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1、微生物產業之生物性微生物產業之生物性危害研讨危害研讨行政院勞委會勞工平安衛生研讨所文獻探討文獻探討n n由於利用微生物於製程中，如：準備生物培養液、在生物反應器中大量生產微生物、分離微生物或其產物、處理製程中產生的廢棄物時，任务人員皆有能够會暴露於运用的微生物、經基因改造之微生物、以及微生物所產生的產物，而呵斥任务人員安康上的潛在威脅，導致感染、中毒或過敏症狀的出現。文獻探討文獻探討n n細菌與真菌中生產酵素的任务人員出現氣喘與細菌與真菌中生產酵素的任务人員出現氣喘與似感冒之症狀，其血液中對似感冒之症狀，其血液中對B. subtilisB. subtilis抗體抗體效價明顯上升，並有肺功能受損
2、的情形。效價明顯上升，並有肺功能受損的情形。n nTopping MD et al. Topping MD et al. 報告一家生物科技工廠运報告一家生物科技工廠运用用Aspergillus niger Aspergillus niger 於其製程中，導致員工於其製程中，導致員工因暴露於空氣中因暴露於空氣中A. niger A. niger 的孢子與抗原物質，的孢子與抗原物質，以致部分員工出現過敏症狀；研讨認為主要來以致部分員工出現過敏症狀；研讨認為主要來自工廠的菌種培養液。自工廠的菌種培養液。n nSeaton and WalesSeaton and Wales也發現在以糖蜜也發現在以糖蜜
3、molassesmolasses與與Aspergillus nigerAspergillus niger發酵生產檸檬酸的工發酵生產檸檬酸的工廠員工，廠員工， 出現過敏以及呼吸道不適；出現過敏以及呼吸道不適； 該任务該任务環境空氣中環境空氣中A. niger A. niger 濃度為濃度為490CFU/m3490CFU/m3。國內的微生物產業可分為國內的微生物產業可分為n n傳統食品釀造n n包括醬油製造、乳酸飲料製造、酒精醱酵和食醋製造n n新興的生物科技n n 菌體肥料或生物肥料、動物飼料添加物、農業或環保生物製劑、生技製藥、檢驗試劑、人體和動物疫苗、保健或安康食品傳統食品釀造傳統食品釀造n
4、 n主要主要產產品為民生用品，其生品為民生用品，其生產產過程所运用的微生過程所运用的微生物為人類長久以來运用且認定為可食用或是對人物為人類長久以來运用且認定為可食用或是對人體無害的菌種，如黴菌、酵母菌等體無害的菌種，如黴菌、酵母菌等n n酒精醱酵生酒精醱酵生產產流程：流程：n n 菌種培養菌種培養 在試管中在試管中 麴汁麴汁 24 24 小時小時 三三角瓶培養角瓶培養 24 24 小時小時 卡式罐卡式罐 24 24 小時小時 第一酒第一酒母母 酵母增殖，好氣培養酵母增殖，好氣培養 第二酒母第二酒母 酵母增殖，酵母增殖，好氣培養好氣培養 發酵槽發酵槽 23 23 天天 ，產產量：量：810810
5、酒精酒精80 80 / /天天 蒸餾蒸餾 15 9515 95酒精酒精 檢定槽檢定槽 酒精儲槽酒精儲槽傳統食品釀造傳統食品釀造n n醬油醱酵生產流程：n n 蛋白原料：黃豆脫脂豆片蒸煮 冷卻n n 澱粉原料：小麥炒熟 冷卻 磨碎 加種麴 製麴(溫度45 ，2 天) 成為麴豆 鹽水 發酵時間約半年 通氣、攪拌 抽取醬汁和黃豆渣混合物 以紗布過濾 壓榨 調煮 滅菌 裝瓶 倉儲n n危害：在此生產製程中，菌種培育和原料與菌種混合二個步驟能够呵斥含微生物本體或其衍生物(如孢子)氣懸化，而導致任务人員微生物或其孢子的暴露。菌體肥料菌體肥料( (生物肥料生物肥料) )n n於有機肥料中添加微生物，通常有光
