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1、第五章第五章 黄酮类化合物黄酮类化合物FlavonoidsFlavonoids2 2、颜色反应、颜色反应还原反应还原反应l盐酸盐酸- -镁粉反应：镁粉反应： 阳性：阳性：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）黄酮（醇）、二氢黄酮（醇） 橙红橙红- -紫红紫红（少数（少数显紫显紫 蓝色蓝色）。）。 （B B环有环有-OH-OH或或OCH3OCH3取代时，颜色随之加深）取代时，颜色随之加深） 阴性：阴性：查耳酮、橙酮、儿茶素、异黄酮查耳酮、橙酮、儿茶素、异黄酮 假阳性：假阳性：花色素、部分查耳酮、橙酮等。花色素、部分查耳酮、橙酮等。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反
2、应生成阳碳离子所致生成阳碳离子所致 二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应槲皮素槲皮素花色苷元（红色）花色苷元（红色）双花色苷元双花色苷元l盐酸盐酸- -锌粉反应：锌粉反应： 阳性：阳性：二氢黄酮醇、黄酮醇二氢黄酮醇、黄酮醇-3-O-3-O糖苷（糖苷（ 红红- -紫紫） 阴性：阴性：黄酮醇、二氢黄酮醇黄酮醇、二氢黄酮醇-3-O-3-O糖苷糖苷l四氢硼钠反应：四氢硼钠反应： NaBHNaBH4 4是对二氢黄酮类化合物的专属反应。是对二氢黄酮类化合物的专属反应。 方方法法：取取样样品品10mg10mg溶溶于于甲甲醇醇，加加2%NaBH2%NaBH4 410
3、mg10mg，再再滴滴加加1%1%浓盐酸或浓硫酸，呈浓盐酸或浓硫酸，呈 红红- -紫紫色。色。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应紫色至紫红色紫色至紫红色金属盐类试剂的络合反应金属盐类试剂的络合反应分子结构：分子结构： 5-OH, 4=O 5-OH, 4=O 3-OH, 4=O 3-OH, 4=O 邻二酚羟基邻二酚羟基l铝盐：铝盐： 试剂：试剂：1%AlCl3或或Al(NO3)3： 络合物为络合物为 黄色黄色黄色黄色 ( ( max=415nm) )，具荧光。具荧光。二、
4、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应l铅盐：铅盐： 试剂：试剂：1%Pb(OAc)1%Pb(OAc)2 2或碱式醋酸铅水溶液。或碱式醋酸铅水溶液。 醋醋酸酸铅铅Pb(OAc)Pb(OAc)2 2 ：沉沉淀淀具具有有邻邻二二酚酚羟羟基基、兼兼有有3-3-OH, 4=OOH, 4=O、5-OH, 4=O5-OH, 4=O者。者。产生黄红色沉淀。产生黄红色沉淀。 碱式醋酸铅碱式醋酸铅Pb(OH)(OAcPb(OH)(OAc) ) ：可使可使所有含酚所有含酚OHOH的化的化合物产生合物产生红色红色沉淀，可用于分离。沉淀，可用于分离。二、理化性质二、理化性质（一）
5、化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应l锆盐：锆盐：2%2%氯氧化锆甲醇液氯氧化锆甲醇液 黄黄酮酮类类分分子子中中有有游游离离的的3 3或或5-OH5-OH存存在在时时，均均可可反反应应生生成成黄色黄色黄色黄色的锆络合物。的锆络合物。 二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应说明：说明：3-OH, 4-C=O黄酮稳定性黄酮稳定性 5-OH, 4-C=O黄酮黄酮l 镁盐：镁盐：区别二氢黄酮（醇）类化合物。区别二氢黄酮（醇）类化合物。 二氢黄酮（醇）：二氢黄酮（醇）：天蓝色天蓝色荧光荧光 若具有若具有C C5 5-OH-OH，色泽更明显。，色泽更
