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1、实验三实验三 细菌染色及形态观察细菌染色及形态观察 1.1 1.1 掌握革兰氏染色和芽胞染色的原理和方法。掌握革兰氏染色和芽胞染色的原理和方法。1.2 1.2 巩固无菌操作技术巩固无菌操作技术 。1.3 1.3 掌握显微镜油镜使用的方法。掌握显微镜油镜使用的方法。1.4 1.4 初步掌握微生物学绘图方法。初步掌握微生物学绘图方法。 1 实验目的实验目的2.1 2.1 观察微生物细胞时，为什么要对微生物进行染色观察微生物细胞时，为什么要对微生物进行染色? ?革兰氏染革兰氏染色与细菌细胞壁的结构与成分有什么关系？芽胞染色的机理是色与细菌细胞壁的结构与成分有什么关系？芽胞染色的机理是什么？什么？2.
2、2 2.2 显微镜油镜为什么能增加照明亮度显微镜油镜为什么能增加照明亮度? ?，为什么能增加分辨率，为什么能增加分辨率？2 实验原理实验原理(通过了解下列问题来掌握实验原理通过了解下列问题来掌握实验原理)革兰氏染色法革兰氏染色法芽胞染色法芽胞染色法3 3 材料与方法材料与方法3.1.1 药品：革兰氏染色液：革兰氏染色液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%95%乙醇、番红染液，无菌生理盐水。乙醇、番红染液，无菌生理盐水。 芽胞染色液：芽胞染色液：孔雀绿染色液，番红染色液孔雀绿染色液，番红染色液3.1.2 菌种： Escherichia coli（大肠杆菌）、（大肠
3、杆菌）、 Staphylococcus aureus（金黄色葡萄球菌）培养（金黄色葡萄球菌）培养18-24 h18-24 h菌落平板，菌落平板， Bacillus thuringiensis（苏云金芽孢杆菌）培养（苏云金芽孢杆菌）培养24 h24 h菌落平板。菌落平板。3.1.3 仪器：显微镜（显微镜（MODEL E100MODEL E100）3.1.4 其它物品：载玻片，镜油，二甲苯，擦镜纸，接种环，载玻片，镜油，二甲苯，擦镜纸，接种环，酒精灯等。酒精灯等。3.1 3.1 实验器材实验器材3.2 3.2 方法方法 A. A. 革兰氏染色法革兰氏染色法3.2.1 3.2.1 制片。制片。涂片涂
4、片: :取一洁净载片，用记号笔从中分成两个区域，取一洁净载片，用记号笔从中分成两个区域，在两区中央各滴一小滴生理盐水，按无菌操作要求用接种环取平在两区中央各滴一小滴生理盐水，按无菌操作要求用接种环取平板菌落边缘的菌体少许，置于生理盐水中涂抹成约板菌落边缘的菌体少许，置于生理盐水中涂抹成约1.5 cm1.5 cm均匀薄均匀薄膜；膜；干燥干燥: :自然干燥自然干燥( (或电吹风干燥或电吹风干燥) )；固定：固定：将涂面朝上，通过将涂面朝上，通过火焰火焰2 23 3次次。（教师示范）。（教师示范）3.2.2 3.2.2 初染。滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色初染。滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部
5、位，染色1 12min2min后倾去染液，水洗后倾去染液，水洗。（教师示范）（教师示范）3.2.3 3.2.3 媒染。先用卢戈氏碘液冲去载片上残留水迹，再用碘液媒染。先用卢戈氏碘液冲去载片上残留水迹，再用碘液覆盖覆盖1 min，水洗。水洗。3.2.4 3.2.4 脱色。滴加脱色。滴加95%95%乙醇脱色乙醇脱色202030s ,30s ,立即水洗。立即水洗。3.2.5 3.2.5 复染。用吸水纸吸去载片上残留水，用番红复染液染色复染。用吸水纸吸去载片上残留水，用番红复染液染色2 min，水洗，吸干水迹。水洗，吸干水迹。3.2 3.2 方法方法 B. B. 芽胞染色法芽胞染色法3.2.1 3.2
6、.1 制片：按革兰氏染色方法操作。制片：按革兰氏染色方法操作。 （取菌落中央和边缘的菌体）（取菌落中央和边缘的菌体）3.2.2 3.2.2 染色。用试管夹夹住载片，滴加孔雀绿染液染色。用试管夹夹住载片，滴加孔雀绿染液3 35 5滴于涂菌滴于涂菌部位，置酒精灯火焰上加热部位，置酒精灯火焰上加热5 58 8 min ，加热过程要随时滴加染色加热过程要随时滴加染色液，防止煮沸或干涸。液，防止煮沸或干涸。3.2.3 3.2.3 水洗：载片冷却后水洗。水洗：载片冷却后水洗。3.2.4 3.2.4 复染。用番红染色液染色复染。用番红染色液染色1 min 。水洗，干燥。水洗，干燥。3.2 3.2 方法方法
7、C. C. 细菌形态观察细菌形态观察低倍镜观察低倍镜观察4，10 高倍镜观察高倍镜观察（40，找到合适观察目标，移至视野中心），找到合适观察目标，移至视野中心） 油镜观察（油镜观察（100）将高倍镜转离工作位置，在要观察的涂菌部位滴加一滴将高倍镜转离工作位置，在要观察的涂菌部位滴加一滴镜油，将油镜转至工作位置，聚光器升至最高，调节照明镜油，将油镜转至工作位置，聚光器升至最高，调节照明度，调节细调节器，使物像清晰。度，调节细调节器，使物像清晰。绘图绘图在所观察的图像中选取典型部位绘图，要求左眼观察图像，在所观察的图像中选取典型部位绘图，要求左眼观察图像，右眼观察绘图；球菌应注意长度与直径之比，球菌应注意排右眼观察绘图；球菌应注意长度与直径之比，球菌应注意排列状况；有芽胞的细菌应标记芽胞和营养体的位置；图下方列状况；有芽胞的细菌应标记芽胞和营养体的位置；图下方应标明图的名称、放大倍数、染色结果。应标明图的名称、放大倍数、染色结果。实验报告实验报告1 1 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法. .2 2实验结果。实验结果。 按绘图要求进行。按绘图要求进行。3 3 实验分析。分析革兰氏染色、芽胞染色的过程和实验分析。分析革兰氏染色、芽胞染色的过程和结果？分析显微镜使用中存在的问题？应如何改结果？分析显微镜使用中存在的问题？应如何改进？进？