6、合成菌、固氮菌、乳酸菌、放線菌等。這些微生物在土壤中可促進肥料中有利植物生長的元素釋放，幫助植物吸收利用這些生長所需的元素，因此提高農作物抗病力、改善農產品質和添加產量。菌體肥料菌體肥料( (生物肥料生物肥料) )n n過程過程n n 有機原料有機原料( (如豆渣、稻殼、椰子殼、麻油粕、如豆渣、稻殼、椰子殼、麻油粕、蓖麻粕或菜仔粕蓖麻粕或菜仔粕) )混合混合 有機原料醱酵有機原料醱酵 控制溫控制溫濕度和曝氣量濕度和曝氣量 醱酵腐熟達穩定狀態醱酵腐熟達穩定狀態( (溫度約溫度約1010和濕度小於和濕度小於40%) 40%) 添加微生物添加微生物( (混拌混拌) ) 加壓射出成小條狀顆粒加壓射出成
7、小條狀顆粒 废废品裝袋品裝袋n n危害：危害：n n添加微生物於醱酵腐熟的有機肥料的混拌，和添加微生物於醱酵腐熟的有機肥料的混拌，和將有機肥料填入機器加壓射出成小條狀顆粒的將有機肥料填入機器加壓射出成小條狀顆粒的過程中。過程中。n n由於含有微生物菌體和由於含有微生物菌體和孢孢子的粉末和已呈乾燥子的粉末和已呈乾燥狀態的有機肥料，在翻動和傳送過程中很容易狀態的有機肥料，在翻動和傳送過程中很容易變成氣懸微粒而漂浮在空氣中，呵斥作業員工變成氣懸微粒而漂浮在空氣中，呵斥作業員工由呼吸道吸入。由呼吸道吸入。動物飼料添加物動物飼料添加物n n主要於水主要於水產產、禽類及畜牧業養殖运用的動物飼料、禽類及畜牧
8、業養殖运用的動物飼料中添加微生物，類似於菌體肥料，飼料中所参与中添加微生物，類似於菌體肥料，飼料中所参与的微生物菌種包括：枯草桿菌屬、乳酸菌屬、酵的微生物菌種包括：枯草桿菌屬、乳酸菌屬、酵母菌屬等。母菌屬等。n n過程過程n n 菌種養分原料菌種養分原料( (包括蛋白質、澱粉、包括蛋白質、澱粉、醣醣類和特類和特殊原料殊原料) ) 高溫殺菌高溫殺菌 冷卻冷卻 加糖蜜及種菌加糖蜜及種菌n n 液體或固體醱酵液體或固體醱酵( (假假设设為固體醱酵，則過程為固體醱酵，則過程中需經過數次翻動以散熱中需經過數次翻動以散熱) ) 冷卻冷卻 乾燥乾燥 ( ( 磨磨粉粉) ) 包裝包裝動物飼料添加物動物飼料添加
9、物n n危害n n能够呵斥作業員工微生物暴露的步驟為種菌、乾燥和包裝，暴露途徑主要為呼吸道吸入。和前面所述的情形類似農業或環保生物製劑農業或環保生物製劑n n主要利用特定微生物在自然環境存在時，成為優勢菌種而抑制其他有害植物生長的致病微生物或昆蟲如黴菌、細菌、病毒、紅蜘蛛等的生長繁衍，達到保護植物的作用。其原始構想期望能取代化學農藥的运用。經常运用的菌種為枯草桿菌、放線菌等。農業或環保生物製劑農業或環保生物製劑(1) 固體培養流程： 原料淨化滅菌 磨細 添加微生物混拌乾式培養乾燥包裝 (密閉作業)(2) 液體培養流程： 種菌培養在三角瓶中進行 50 公升醱酵槽 500 公升醱酵槽 5 公噸醱酵
10、槽 真空濃縮 噴霧乾燥 添加增量劑和分散劑 呈孢子狀態 包裝生技製藥生技製藥n n主要利用培養特定微生物，在其生長繁衍過程中衍生具有主要利用培養特定微生物，在其生長繁衍過程中衍生具有疾病療效的藥物。這些微生物中有能疾病療效的藥物。這些微生物中有能够够經過基因改造，例經過基因改造，例如运用如运用Escherichia coli Escherichia coli 参与特定的基因片段构成質體参与特定的基因片段构成質體(plasmid)(plasmid)，用以，用以產產生所要的蛋白或多生所要的蛋白或多胜胜，而製造多，而製造多胜胜類藥類藥品。品。n n實驗室操作培養流程：實驗室操作培養流程：n n (1
11、) (1) 振盪培養振盪培養 shaker incubationshaker incubation 以酒精萃取以酒精萃取 過濾過濾 HPLC HPLC 分析分析n n (2) DNA sequence (2) DNA sequence 選定選定 植入植入Escherichia coli Escherichia coli 中製成中製成plasmid plasmid 選取特定形質的選取特定形質的Escherichia coli Escherichia coli 誘發培養誘發培養Escherichia coli Escherichia coli 產產生蛋白生蛋白 高壓破碎菌體高壓破碎菌體 染料染色染
