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1、Chapter 2Structure andfunction of Nucleic AcidsContents2.1细胞的遗传物质2.2核酸的化学组成与共价结构2.3DNA的二级结构2.4DNA的超螺旋结构2.5真核生物的染色体及其组装2.6RNA的结构和功能2.7核酸的性质2.8研究核酸的常用方法第一节第一节 细胞的遗传物质细胞的遗传物质一、一、DNA是主要的遗传物质是主要的遗传物质1、In 1869, Miescher：分离出核素分离出核素2、In 1930s, P. Levene and W. JacobsRNA ：核糖，碱基核糖，碱基DNA ：脱氧核糖，碱基脱氧核糖，碱基3. In 1
2、928, Frederick Griffith：细菌的转化实验细菌的转化实验光滑型（光滑型（S）肺炎双球菌可致小鼠死亡肺炎双球菌可致小鼠死亡粗糙型（粗糙型（R）肺炎双球菌不会导致小鼠死亡肺炎双球菌不会导致小鼠死亡加热杀死加热杀死S型，小鼠不会死亡型，小鼠不会死亡 将将R型和加热杀死的型和加热杀死的S型混合后注射小型混合后注射小鼠，小鼠死亡；鼠，小鼠死亡；结果分析：结果分析： R型在型在转化过程中从杀死的转化过程中从杀死的S型型获得了基获得了基因（遗传物质）因（遗传物质）4、DNA 是转化物质是转化物质In 1944, Oswald Avery（1）将）将S型杀死后分别提取型杀死后分别提取多糖、
3、脂类、多糖、脂类、RNA、蛋白质、蛋白质、DNA等分别加入等分别加入R菌中，菌中， 仅加入仅加入DNA的发生了转化的发生了转化（2）向提取液加入胰蛋白酶或糜蛋白酶，转化）向提取液加入胰蛋白酶或糜蛋白酶，转化可发生可发生（3）向提取液加入向提取液加入DNA酶，转化不能发生酶，转化不能发生（4）直接的理化分析）直接的理化分析 超速离心（超速离心（Ultracentrifugation） 转化的物质沉降的速度快转化的物质沉降的速度快电泳（电泳（Electrophoresis） 转化物质移动的速度快转化物质移动的速度快 紫外吸收紫外吸收 转化物质在转化物质在260nm波长处有最大吸收峰波长处有最大吸收
4、峰基本化学分析：基本化学分析： N/P比为比为1.67结论：结论：DNA是转化物质是转化物质5、噬菌体侵染实验：、噬菌体侵染实验：1952年年, Hershey and Chase二、二、 RNA 也是遗传物质也是遗传物质In 1957, Heinz Fraenkel-Conrat and B. Singer：烟草花叶病毒重建实验烟草花叶病毒重建实验作为遗传物质的作为遗传物质的DNA具有以下特性：具有以下特性：贮存并表达遗传信息贮存并表达遗传信息能把遗传信息传递给子代能把遗传信息传递给子代物理和化学性质稳定物理和化学性质稳定有遗传变异的能力有遗传变异的能力第二节核酸的化学组成与共价结构一、核酸
5、的化学组成核酸（Nuleicacid）核苷酸（Nucleotides）核苷（nucleosides）+磷酸(Phosphoricacid)戊糖(pentose)+碱基（Bases）（一）碱基（一）碱基（Bases）：）：嘧啶碱和嘌呤碱嘧啶碱和嘌呤碱（二）核苷（Nucleosides）糖与碱基之间以糖苷键相连核糖核苷脱氧核糖核苷（三）核苷酸（三）核苷酸（Nucleotides）二、核酸的共价结构（一）DNA的一级结构DNA分子中的核苷酸序列3，5-磷酸二酯键5-末端:自由的磷酸基团3-末端:自由的羟基（二）RNA的一级结构无分支的多聚核糖核苷酸链4种核糖核苷酸：A、G、U、C核苷酸中的戊糖为核糖
6、第三节DNA的二级结构一、DNA双螺旋模型的诞生In1951,Pauling:-螺旋Chargaff:A=T,G=CIn1952,FranklinandWilkins:清晰的X-射线衍射照片In1953,WatsonandCrickDNAdoublehelixmodel二、双螺旋模型的特征1、主链：（1）DNA分子由两条反向平行的多核苷酸链组成（2）两条主链围绕同一中心轴相互缠绕，形成双螺旋，螺旋方向为右手螺旋（3）糖-磷酸主链位于双螺旋的外侧，碱基位于双螺旋的内侧；（4）碱基对平面与螺旋轴垂直2、碱基配对3、螺旋参数：（1）每一圈螺旋含10个碱基对（2）双螺旋螺距为3.4nm，上下相邻碱基的