6、明显。 黄酮、黄酮醇、异黄酮：黄酮、黄酮醇、异黄酮：黄黄- -橙黄橙黄- -褐色褐色。 方方法法：在在纸纸片片上上滴滴加加样样品品液液，喷喷醋醋酸酸镁镁甲甲醇醇液液，加加热热干燥，干燥，UVUV观察。观察。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应l氯化锶氯化锶(SrCl(SrCl2 2) )：检识具有邻二酚羟基的黄酮。检识具有邻二酚羟基的黄酮。 试剂：试剂：氨性甲醇溶液氨性甲醇溶液 与与分分子子中中具具有有邻邻二二酚酚羟羟基基结结构构的的黄黄酮酮类类化化合合物物生生成成绿色绿色 棕色棕色乃至黑色沉淀。乃至黑色沉淀。l 氯化铁氯化铁(FeCl(FeCl3
7、3) )：检查酚羟基。检查酚羟基。v含有含有3-OH, 5-OH, 3-OH, 5-OH, 邻二邻二OHOH时，可显红、绿等较明显的颜时，可显红、绿等较明显的颜色。色。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应 硼酸显色反应硼酸显色反应条件：条件：l具有下列结构（具有下列结构（5-5-羟基黄酮，羟基黄酮，2-2-羟基查耳酮羟基查耳酮）二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应碱性试剂显色反应：碱性试剂显色反应： 在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的色变情况
8、。碱性试剂处理后的色变情况。 lNHNH3 3蒸汽显色蒸汽显色-深黄色，慢慢褪色深黄色，慢慢褪色( NH( NH3 3挥发性挥发性) )lNaNa2 2COCO3 3显色：显显色：显橙橙- -红色。红色。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应l黄黄酮酮醇醇类类在在碱碱液液中中先先呈呈黄黄色色，通通入入空空气气后后变变为为棕色棕色，据此可与黄酮类区别。，据此可与黄酮类区别。l黄黄酮酮类类化化合合物物当当分分子子中中有有邻邻二二酚酚羟羟基基取取代代或或3,4-3,4-二二羟羟基基取取代代时时，在在碱碱液液中中不不稳稳定定，很很快快氧化，由氧化，由黄色黄色深
9、红色深红色绿棕色绿棕色沉淀。沉淀。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应3 3、Wessely-MoserWessely-Moser重排重排 黄酮类黄酮类6-6-及及8-C-8-C-糖苷糖苷在常规酸水解条件下在常规酸水解条件下不能被水解，但可发生互变，成为不能被水解，但可发生互变，成为6-6-及及8-C-8-C-糖糖苷的混合物。苷的混合物。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 3 3、Wessely-Moser重排重排请请将将下下列列化化合合物物的的结结构构式式和和名名称称配配对对, ,并并说说明明各各化化合合物物的结构类型的结构类型芦
10、丁、槲皮素、葛根素、水飞蓟素: HO OH OH OH OH OH OH HO HO O HO O OH O Oglc rha OH OH O OH O O OH B A C OH O OCH3 HO O O OH OH OH O D 1.用化学方法区别下列各组化合物：用化学方法区别下列各组化合物： 2.3.4.预测芦丁的显色反应结果：预测芦丁的显色反应结果：vHCL-Mg反应反应vHCL-Zn反应反应vZaBH4反应反应v锆锆-枸橼酸反应枸橼酸反应vSrCl2反应反应v硼酸硼酸+草酸反应草酸反应vMolish反应反应某化合物有：某化合物有：四氢硼钠反应呈紫红色；四氢硼钠反应呈紫红色；氯氯化锶
11、反应阳性；化锶反应阳性；锆锆- -枸椽酸反应黄色褪去等枸椽酸反应黄色褪去等性质，则该化合物应为：性质，则该化合物应为： 母核上取代基相同的以下各类化合物的亲水性由母核上取代基相同的以下各类化合物的亲水性由大到小的顺序为：大到小的顺序为： 二氢黄酮类二氢黄酮类 黄酮类黄酮类 花色苷元花色苷元某中药水提取液中，在进行某中药水提取液中，在进行HClHCl-Mg-Mg粉反应时，加粉反应时，加入入MgMg粉无颜色变化，加入浓粉无颜色变化，加入浓HClHCl则有颜色变化，则有颜色变化，只加浓只加浓HClHCl不加不加MgMg粉也有红色出现，加水稀释后粉也有红色出现，加水稀释后红色也不褪去，则该提取液中可确
12、定含有：红色也不褪去，则该提取液中可确定含有： A. A. 异黄酮异黄酮 B. B. 黄酮醇黄酮醇 C. C. 花色素花色素 D. D. 黄酮类黄酮类酸性最弱的黄酮类化合物是：酸性最弱的黄酮类化合物是：1. 7-OH1. 7-OH黄酮黄酮2. 4-OH2. 4-OH黄酮黄酮3. 5-OH3. 5-OH黄酮黄酮4. 2-OH4. 2-OH黄酮黄酮5. 7,4-5. 7,4-二二OHOH黄酮黄酮溶于石油醚的黄酮类化合物是：溶于石油醚的黄酮类化合物是：1. 1. 槲皮素槲皮素2. 2. 黄芩苷黄芩苷3. 3. 芹菜素芹菜素4. 4. 葛根素葛根素5. 5,6,7,8,3,4-5. 5,6,7,8,3
13、,4-六甲氧基黄酮六甲氧基黄酮试分析下列化合物酸性大小的顺序试分析下列化合物酸性大小的顺序黄酮类化合物有哪些主要的显色反黄酮类化合物有哪些主要的显色反应？如何用这些显色反应区别下列应？如何用这些显色反应区别下列各组化合物？各组化合物？（1 1）黄酮与双氢黄酮）黄酮与双氢黄酮 （2 2）双氢黄酮与查耳酮）双氢黄酮与查耳酮（3 3）黄酮与异黄酮）黄酮与异黄酮 （4 4）5-5-羟基黄酮与羟基黄酮与6 6，7-7-二羟基黄酮二羟基黄酮本章内容本章内容一、结构类型二、理化性质三、提取分离四、结构鉴定五、生物活性 （一）提取一）提取苷元：苷元：l大多数黄酮：大多数黄酮：CHClCHCl3 3、EtEt2
14、 2O O、EtOAcEtOAc等等l多甲氧基黄酮：苯、石油醚多甲氧基黄酮：苯、石油醚l极极性性大大的的成成分分：EtOAcEtOAc、EtOHEtOH、MeMe2 2COCO、MeOHMeOH、H H2 2O O等混合溶剂。等混合溶剂。三三、提取分离、提取分离（一）提取（一）提取苷类：苷类：l用用甲甲醇醇、乙乙醇醇、丙丙酮酮、乙乙酸酸乙乙酯酯、极极性性较较大大的的混混合溶剂或热水提取合溶剂或热水提取l多糖苷：沸水多糖苷：沸水l常用溶剂：常用溶剂：甲醇甲醇- -水（水（1 1：1 1）、甲醇）、甲醇 注意：注意：1 1、苷类提取防止酶解。、苷类提取防止酶解。2 2、含羟基的苷或苷元，可用碱水提
15、取。、含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。 3 3、提提取取花花青青素素类类可可加加入入少少量量酸酸（0.1%0.1%盐盐酸酸），但但一一般黄酮类化合物则应避免。般黄酮类化合物则应避免。三三、提取分离、提取分离（一）提取（一）提取水提法：水提法：适合于多糖苷的提取适合于多糖苷的提取粗提物的精制处理粗提物的精制处理v1 1、溶剂萃取法：、溶剂萃取法：v原理：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选原理：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行萃取而达到精制纯化目的。用不同溶剂进行萃取而达到精制纯化目的。醇类溶剂提取：醇类溶剂提取：MeOH, EtOHv石油醚：石油醚：除油脂、蜡、叶绿素
16、除油脂、蜡、叶绿素、胡罗卜素等、胡罗卜素等；v水溶醇沉：水溶醇沉：除蛋白质、多糖、大分子；除蛋白质、多糖、大分子；v逆流分配：逆流分配：水水- -乙酸乙酯，正丁醇乙酸乙酯，正丁醇- -石油醚石油醚三三、提取分离、提取分离（一）提取（一）提取药材药材水或醇水或醇-水，加热提取水，加热提取浓缩，加浓缩，加3-4倍量醇倍量醇醇水液醇水液沉淀沉淀浓缩，回收醇，加水浓缩，回收醇，加水水液水液依次石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取依次石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层石油醚层氯仿层氯仿层乙酸乙酯层乙酸乙酯层正丁醇层正丁醇层水层水层提取液提取液（黄酮苷（黄酮苷)（极性大的苷元，（极性大的苷元，极性小