12、料染色 蛋白純化蛋白純化 蛋白性檢驗蛋白性檢驗 生生產產部部份份生技製藥生技製藥n n大型醱酵的生產製造流程如下：n n 中間工廠發酵槽(50 L)培養胜利的菌種引入發酵槽 培養原料中型發酵槽(500 L) 大型發酵槽(5000 L) 酸化處理(使產物穩定及殺滅菌株，pH 2.5) 沉澱 萃取 濃縮 包裝生技製藥生技製藥危害危害為執行品管控制的醱酵物取樣步驟為執行品管控制的醱酵物取樣步驟實驗室操作過程中，小型菌種增殖培養和菌種篩選步驟，為實驗室操作過程中，小型菌種增殖培養和菌種篩選步驟，為微生物暴露能够發生的操作微生物暴露能够發生的操作运用超音波細胞打碎機的實驗室並未在平安氣櫃或通風櫥中运用超
13、音波細胞打碎機的實驗室並未在平安氣櫃或通風櫥中進行，能够有產生氣膠的能够進行，能够有產生氣膠的能够檢驗試劑檢驗試劑n n業运用微生物本體或植入某一段基因片段的載體微生物，經培養產生特定的蛋白或反轉錄核酸，然後將此蛋白或反轉錄核酸塗抹於nitrocellulose 所製成的薄膜或生物晶片上，而製成檢驗試紙或晶片，作為醫療檢驗上快速檢定有無特定微生物感染的工具。檢驗試劑檢驗試劑n n危害危害n n微生物菌體暴露主要發生在實驗室的研發人員，微生物菌體暴露主要發生在實驗室的研發人員，而微生物衍生物的暴露則實驗室和生產裝配的人而微生物衍生物的暴露則實驗室和生產裝配的人員均有能够。員均有能够。n n實驗室
14、所產生含有微生物的培養皿和培養液或其實驗室所產生含有微生物的培養皿和培養液或其他實驗過程所用的針頭、吸管、手套等的處理為他實驗過程所用的針頭、吸管、手套等的處理為自行以高壓蒸氣滅菌鍋處理後交由渣滓清運公司自行以高壓蒸氣滅菌鍋處理後交由渣滓清運公司處理，或未經高壓蒸氣滅菌鍋處理，直接裝入標處理，或未經高壓蒸氣滅菌鍋處理，直接裝入標示為生物性危害物示為生物性危害物(biohazardous materials)(biohazardous materials)的橘紅的橘紅色塑膠袋中，然後交予感染性事業廢棄物代處理色塑膠袋中，然後交予感染性事業廢棄物代處理業處理。業處理。人體及動物疫苗人體及動物疫苗n
15、 n以注入病原微生物進動物體以注入病原微生物進動物體內內或在培養基上培養，或在培養基上培養，待待產產生所需的抗體、免疫血清或毒素後，然後從生所需的抗體、免疫血清或毒素後，然後從這些培養基或動物體這些培養基或動物體內內取這些物質，經純化或滅取這些物質，經純化或滅毒處理，而製成疫苗。毒處理，而製成疫苗。n n日本腦炎病毒日本腦炎病毒 注入天竺鼠腦部注入天竺鼠腦部 動物病情發動物病情發作作 動物犧牲抽取腦組織動物犧牲抽取腦組織 純化抗原純化抗原 製成製成針劑針劑n n特殊培養基滅菌特殊培養基滅菌 参与破傷風菌参与破傷風菌 10 L 10 L 液體液體發酵筒發酵筒 少量空氣流通少量空氣流通 毒素毒素產
16、產生生 離心或過離心或過濾濾 沉澱沉澱 精製毒素精製毒素 甲甲醛醛處理以安定和減處理以安定和減毒毒 透析去除甲透析去除甲醛醛 調配濃度製成疫苗調配濃度製成疫苗人體及動物疫苗人體及動物疫苗n n日本腦炎病毒和破傷菌，二者屬於生物平安等級第二級的日本腦炎病毒和破傷菌，二者屬於生物平安等級第二級的病原微生物。因為操作這類病原微生物，在製程中所运用病原微生物。因為操作這類病原微生物，在製程中所运用的平安防護設備為物理性防護等級的平安防護設備為物理性防護等級 P2 P2 級，為裝有高性能級，為裝有高性能微塵去除裝置微塵去除裝置(HEPA (HEPA 過濾器過濾器) )的生物平安操作櫃，其的生物平安操作櫃