7、垂直距离为0.34nm，交角为36（3）螺旋直径为2nm4、大沟和小沟大沟：宽1.2nm，深0.85nm，小沟：宽0.6nm，深0.75nm三、维持三、维持DNA双螺旋的作用力双螺旋的作用力1、氢键（Hydrogenbonding）2、碱基堆积力：堆积碱基间的疏水作用3、其他作用因素：（1）范德华力；（2）磷酸基的负电荷斥力四、四、 双螺旋结构的其他形式双螺旋结构的其他形式B-DNA:Watson-Crick模型A-DNA:在较低的湿度下形成；RNA-RNA、RNA-DNA杂交分子具有A-DNA这种结构Z-DNA:左手螺旋的双螺旋DNA，其糖-磷酸骨架呈Z字形B-formA-formZ-for
8、mhelical senseright-hand right-handleft-handbp/turn101112大沟大沟宽，深宽，深窄，深窄，深平坦平坦小沟小沟窄，深窄，深宽，浅宽，浅窄，深窄，深sequence基因组基因组DNARNA-RNA DNA-RNApoly(dG-dC)B-DNA是最常见的DNA构象（Watson-Crick双螺旋DNA）；A-DNA构象对基因转录有重要意义；Z-DNA可能与基因转录调控有关（左手螺旋）五、十字形结构五、十字形结构由反向重复（回文序列）DNA形成书书临临汉汉字字翰翰林林书书画画上上荷荷花花和和尚尚画画较长的回文结构(单链），可形成茎环结构(发夹结构
9、)较长的回文结构，可形成十字形结构六、三股螺旋DNA（TriplehelixDNA）1、类型：n分子内的DNA三螺旋结构（H-DNA）n分子间的三螺旋结构n平行的三螺旋结构2、作用力n原来的双螺旋：Watson-Crick配对n第三股来链与双螺旋之一：Hoogsteen配对Watson-Crick配对Hoogsteen氢键ATGC3、意义：可能与基因表达调控有关形成三股螺旋结构可阻止调节蛋白的结合，从而关闭基因的表达七、四链DNA端粒DNA：G四链体结构一、超螺旋一、超螺旋DNA（Superhelix DNA）1、定义： DNA双螺旋双螺旋自身自身盘绕盘绕而而形成形成的空间的空间结构结构第四节
10、第四节 DNA 的的超螺旋结构超螺旋结构2.功能： （1）超螺旋）超螺旋DNA具有更为致密的结构，可以具有更为致密的结构，可以将很长的将很长的DNA分子压缩到染色体中分子压缩到染色体中（2）对）对DNA的稳定性具有十分重要的意义的稳定性具有十分重要的意义3. 正超螺旋和负超螺旋正超螺旋和负超螺旋(1)负超螺旋（负超螺旋（negative supercoil）盘绕方向与盘绕方向与DNA双螺旋方向相反双螺旋方向相反(2) 正超正超螺旋（螺旋（positive supercoil）: 盘绕方向与盘绕方向与DNA双螺旋方同相同双螺旋方同相同 负超螺旋正超螺旋4. 超螺旋的定量描述超螺旋的定量描述 Wh
11、ite 方程：方程：L=T+W（1）连结数（连结数（linking number , L）DNA闭环前两条链交叉的次数（2）扭转数（）扭转数（twisting number , T）DNA分子中的Watson-Crick螺旋数目（3）超螺旋数（缠绕数）超螺旋数（缠绕数 , writhing number , W） 双螺旋双螺旋DNA自身盘绕的次数自身盘绕的次数 负超螺旋负超螺旋 正超螺旋正超螺旋双螺旋双螺旋DNA松开导致负超螺旋，而拧紧则导致正松开导致负超螺旋，而拧紧则导致正超螺旋超螺旋.天然天然DNA分子一般为分子一般为负超螺旋负超螺旋。 Why? 负超螺旋负超螺旋DNA更易于局部解链，易于
12、更易于局部解链，易于 参加参加DNA的复制、转录等的复制、转录等（4）比连接差（比连接差（）：）：表示表示DNA的超螺旋程度的超螺旋程度 =（L - L0）/ L0 大多数生物的超螺旋程度大约在大多数生物的超螺旋程度大约在 -0.05左右左右二、二、拓扑异构体拓扑异构体（Topoisomers）具有不同连接数的相同DNA分子Bp: 360; L: 36; T: 36; W: 0Bp: 360 L: 32; T: 36; W: -4Topoisomerase三、三、拓扑异构酶拓扑异构酶（Topoisomerase）能够改变能够改变DNA连接数从而改变连接数从而改变DNA分子超螺分子超螺旋水平的酶
13、旋水平的酶1、 I型拓扑异构型拓扑异构酶 : 作用机制：切开作用机制：切开环状一条状一条链，连接数改变连接数改变1，不需不需ATP2、 型拓扑异构型拓扑异构酶 : 作用机制：作用机制： 切开切开环状两条状两条链，连接数改变，连接数改变2，需要，需要ATPTypeIItopoisomerase3、细菌的拓扑异构酶（1）旋转酶（Gyrase-topoisomeraseII）：引入负超螺旋；与复制有关（2）拓扑异构酶I：松弛负超螺旋；与转录有关第五节真核生物的染色体及其组装一、染色体和染色质1、染色质（、染色质（chromatin） 指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白组成的线性复合结构,是间期
14、细胞遗传物质存在的形式。2、染色体、染色体(chromosome):指细胞在有丝分裂或减数分裂过程中,由染色质聚缩而成的棒状结构。3、二者关系、二者关系（1）染色质与染色体具有基本相同的化学组成，）染色质与染色体具有基本相同的化学组成，但包装程度不同，构象不同。但包装程度不同，构象不同。（2） 染色质与染色体是在细胞周期不同的功能染色质与染色体是在细胞周期不同的功能阶段可以相互转变的的形态结构阶段可以相互转变的的形态结构二、真核生物的染色质二、真核生物的染色质 1、Euchromatin（常染色质）常染色质） 间期细胞核中，螺旋化程度小、分散度大、浅染间期细胞核中，螺旋化程度小、分散度大、浅染
15、的染色质的染色质 特点：转录活跃特点：转录活跃 2、 Heterochromatin (异染色质）异染色质） 间期高度压缩，螺旋化程度高、深染的染色质间期高度压缩，螺旋化程度高、深染的染色质 特点：特点： A、高度浓缩高度浓缩 B、 转录不活跃转录不活跃 C C、在细胞周期中表现为晚复制在细胞周期中表现为晚复制( (晚晚S S期期) )、早凝缩、早凝缩 （1）组成性异染色质（结构性异染色质）组成性异染色质（结构性异染色质） 在整个细胞周期内都处于凝聚状态的染色质在整个细胞周期内都处于凝聚状态的染色质 （主要为卫星（主要为卫星DNA，构成染色体特殊区域，构成染色体特殊区域， 如着丝粒）如着丝粒）
16、（2）功能性异染色质（兼性异染色质）功能性异染色质（兼性异染色质） 指在某些特定的细胞中，或在一定的发育时期和生理指在某些特定的细胞中，或在一定的发育时期和生理 条件下凝聚，由常染色质转变而来的异染色质条件下凝聚，由常染色质转变而来的异染色质 如如X 染色体，巴氏小体染色体，巴氏小体 是真核生物基因表达调控的一种途径是真核生物基因表达调控的一种途径三、染色体的结构（三、染色体的结构（chromosome structure） 1、有丝分裂期的染色体有丝分裂期的染色体2、Centromere（着丝（着丝粒）粒） 指中期染色单体相互联系在一起的特殊部位指中期染色单体相互联系在一起的特殊部位, ,
17、是纺锤体附着位点是纺锤体附着位点 （1 1）功能：保证有丝分裂和减数分裂中复制）功能：保证有丝分裂和减数分裂中复制 的染色体平均分配到两个子细胞的染色体平均分配到两个子细胞（2）着丝粒）着丝粒DNA： 特点：含大量串联的重复序列特点：含大量串联的重复序列-卫星卫星DNA如酵母着丝粒DNA： 88bp富含AT序列+两侧保守区哺乳动物着丝粒DNA：长序列+大量的重复序列3、Telomere（端粒）端粒） 是真核生物染色体末端的起保护作用的是真核生物染色体末端的起保护作用的一种特一种特殊结构殊结构 （1）功能：保持染色体的稳定性）功能：保持染色体的稳定性（2）端粒）端粒DNA： 特点：特点： A、短
18、串联重复序列短串联重复序列 B、富含富含GC C、形成特殊的二级结构形成特殊的二级结构四、真核生物染色体和染色质的组成四、真核生物染色体和染色质的组成 （一（一） 化学组成：化学组成： DNA / protein（蛋白质）蛋白质） Non-histone 非组蛋白非组蛋白 Histone 组组蛋白蛋白 H2A / H2B / H3 / H4/ H1protein（二）组蛋白（二）组蛋白（Histones） 核心组蛋白：H2A,H2B,H3和H41、种类非核心组蛋白：H12、组蛋白的特点：分子量小（核心组蛋白：10-20kDa；H1：约23kDa）高度保守核心组蛋白都有一个组蛋白折叠结构域碱性蛋