17、的苷）极性小的苷）（黄酮苷元）（黄酮苷元）（极性小（极性小 大）大）（水提醇沉法）（水提醇沉法）（叶绿素等（叶绿素等脂溶性成分）脂溶性成分）（水杂）（水杂）黄酮提取（粗分）：黄酮提取（粗分）：2 2、碱水提酸沉淀法、碱水提酸沉淀法原理：原理：酚羟基与碱成盐，溶于水，加酸后析出。酚羟基与碱成盐，溶于水，加酸后析出。 适适用用于于含含酚酚羟羟基基的的化化合合物物，如如芦芦丁丁、橙皮苷、黄芩苷等。橙皮苷、黄芩苷等。l常常用用碱碱水水：石石灰灰水水Ca(OH)2，NaNa2 2COCO3 3，稀稀NaOHNaOH，碱碱性性稀稀醇；醇；l酸沉酸沉：盐酸。盐酸。三三、提取分离、提取分离（一）提取（一）提取
18、槐米中芦丁的提取槐米中芦丁的提取v槐槐米米（槐槐树树SophoraSophora japonica japonica L. L. 花花蕾蕾）加加约约6 6倍倍量量水水，煮煮沸沸，在在搅搅拌拌下下缓缓缓缓加加入入石石灰灰乳乳至至pH89pH89，在在此此pHpH条条件件下下微微沸沸20302030分分钟钟，趁趁热热抽抽滤滤，残残渣渣同同上上再再加加4 4倍倍水水煎煎1 1次次，趁趁热热抽抽滤滤。合合并并滤滤液液，在在60706070下下，用用浓浓盐盐酸酸调调至至pHpH为为5 5，搅搅匀匀，静静置置2424小小时时，抽抽滤滤。沉沉淀淀物物水水洗洗至至中中性性，6060干干 燥燥 得得 芦芦 丁丁
19、 粗粗 品品 ， 于于 水水 中中 重重 结结 晶晶 ，70807080干燥得干燥得芦丁纯品芦丁纯品。三三、提取分离、提取分离（一）提取（一）提取注意事项：注意事项： 酸酸碱碱度度不不宜宜过过大大： 碱碱性性过过强强，破破坏坏黄黄酮酮母母核核；酸性过强，生成佯盐，影响产率。酸性过强，生成佯盐，影响产率。 邻邻二二酚酚羟羟基基的的保保护护：碱碱性性条条件件下下，邻邻二二酚酚羟羟基基易被氧化，加硼砂保护；易被氧化，加硼砂保护； 用用石石灰灰水水可可除除去去花花、果果中中含含大大量量鞣鞣质质，果果胶胶，粘粘液液质质，有有利利于于纯纯化化。但但浸浸出出效效果果不不及及NaOHNaOH，且且有有些些黄黄
20、酮酮可可与与钙钙结结合合成成不不溶溶性性沉沉淀淀。稀稀NaOHNaOH浸浸出出效效率率高高，但但杂质多。杂质多。三三、提取分离、提取分离（一）提取（一）提取3 3、炭粉吸附法、炭粉吸附法适用于苷类的精制工作。适用于苷类的精制工作。植植物物的的甲甲醇醇提提取取液液加加活活性性炭炭至至吸吸附附完完全全( (上上清清液无黄酮反应液无黄酮反应) )，过滤得吸附苷的活性炭粉末。，过滤得吸附苷的活性炭粉末。依依次次用用沸沸甲甲醇醇、沸沸水水、7%7%酚酚/ /水水、15%15%酚酚/ /醇醇洗洗脱，分步收集、检查、合并。脱，分步收集、检查、合并。大大部部分分苷苷类类可可用用7%7%酚酚/ /水水洗洗下下，
21、经经减减压压浓浓缩缩至至小小体体积积，乙乙醚醚除除酚酚，余余下下水水层层经经减减压压浓浓缩缩得得较较纯黄酮苷。纯黄酮苷。三三、提取分离、提取分离（一）提取（一）提取v补充：活性炭层析是分离水溶性物质(氨基酸、糖类及其某些甙)的主要方法之一。其特点是样品上柱量大，分离效果好，活性炭来源较易，价格便宜，适用于大量制备分离。但，由于活性炭的生产原料不同，制备方法及规格不一，其吸附力级别尚无理想方法测定，因而限制了其广泛应用。活性炭为非极性吸附剂，洗脱溶剂极性由强弱，溶质：极性大的Rf值大。（二）分离（二）分离依据：依据：1 1、极性不同极性不同硅胶、氧化铝分离（极性吸附）硅胶、氧化铝分离（极性吸附）
22、 聚酰胺分离（氢键吸附）聚酰胺分离（氢键吸附）（酚羟基数目、酚羟基数目、位置不同位置不同）2 2、分子量不同分子量不同凝胶凝胶色谱色谱3 3、酸性不同酸性不同PHPH梯度萃取梯度萃取4 4、特殊结构特殊结构化学分离化学分离三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离 1 1、极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离、极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离常常用用的的吸吸附附剂剂或或载载体体：硅硅胶胶、聚聚酰酰胺胺、纤纤维维素素粉粉、氧化铝、氧化镁及硅藻土氧化铝、氧化镁及硅藻土等。等。 硅胶柱色谱：硅胶柱色谱：v吸附层析洗脱剂：吸附层析洗脱剂：C6H6, CHCl3, CH2Cl2, EtOA