17、，其HEPA HEPA 過濾器需定期更換，並於維修或搬動時以甲醛燻蒸整個裝過濾器需定期更換，並於維修或搬動時以甲醛燻蒸整個裝置。置。n n每天實驗室內运用的资料在丟棄前先經過滅菌處理，實驗每天實驗室內运用的资料在丟棄前先經過滅菌處理，實驗及生產製造用的動物屍體以焚化爐焚燒處理。及生產製造用的動物屍體以焚化爐焚燒處理。n n人員進入實驗及生產區域均洗手並換穿消毒滅菌過的任务人員進入實驗及生產區域均洗手並換穿消毒滅菌過的任务服，於任务完成時任务服放置於指定區域內，防護用手套服，於任务完成時任务服放置於指定區域內，防護用手套及口罩丟棄於指定的桶內，以利滅菌及銷毀及口罩丟棄於指定的桶內，以利滅菌及銷毀
18、保健或安康食品保健或安康食品n n利用微生物產生酵素或萃取其特定化學成分，這些酵素或特定化學成分根本上被認為有提昇免疫力、排除體內毒素和促進抗癌作用的效果。屬於這一類的微生物包括：酵母菌、乳酸菌、紅趜菌、真菌類(如靈芝、冬蟲夏草、姬松茸、樟芝、猴頭菇(Hericium erinaceus)、舞菇(Grifola frondosa)等保健或安康食品保健或安康食品n n振盪培養 (shaker incubation) 選取菌株 小型發酵 中間工廠發酵槽(50 L)培養胜利的菌種(或菌絲體)引入大型發酵槽 培養原料 中型發酵槽(500 L) 大型發酵槽(5000 L) 沉澱 過濾 萃取 冷凍濃縮乾燥
19、 包裝n n真菌孢子 洋菜膠培養皿或培養液培養 太空包栽種量產保健或安康食品保健或安康食品n n危害n n對於此產業的作業員工的有害物質暴露，除微生物和真菌所產生的大量孢子散佈於空氣中，引發短暫性的呼吸道黏膜刺激需注不测，慢性效應仍難以評估。n n假设製程中涉及成分萃取，則作業員工的有機溶劑暴露能够是需求留意的職業暴露問題。環境監測環境監測n n曝露平板法n n重力玻片法n nBurkardn n衝擊器：N6 Andersen，N1 Andersenn n衝擊瓶：液體衝擊採樣(PCR)YmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI
20、7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$
21、qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNc
22、K8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r
23、#oWlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL
24、9I6E3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*
25、t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rkShPdMaJ
26、7F4C0z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$
27、rZnWkShPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s!lTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8
28、G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r
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30、9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!p
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32、3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t$qY
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