19、白（20-30% Lys / Arg ），），带正电荷组蛋白肽链上氨基酸的分布具有不对称性核心组蛋白的可进行组蛋白修饰Thecorehistonesshareacommonstructuralfold,calledhistone-folddomainThehistoneN-terminaltailsstabilizeDNAwrappingaroundtheoctamer五、染色体的组装（一）核小体一）核小体 （Nucleosome）1、定义：由200bp的DNA和组蛋白组成的染色体的基本结构单位2、核小体的组装、核小体的组装 核小体核心核小体核心-Nucleosome core 组蛋白八聚体核
20、心组蛋白八聚体核心-octameric core histone (H2A /H2B / H3 / H42) 146bp DNA (1.8 turn, left-handed)Top viewSide viewNucleosome core146 bp, 1.8 turn染色体小体染色体小体Chromatosome166 bp, 2 turnDNAHistone octamerHistone H1H1 + 20bp DNA (stabilize) 连接连接DNA-Linker DNA (0100bp, 55bp)Linker DNA核小体核小体-Nucleosome核小体的形成核小体的形成DN
21、A（146bp） + Histone octamer (组蛋白八聚体组蛋白八聚体)Nucleosome core (核小体核心核小体核心) + H1 + 20bp DNA Chromatosome (染色小体染色小体 166bp) + linker DNANucleosome (核小体核小体) (200 bp of DNA)Linker DNA 100 bpaverage 55 bp（二）（二）10 nm纤丝纤丝 “Beads on a string” structureNucleosomeHistone H1Nucleosome repeat:Core + linker DNA200 bp（
22、三）（三） 螺线管（螺线管（30nm 纤丝）纤丝）螺线管螺线管（Solenoid)v直径直径30nmv left-handedv 6 个核小体个核小体/turn微带微带（miniband）是染色质的较高水平的组构是染色质的较高水平的组构（四）四）微带微带（miniband）：螺线管结合到螺线管结合到核骨架核骨架/染色体骨架染色体骨架上形成上形成微带微带微带盘绕形成染色体微带盘绕形成染色体第六节第六节 RNA 的结构和功能的结构和功能一、一级结构（一、一级结构（primary structure） 与DNA区别：核糖；尿嘧啶；通常是单链二、二级结构（二、二级结构（Secondary struct
23、ure） 部分序列自身回折形成局部双螺旋部分序列自身回折形成局部双螺旋tRNArRNAG:U 碱基配对碱基配对 hairpinbulgeloop假结（假结（Pseudoknots）四环（四环（Tetraloop）n端环能够形成稳定的、保守的发夹结构端环能够形成稳定的、保守的发夹结构n广泛分布于体内广泛分布于体内rRNA，催化，催化RNA和非编码和非编码RNA中中三、三级结构（三、三级结构（tertiary structure） Thecrystalstructureofa23SrRNAtRNA四、四、 RNA的功能的功能（1）储存遗传信息，如）储存遗传信息，如RNA病毒病毒（2）mRNA：进行
24、遗传信息的传递，作为蛋白质合成的模板进行遗传信息的传递，作为蛋白质合成的模板（3）rRNA：可装配成核糖体，参与蛋白质合成可装配成核糖体，参与蛋白质合成（4）tRNA：携带氨基酸，参与蛋白质的合成携带氨基酸，参与蛋白质的合成（5）核酶：内含子的自我剪接等）核酶：内含子的自我剪接等（6）MicroRNA：基因表达的调控，在发育过程中起作用基因表达的调控，在发育过程中起作用（7）SiRNA：抑制病毒、转座子等外源基因的表达抑制病毒、转座子等外源基因的表达（8）指导）指导RNA：参与参与RNA的编辑的编辑（9）SnoRNA：可能与可能与RNA的甲基化有关的甲基化有关（10）SnRNA：参与参与RNA