23、c/少量少量MeOHv分配层析洗脱剂：分配层析洗脱剂：EtOAc: 丁酮丁酮: HCOOH: H2O(5:3:1:17, 上上层层)； 丁醇丁醇: HOAc: H2O(4:1:5 上层上层)三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离硅胶的活度与应用硅胶的活度与应用含含H H2 2O O量量活度活度应用应用0%0%I I级级吸附层析吸附层析适于分离：适于分离：异黄酮、二异黄酮、二氢黄酮氢黄酮( (醇醇) )及高度甲基及高度甲基化化( (或乙酰化或乙酰化) )的黄酮及的黄酮及黄酮醇类。黄酮醇类。5%5%IIII级级15%15%IIIIII级级25%25%IVIV级级分配层析分配层析适于分离：适于
24、分离：多羟基黄酮多羟基黄酮醇及其苷类醇及其苷类38%38%V V级级聚酰胺色谱：聚酰胺色谱：v原理：由两个理论来说明，原理：由两个理论来说明， “氢键吸附氢键吸附”理论，理论， “双重层析双重层析”理论。理论。 三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离v“氢键吸附氢键吸附”v分离原理：分离原理：由于聚酰胺分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、由于聚酰胺分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，因而对这些物质形成醌类、硝基化合物等形成氢键，因而对这些物质形成氢键缔合氢键缔合而而吸附，吸附，主要依据与被分离物质成氢键能力大小不同进行分离。主要依据与被分离物质成氢键能力大小不
25、同进行分离。三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离v吸附力的大小吸附力的大小由由酚羟基的数目酚羟基的数目和和酚羟基的位置酚羟基的位置来来决定：决定： 酚羟基数目，吸附，酚羟基数目，吸附，RfRf值；反之，亦然。值；反之，亦然。 另，酚羟基的酸性，吸附，另，酚羟基的酸性，吸附，RfRf值。值。 聚酰胺层析分离黄酮类化合物就是利用黄聚酰胺层析分离黄酮类化合物就是利用黄酮类化合物分子中酚酮类化合物分子中酚OHOH的数目与位置及溶剂与黄的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小不同而达到分离目的的。大小不同而达到分离目的的。适用
26、于分离各种类适用于分离各种类型的黄酮类化合物。型的黄酮类化合物。 三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离B洗脱剂：洗脱剂：l水水-乙醇乙醇-甲醇甲醇-丙酮丙酮-ZaOH水液（或氨水）水液（或氨水）-甲酰胺甲酰胺-尿素水液尿素水液 （洗脱能力依次增强）（洗脱能力依次增强）v洗脱能力最弱洗脱能力最弱 先用水洗脱，洗去不能形成氢键的物质先用水洗脱，洗去不能形成氢键的物质 不同浓度醇洗脱：不同浓度醇洗脱：20%20%，30%100% 30%100% MeOHMeOH或或 MeMe2 2COCO洗脱。洗脱。形成氢键能力弱的先洗下来，强的后下来。形成氢键能力弱的先洗下来，强的后下来。v 常用洗脱剂常
27、用洗脱剂：水水- -乙醇乙醇，水可洗下非黄酮体水溶性成分及少数水可洗下非黄酮体水溶性成分及少数黄酮体苷；黄酮体苷；10%-30%10%-30%醇可洗下黄酮苷；醇可洗下黄酮苷；50-95%50-95%乙醇可洗下黄酮乙醇可洗下黄酮苷元。苷元。 三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离黄酮类化合物从聚酰胺柱上的洗脱规律：黄酮类化合物从聚酰胺柱上的洗脱规律： l苷元相同，洗脱先后顺序一般为：苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元l酚酚OHOH数目越多，越难洗脱数目越多，越难洗脱; ; 酚酚羟羟基基数数目目相相同同, ,酸酸性性弱弱、易易成成分分子子内内氢
