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1、实验二实验二 微生物的实验室培养微生物的实验室培养营养条件营养条件-培养基培养基人们按照微生物对营养物质的不同要人们按照微生物对营养物质的不同要求求,配制出供其生长繁殖的营养基质配制出供其生长繁殖的营养基质.培养基种类培养基的成分培养基的成分水水碳源碳源氮源氮源无机盐无机盐生长因子生长因子其他条件其他条件配制培养基时还要满足微生物生长对配制培养基时还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（生长因子）以及、特殊营养物质（生长因子）以及氧气的需求。氧气的需求。环境条件环境条件-无菌技术无菌技术-消毒消毒煮沸消毒法、巴氏消毒法。煮沸消毒法、巴氏消毒法。化学试剂消毒法：用酒精擦拭双手、化学试剂消毒法：用
2、酒精擦拭双手、氯气消毒水源等。氯气消毒水源等。紫外线消毒法：紫外线照射接种室、紫外线消毒法：紫外线照射接种室、接种箱或超净工作台。接种箱或超净工作台。无菌技术无菌技术-灼烧灭菌灼烧灭菌将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属器具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层他金属器具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底灭菌。灼烧，可以迅速彻底灭菌。接种过程中，试管口或瓶口等容易被污接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。无菌技术-干热灭菌 将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在将灭菌物品放入干热
3、灭菌箱内，在160170加热加热12小时可达到灭菌小时可达到灭菌目的。能耐高温的、需要保持干燥的目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属器具等。和金属器具等。无菌技术-高压蒸汽灭菌 将灭菌物品放置高压蒸汽灭菌锅中，将灭菌物品放置高压蒸汽灭菌锅中，一般保持压力为一般保持压力为100KPa、温度、温度121条件下，维持条件下，维持1530分钟。分钟。 思考思考-选择合适方法消毒或灭菌选择合适方法消毒或灭菌培养基和培养皿培养基和培养皿玻棒、试管、烧瓶、吸管玻棒、试管、烧瓶、吸管实验者的双手实验者的双手环境条件-培养温度和时间种类 条件温度
4、天数细菌3037度12d放线菌2528度57d真菌2528度34d纯化技术-菌落菌落：微生物在固体培养基表面生长可菌落：微生物在固体培养基表面生长可形成菌落。形成菌落。单菌落：一个细胞繁殖而来的肉眼可见单菌落：一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。的子细胞群体。 获得单菌落就达到了纯化培养微生物获得单菌落就达到了纯化培养微生物的目的。的目的。实验药品及器材实验药品及器材大肠杆菌菌液、液体培养基、固体培大肠杆菌菌液、液体培养基、固体培养基、酒精灯、养基、酒精灯、70%酒精棉、高压灭酒精棉、高压灭菌锅、涂布器、接种环、恒温培养箱菌锅、涂布器、接种环、恒温培养箱等。等。配制培养基配制培养基-液体培
5、养基液体培养基计算计算称量称量溶化（不加琼脂）溶化（不加琼脂）调调pH灭菌灭菌配制培养基配制培养基-固体培养基固体培养基计算计算称量称量溶化（溶化（添加添加琼脂）琼脂）调调pH灭菌灭菌倒平板（倒平板（50）纯化大肠杆菌-平板划线法平板划线法是通过接种环在固体培养平板划线法是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以得到单菌落。数次划线后培养，可以得到单菌落。纯化大肠杆菌-稀释涂布法稀释涂布平板法是将菌液进行一系列稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释
6、度的菌的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。液分别涂布到固体培养基上进行培养。合合适适的稀释度菌液涂布后可在固体培的稀释度菌液涂布后可在固体培养基上形成单菌落。养基上形成单菌落。注意：取出涂布器时，要让多余的酒精注意：取出涂布器时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器再灼烧灭菌。涂布器再灼烧灭菌。培养将接种后的培养基和一个未接种的培将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入养基都放入37恒温箱中恒温箱中,培养培养12小时小时和和24小时后小时后,分别观察并记录结果。分别观察并记录结果。实验四实验四 微生物数量的测定
7、微生物数量的测定统计菌落数目估算样品中的活菌数量统计菌落数目估算样品中的活菌数量当稀释度足够高时，平板上的一个菌当稀释度足够高时，平板上的一个菌落来源于菌液中的一个活菌。落来源于菌液中的一个活菌。在实际操作中，通常选用一定稀释范在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养以保证获得菌落围的样品液进行培养以保证获得菌落数在数在30300之间、适于计数的平板。之间、适于计数的平板。合适的稀释度合适的稀释度测定土壤中细菌的数量，一般选用测定土壤中细菌的数量，一般选用104、 105 和和106倍的稀释液进行平板培养倍的稀释液进行平板培养实验方法实验方法稀释涂布法稀释涂布法实验步骤实验步骤土壤取
8、样。土壤取样。配制一系列梯度稀释土壤溶液配制一系列梯度稀释土壤溶液涂布在固体培养基上，按照不同微生涂布在固体培养基上，按照不同微生物培养温度和时间进行培养。物培养温度和时间进行培养。统计菌落：每个梯度应多涂几个平板，统计菌落：每个梯度应多涂几个平板，取其平均值。并设置空白对照。取其平均值。并设置空白对照。估算每克样品中的菌株数：估算每克样品中的菌株数：统计结果常常用菌落数目。所测得的统计结果常常用菌落数目。所测得的菌落数目一般小于实际菌液中的活菌菌落数目一般小于实际菌液中的活菌数。数。显微镜直接计数法：血球计数板法显微镜直接计数法：血球计数板法统计结果：一般用活菌数表示。统计结果：一般用活菌数表示。 滤膜法：测定饮用水中大肠杆菌的数目滤膜法：测定饮用水中大肠杆菌的数目已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红红美蓝培养基上培养。在该培养基美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈黑色。可根据培上大肠杆菌的菌落呈黑色。可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。中大肠杆菌的数量。实验结果及分析