25、的加工（如剪接）的加工（如剪接）第七节第七节 核酸的性质核酸的性质酸碱性质浮力密度紫外吸收变性和复性一、酸碱性质：一、酸碱性质：1、DNA等电点等电点44.5；2、RNA 等电点等电点 22.5；3、带负电荷带负电荷4、应用：、应用：琼脂糖凝胶电泳电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳由负极向正极移动 二、浮力密度二、浮力密度 (buoyant density) 应用应用 ： （1）密度梯度离心）密度梯度离心-DNA的纯化的纯化 8M CsCl（RNA DNA protein) （2）确定确定DNA平均平均GC含量含量 =1.66+0.09% (G+C)蛋白质蛋白质染色体染色体/线形线形DNA超螺旋质粒超螺旋
26、质粒RNACsCl+EB三、紫外吸收三、紫外吸收：DNA/RNA： max=260nm protein： max=280nm A260：nucleotides ssDNA /RNA dsDNA应用：(1)核酸的定量 1mg/ml：A260=20（dsDNA）1mg/ml：A260=25（ssDNA/RNA）(2)DNA纯度的鉴定 A260/A280=1.8，puredsDNAA260/A280=2.0，pureRNAA260/A2801.0，pureprotein（3）判断判断DNA是否变性是否变性DNA的变性，紫外吸收增大（增色效应）的变性，紫外吸收增大（增色效应） DNA的复性，紫外吸收减
27、小（减色效应的复性，紫外吸收减小（减色效应）四、核酸的变性和复性四、核酸的变性和复性（一）（一）变性变性 (Denaturation) ：核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链，不涉及共价键断裂。1、 碱处理碱处理 （alkali） DNA：酮酮 （keto） 烯醇式烯醇式 （enolate） 变性变性 2、 化学试剂化学试剂 尿素（尿素（Urea），）， 甲酰胺（甲酰胺（formamide）高高PHketoformenolateformenolateformketoformApplication:InSouthernblotting,beforetransfer,DNAisusuallydenat
28、uredwithalkali.Chemical DenaturationUrea(尿素）:denaturingPAGEFormamide（甲酰胺）:Northernblot3、热变性（、热变性（Thermal denaturation） （1）熔解温度（熔解温度（Tm）：）：DNA的双螺旋结构失去一半时对应的温度。（2）影响DNA的Tm值的因素DNA均一性均一性高，变性的温度范围越窄，据此可分析DNA的均一性测定测定Tm，可推知可推知G-C含量含量G-C%=（Tm-69.3)2.44Tm与（与（G+C）含量的关系含量的关系 G-C含量与含量与Tm值成正相关值成正相关（二）复性（二）复性（Ren
29、aturation） 变性变性DNA在适当（一般在适当（一般低于低于Tm 20-25）条件下，条件下，两条链重新缔合成双螺旋两条链重新缔合成双螺旋结构。结构。退火（Annealing）1、复性的特点：、复性的特点：（1）热变性）热变性DNA在缓慢冷却时可以复性，快速在缓慢冷却时可以复性，快速 冷却不能复性。冷却不能复性。（2）DNA片段越大，复性越慢；片段越大，复性越慢；（3）DNA浓度越大，复性越快。浓度越大，复性越快。2、应用:PCR:引物与模板DNA的结合Southern和Northern杂交第八节研究核酸的常用方法一、核酸的分离纯化一、核酸的分离纯化1、 DNA分离纯化分离纯化真核DN
30、A以核蛋白（DNP）形式存在，DNP溶于水或高盐溶液（1mol/LNaCl），但不溶于低盐溶液（0.14mol/LNaCl），据此，采用高盐提取，低盐沉淀，可将DNP与RNA核蛋白分开，提取出DNP。DNP可用苯酚抽提，还可用氯仿/异戊醇去除蛋白质。水相中的DNA可被0.3MNaAC-乙醇沉淀2、RNA的制备的制备（1）RNase的灭活：玻璃器皿：高温焙烤塑料器皿：0.1%DEPC，37，过夜提取液加盐酸胍或异硫氰酸胍反应体系中加特异的RNase抑制剂（2）常用方法：异硫氰酸胍/苯酚/氯仿法异硫氰酸胍/氯化铯密度梯度离心法蛋白质：1.33g/ml；DNA：1.71g/ml左右；RNA：1.89