28、氢键键者者吸附弱。吸附弱。 羟羟基基位位置置的的影影响响：邻邻位位羟羟基基黄黄酮酮 对对位位（或或间间位）羟基黄酮位）羟基黄酮 ；l不同类型的黄酮类化合物，先后：不同类型的黄酮类化合物，先后： 异黄酮异黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 黄酮黄酮 黄酮醇；黄酮醇；l分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强， 二氢黄酮二氢黄酮 查耳酮。查耳酮。三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离“双重层析双重层析”v聚酰胺具有聚酰胺具有“双重层析双重层析”性能，因聚酰胺分子中既有性能，因聚酰胺分子中既有非极性的脂肪链非极性的脂肪链，又有又有极性酰胺基团极性酰胺基团。 三三、提取分离
29、、提取分离（二）分离（二）分离v当极性溶剂作移动相时当极性溶剂作移动相时( (如：水溶剂系统如：水溶剂系统) )，聚酰胺，聚酰胺作为非极性固定相，相当于反相分配层析，极性大作为非极性固定相，相当于反相分配层析，极性大的物质先洗脱出来；的物质先洗脱出来；v当非极性溶剂作移动相时当非极性溶剂作移动相时( (如：如：CHClCHCl3 3-CH-CH3 3OHOH系统系统) )，聚酰胺作为极性固定相，相当于正相分配层析，极聚酰胺作为极性固定相，相当于正相分配层析，极性小的物质先洗脱出来。性小的物质先洗脱出来。v双重层析理论适用于解释：萜类、甾体、生物碱等双重层析理论适用于解释：萜类、甾体、生物碱等的
30、分离。的分离。聚酰胺层析适用于分离极性和非极性物质，聚酰胺层析适用于分离极性和非极性物质，如：黄酮体、酚类、醌类、有机酸、生物碱、萜类、如：黄酮体、酚类、醌类、有机酸、生物碱、萜类、甾体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤甾体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤其对黄酮体、酚类、醌类物质的分离，远比其它方其对黄酮体、酚类、醌类物质的分离，远比其它方法优越。法优越。三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离聚酰胺柱色谱分离黄酮类化合物的原理是什么聚酰胺柱色谱分离黄酮类化合物的原理是什么? ?用聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递用聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增的乙醇液洗脱时的洗
31、脱顺序如何增的乙醇液洗脱时的洗脱顺序如何? ?简述理由。简述理由。 三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离聚酰胺对黄酮类化合物发生最强吸附作聚酰胺对黄酮类化合物发生最强吸附作用时用时, , 应在（应在（ ）中。）中。 A A、95%95%乙醇乙醇 B B、15%15%乙醇乙醇 C C、水、水 D D、酸水酸水 E E、甲酰胺、甲酰胺 聚酰胺色谱的原理是（聚酰胺色谱的原理是（ ）。）。 A A、分配、分配 B B、氢键缔合、氢键缔合 C C、分子筛、分子筛 D D、离子交换、离子交换 三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离提取分离示例提取分离示例三三、提取分离、提取分离（二）分离（二
