡产生。四、实验步骤四、实验步骤1.1.绘图并阐明放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子绘图并阐明放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝的形状和特征丝的形状和特征2.2.绘图并阐明酵母菌形状及出芽生殖情况绘图并阐明酵母菌形状及出芽生殖情况3.3.列表阐明在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌列表阐明在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？和霉菌的主要区别是什么？4.4.根据他所察看到的吕氏碱性美蓝染液浓度及作根据他所察看到的吕氏碱性美蓝染液浓度及作用时间与酵母死、活细胞数量变化的情况，填下用时间与酵母死、活细胞数量变化的情况，填下表：表：五、实验报告五、实验报告 酵母死、活细胞数量变化的情况记录表酵母死、活细胞数量变化的情况记录表美蓝染液浓度美蓝染液浓度0.1%作用时间作用时间3min30min每视野活细胞每视野活细胞数数/个个每视野死细胞每视野死细胞数数/个个