31、g/mlmRNA的制备：oligo(dT)纤维素（琼脂糖凝胶）亲合层析法3、质粒、质粒DNA的提取的提取碱裂解法（alkalinelysis）原理：根据环状质粒DNA与染色体DNA的拓扑学差异pH值=12.012.5：染色体DNA变性双链解开，质粒DNA的双链仍紧密结合pH值=中性（加入pH4.8的乙酸钾）：质粒DNA准确复性，染色体DNA缠绕成网状结构，通过离心与RNA、变性蛋白质一起沉淀，被除去。菌细胞菌细胞1. 悬浮细胞悬浮细胞2. 溶菌酶处理溶菌酶处理3. SDS/NaOH4. 醋酸钾中和醋酸钾中和培养液离心培养液离心质粒、质粒、RNA、蛋白质蛋白质(部分部分)蛋白质、细菌染色体蛋白质
32、、细菌染色体DNA、膜、膜接种、过夜培养接种、过夜培养（3-5mL）水相（质粒、水相（质粒、RNA）变性蛋白质变性蛋白质苯酚苯酚-氯仿氯仿水相水相Rnase A 二倍体积乙醇二倍体积乙醇质粒质粒DNATE溶解溶解蛋白质蛋白质染色体染色体/线形线形DNA超螺旋质粒超螺旋质粒CsCl+EB二、核酸的超速离心二、核酸的超速离心1、测定核酸的浮力密度2、测定DNA中GC的含量G-C含量与DNA的浮力密度之间呈正比关系3、溶液中核酸构象的研究4、用于核酸的制备三、核酸的凝胶电泳1、琼脂糖凝胶电泳（1）原理：电荷效应和分子筛效应（2）DNA移动方向：负极到正极（3）影响迁移率的因素：核酸分子的大小凝胶浓度
33、DNA的构象:超螺旋线形带缺刻的环形电压，不大于5V/cm（4）染色：溴化乙锭-EB（0.5ug/ml）EB与DNA结合后，经紫外光的照射，可发出橙红色的荧光（5）操作过程：）操作过程： a、制备琼脂糖凝胶（制备琼脂糖凝胶（1 TAE缓冲液）缓冲液） b、胶板的制备胶板的制备 c、加样加样 上样缓冲液上样缓冲液 （含溴酚蓝）（含溴酚蓝） d、电泳电泳 5V/cm e、染色染色 (溴化乙锭溴化乙锭) f、观察观察 (紫外灯紫外灯 ) 2、聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分析和制备小于1Kb长度的DNA片段多用垂直平板电泳分辨率高，可将仅相差1bp的DNA分开制备和操作比琼脂糖凝胶困难四、核酸的分子杂交（
34、一）原理：复性复性探针：探针：一小段用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的核酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在（二）方法1、Southern印迹（SouthernBlotting）（1）用途：检测DNA（2）基本步骤：DNA样品酶切电泳碱变性转膜固定杂交洗涤放射自显影Southern 印迹印迹实验实验放射自显影照片放射自显影照片（2）Northern印迹（Northernblotting）基本过程：1、RNA的提取；2、RNA变性电泳；3、RNA转膜和固定；4、杂交；5、检测。Western-blot法法1）总蛋白质的提取）总蛋白质的提取2）SD
35、S-PAGE分离蛋白质分子分离蛋白质分子3）转膜）转膜4）杂交（一抗、酶标二抗）杂交（一抗、酶标二抗）5）显色）显色Keypoints:二级结构多样性超螺旋结构真核生物的染色体及其组装核酸的性质研究核酸的常用方法Question一、作业题：一、作业题：名词解释：名词解释： 染色体、染色质、常染色质、异染色质、组成染色体、染色质、常染色质、异染色质、组成性异染色质、功能性异染色质、超螺旋、正超性异染色质、功能性异染色质、超螺旋、正超螺旋、负超螺旋、拓扑异构酶、拓扑异构体、螺旋、负超螺旋、拓扑异构酶、拓扑异构体、核小体、端粒、核小体、端粒、Z-DNA、核酸的变性、复性核酸的变性、复性二、思考题：1、区分概念：常染色体与常染色质；核酸的变性与降解2、利用核酸的电负性、浮力密度、紫外吸收、变性和复性的性质，可以做哪些分子生物学实验？