32、）分离2 2、利利用用分分子子大大小小不不同同，用用葡葡聚聚糖糖凝凝胶胶分分子子筛分离筛分离Y主要用两种型号的凝胶：主要用两种型号的凝胶： Sephadex-G Sephadex-G型型（适用于水溶性成分分离适用于水溶性成分分离） Sephadex-LH20 Sephadex-LH20型型（可用于亲脂性成分分离可用于亲脂性成分分离） Y常用洗脱剂：常用洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液碱性水溶液，含盐水溶液 醇及含水醇醇及含水醇 含水丙酮，甲醇氯仿含水丙酮，甲醇氯仿三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离Y 原理：原理：l分分离离游游离离黄黄酮酮-主主要要是是吸吸附附作作用用，吸吸附附程程度取
33、决于游离酚羟基的数目。极性小度取决于游离酚羟基的数目。极性小大洗脱。大洗脱。 （凝凝胶胶非非完完全全惰惰性性，有有一一定定吸吸附附力力，这这种种吸吸附附力力来来自自分子间的氢键。分子间的氢键。）l分分离离黄黄酮酮苷苷类类-主主要要是是分分子子筛筛作作用用，分分子子大大小洗脱。小洗脱。总的洗脱顺序：总的洗脱顺序： 糖多的苷糖多的苷糖少的苷糖少的苷游离苷元（极性小游离苷元（极性小大）大）三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离用用Sephadex LH-20柱层析分离下列化合物，柱层析分离下列化合物，用甲醇洗脱，其流出柱外的先后顺序为用甲醇洗脱，其流出柱外的先后顺序为: :ADCB在葡聚糖凝胶
34、色谱柱上，如果用甲醇在葡聚糖凝胶色谱柱上，如果用甲醇- -水水洗脱，最先被洗脱下来的黄酮类化合物洗脱，最先被洗脱下来的黄酮类化合物是：是：1. 1. 槲皮素槲皮素-3-3-芸香糖苷芸香糖苷2. 2. 槲皮素槲皮素-3-3-鼠李糖苷鼠李糖苷3. 3. 山奈酚山奈酚-3-3-半乳糖半乳糖- -鼠李糖鼠李糖-7-7-鼠李糖苷鼠李糖苷4. 4. 木樨草素木樨草素5. 5. 槲皮素槲皮素三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离 3 3、利用酸性强弱，采用、利用酸性强弱，采用pHpH梯度萃取法梯度萃取法Y适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。NaHCO3、Na2CO3
35、、0.2%NaOH、4%NaOH7,4二羟基二羟基 7或或4羟基羟基 一般酚羟基一般酚羟基 5羟基黄酮羟基黄酮方方法法：总总黄黄酮酮溶溶于于Et2O，再再用用碱碱性性由由弱弱强强碱碱液液依依次次萃萃取取，达到分离目的。达到分离目的。 三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离下列化合物用下列化合物用pHpH梯度法进行分离时，从梯度法进行分离时，从EtOAc中，中，用用5%NaHCO3、0.2%NaOH、4%NaOH的水溶的水溶液依次萃取，先后萃取出的顺序应为：液依次萃取，先后萃取出的顺序应为： 已知下列四种化合物存在于松木心材的乙醚提取液已知下列四种化合物存在于松木心材的乙醚提取液中中, ,
36、并可按下列程序分出并可按下列程序分出, ,试问各自应在何部位提取试问各自应在何部位提取物中出现物中出现? ?为什么为什么? ?4 4、根据分子中某些特定官能团进行分离、根据分子中某些特定官能团进行分离 醋醋酸酸铅铅沉沉淀淀法法：可可分分离离含含邻邻二二酚酚羟羟基基和和不不含含邻邻二二酚酚羟基的化合物。羟基的化合物。l黄黄酮酮类类混混存存的的其其它它物物质质，如如含含-COOH-COOH的的树树胶胶、粘粘液液、果果胶胶、有有机机酸酸、蛋蛋白白质质等等或或含含邻邻二二酚酚OHOH的的如如：鞣鞣质质可可与与Pb(OAC)Pb(OAC)2 2形成形成除杂质的目的。除杂质的目的。 三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离硼硼酸酸络络合合法法：根根据据具具有有邻邻二二酚酚羟羟基基的的黄黄酮酮与与硼硼酸酸络络合合，生生成成物物易易溶溶于于水水的的性性质质与与其其它它类型黄酮分离。类型黄酮分离。三三、提取分离、提取分离（二）分离（二）分离例：从芹菜例：从芹菜Apium graveolens L.Apium graveolens L.种子中分种子中分离离graveobiodide Agraveobiodide A及及B B
