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1、酵母核糖核酸的分别及组分鉴定酵母核糖核酸的分别及组分鉴定:目的与要求目的与要求1. 了解稀碱法提取了解稀碱法提取RNA的原理、方法的原理、方法2. 掌握核酸中三大组分的鉴定方法掌握核酸中三大组分的鉴定方法:原原 理理v核糖核酸RNA：从细胞核和细胞质中分别出来的化学物质。v 在蛋白质合成和其他生化反响中起着重要作用，RNA的构造和DNA的构造类似，都是由核苷酸按照一定顺序陈列成的长链。v RNA可以分为信使RNA、转运RNA、核糖体RNA以及其他类型的RNA。:磷酸磷酸碱基碱基戊糖戊糖:酵母菌酵母菌酵母中主要成分是酵母中主要成分是RNARNA2.672.6710.0%)10.0%)，DNADN
2、A很少很少 (0.03(0.030.516%)0.516%)。:总总RNARNA的提取的提取: : 采用稀碱裂解法，乙醇沉淀采用稀碱裂解法，乙醇沉淀RNA, RNA, 洗涤除杂洗涤除杂质；质；RNARNA组分鉴定组分鉴定: :硫酸可使硫酸可使RNARNA水解，再分别鉴定水解，再分别鉴定:1. 1. 核糖的核糖的鉴定定苔黑酚苔黑酚(3,5(3,5二二羟基甲苯基甲苯) )法法墨绿色墨绿色: 2. 碱基的碱基的鉴定定嘌呤碱呤碱嘌呤碱呤碱+过量量浓氨水氨水+AgNO3 絮状絮状嘌呤呤银化合物化合物 : 3. 磷酸的磷酸的测定定定磷法定磷法(NH4)2MoO4+H2SO4 H2MoO4+(NH4)2SO
3、4 H3PO4+12H2MoO4 H3P(Mo3O10)4+12H2O+12H2O H3P(Mo3O10)4 Mo2O3MoO3(钼蓝:试剂和器材试剂和器材v试剂：试剂：v 0.04M NaOH 0.04M NaOH；酸性乙醇；酸性乙醇溶液溶液, 95%, 95%乙醇乙醇v1.5M1.5M硫酸；硫酸；v浓氨水，浓氨水，0.1M0.1M硝酸银；硝酸银；v三氯化铁浓盐溶液三氯化铁浓盐溶液 , ,苔苔黑酚乙醇；黑酚乙醇；v定磷试剂定磷试剂v v v器材器材v 研钵，天平；研钵，天平；v 沸水浴，低速台沸水浴，低速台式离心机。式离心机。 n 资料资料n 干酵母干酵母: 一一.提取步骤改动：提取步骤改动
4、：5g酵母中参与酵母中参与30 ml 0.04M NaOH，在研钵中研，在研钵中研磨均匀，转入大试管，沸水浴磨均匀，转入大试管，沸水浴20 min，3000转转离心离心10min，取上清，弃沉淀。，取上清，弃沉淀。上清液渐渐倾入上清液渐渐倾入10 ml 酸性乙醇中，边加边搅，沉酸性乙醇中，边加边搅，沉淀淀RNA静置静置5min， 3000转离心转离心10min，弃上，弃上清，取沉淀。清，取沉淀。:3.3.将沉淀用将沉淀用95%95%乙醇洗两次，约乙醇洗两次，约6 6毫升毫升/ /管，用于除去管，用于除去外表杂质。第一次将沉淀捣散后再离心外表杂质。第一次将沉淀捣散后再离心5min5min；第；第
5、二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放在二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放在滤纸上凉干，称量。差减法称量，滤纸应提早滤纸上凉干，称量。差减法称量，滤纸应提早称好称好 4.4.将一切提取物转移到小三角瓶中，加硫酸进展水将一切提取物转移到小三角瓶中，加硫酸进展水解，再分别鉴定组份。解，再分别鉴定组份。:二二. . 鉴定鉴定 1.1.鉴定磷组分可适当添加，效果更好。鉴定磷组分可适当添加，效果更好。2.2.氨水过量太多也会使沉淀消逝；先加硝酸氨水过量太多也会使沉淀消逝；先加硝酸银后加氨水效果明显。银后加氨水效果明显。苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反响。响。准微量准微量DNADNA无影响，较多无影响，较多DNADNA存在，亦有干扰。存在，亦有干扰。 :离心本卷须知：离心本卷须知：1.样品倒入玻璃离心管不能太满；2.离心前玻璃离心管套上塑料管套放在天平上平衡好；3.离心机中对称放置；4.接通电源前确认速度旋钮能否归零，调理定时旋钮设定时间，按开场键开场离心，缓慢调理速度至实践需求速度。:思索题思索题1.为什么测定嘌呤碱而不是嘧啶碱？2.为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解？:
