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1、重组人白细胞介素重组人白细胞介素-2 Recombinant Human Interleukin-2主要内容主要内容一、基本信息一、基本信息二二、生产制备、生产制备三三、药物信息药物信息四四、注意事项、注意事项五五、发展前景、发展前景一、基本信息一、基本信息为多肽类免疫增强剂，是一种淋巴因子。为多肽类免疫增强剂，是一种淋巴因子。刺刺激激B细胞增殖分化和分泌抗体。细胞增殖分化和分泌抗体。诱诱导干扰素和多种细胞因子的分泌导干扰素和多种细胞因子的分泌用用于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗。也也可各种自身免疫病的治疗。可各种自身免疫病的治疗。对对乙型肝炎、麻风病、肺结
2、核、白色念珠乙型肝炎、麻风病、肺结核、白色念珠菌感染等具有一定的治疗作用菌感染等具有一定的治疗作用。二、生产制备二、生产制备生产制备的方式主要有两种生产制备的方式主要有两种：1、传统工艺制备传统工艺制备2、基因工程制备基因工程制备其其中以第二种方法为主中以第二种方法为主传统工艺流程传统工艺流程鸡瘟病毒，瘟病毒，PHA,PHA,培养液培养液 启启动诱生生 37 37人白细胞粉人白细胞粉 诱生白细诱生白细胞培养液胞培养液 灭活病毒，分离活病毒，分离,HCl,NaOH,HCl,NaOHpH = 22.5,pH = 7.27.4,离心离心上清液上清液35%硫酸铵硫酸铵4 ，24h，离心，离心上清液上清
3、液85%硫酸铵硫酸铵4 ，24h，离心，离心沉淀沉淀10mmol/LPBS透析透析pH = 6.5，24h透析内液透析内液亲和层析亲和层析上上Sepharose柱柱pH = 6.5亲和载体亲和载体I洗涤洗涤0.4mol/LNaCl，PBSpH = 6.5亲和载体亲和载体吸收吸收1.0mol/LNaCl,PBS透析透析pH = 6.5IL-2组分组分凝胶层析凝胶层析上上Utrogel柱柱pH = 6.5凝胶载体凝胶载体0.2mol/Ltris-HCl含含0.1%PEG2%正丁醇，正丁醇，0.2mol/L甘氨酸甘氨酸pH = 7.6IL-2基因工程制备流程基因工程制备流程IL-2 cDNA 文库的
4、构建文库的构建IL-2表达表达利用利用mRNA杂交筛选杂交筛选IL-2 cDNA克隆克隆与质粒载体与质粒载体pLY-4连接，连接，并转入大肠杆菌并转入大肠杆菌纯化的纯化的IL-2制备包涵体，并用凝制备包涵体，并用凝胶过滤层析纯化胶过滤层析纯化cDNA文库的构建文库的构建IL-2mRNA逆转录酶逆转录成单链cDNA末端脱氧核苷酸转移酶cDNA末端连接dCMP残基，寡聚（dG）1218为引物DNA聚合酶I双链cDNA蔗糖密度梯度离心cDNA片段G-C加尾法插入到pBR322质粒的PstI位点重组质粒转化大肠杆菌得到IL-2 cDNA文库三、药物信息三、药物信息 药典中有以下三种药物含有药典中有以下
5、三种药物含有重组人白细胞重组人白细胞素介素素介素-2：1.注注射用重组人白细胞介素射用重组人白细胞介素-22.重组人白细胞介素重组人白细胞介素-2注射液注射液3.注注射用重组人白细胞介素射用重组人白细胞介素-2（ ）注射用重组人白细胞介素注射用重组人白细胞介素-2高效表达人白细胞介素高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素细胞介素-2冻干制成，含有适宜稳定剂，不冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。含添加剂和抗生素。外外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水
6、后迅速溶解为澄明液体。射水后迅速溶解为澄明液体。重组人白细胞介素重组人白细胞介素-2注射液注射液高效表达人白细胞介素高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素细胞介素-2制成，含有适宜稳定剂，不含添制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。加剂和抗生素。外外观为无色或者微黄色澄明液体。观为无色或者微黄色澄明液体。注射用重组人白细胞介素注射用重组人白细胞介素-2（ ）高效表达人白细胞介素高效表达人白细胞介素-2 （ ）基因的大）基因的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化
7、后获得的重组人白细胞介素得的重组人白细胞介素-2 （ ）冻干制成，）冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。射水后迅速溶解为澄明液体。人白细胞介素人白细胞介素-2 （ ）基因是人白细胞介）基因是人白细胞介素素-2基因序列中原基因序列中原125位编码半胱氨酸的序位编码半胱氨酸的序列突变为编码丝氨酸的序列后的突变基因列突变为编码丝氨酸的序列后的突变基因用法用量用法用量静脉滴注：静脉滴注：10万一万一80万国际单位；万国际单位；皮下注射：皮下注射：50万万100
8、万国际单位；万国际单位；胸腹腔注射：胸腹腔注射：30万万l00万国际单位；万国际单位；介入动脉灌注：介入动脉灌注：40万万l00万国际单位；万国际单位；肿瘤灶局部给药：根据瘤体大小决定用药肿瘤灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量。一般剂量为一次剂量。一般剂量为一次20万国际单位万国际单位(IU)。注注：药物采用氯化钠溶解。：药物采用氯化钠溶解。四、注意事项四、注意事项注意事项：注意事项：各各种不良反应中最常见的是发热、寒战，种不良反应中最常见的是发热、寒战，而且与用药剂量有关；而且与用药剂量有关；个个别患者可出现恶心、呕吐、类感冒症状；别患者可出现恶心、呕吐、类感冒症状；皮皮下注射者局部可出现
9、红肿、硬结、疼痛；下注射者局部可出现红肿、硬结、疼痛；使使用较大剂量时，可能会引起毛细血管渗用较大剂量时，可能会引起毛细血管渗漏综合征，表现为低血压、末梢水肿等。漏综合征，表现为低血压、末梢水肿等。四、注意事项四、注意事项禁忌：禁忌：1、对本品成份有过敏史的病人。、对本品成份有过敏史的病人。 2、高热、严重心脏病、低血压者、高热、严重心脏病、低血压者 严重心肾功严重心肾功能不全者、肺功能异常或进行过器官移植能不全者、肺功能异常或进行过器官移植者。者。 3、重组人白细胞介素、重组人白细胞介素-2既往用药史中出现过既往用药史中出现过与之相关的毒性反应。与之相关的毒性反应。五、发展前景五、发展前景目
10、前研究是对其在用药前进行化学修饰，目前研究是对其在用药前进行化学修饰，主要采用主要采用PEG修饰：修饰：1.具具体有三聚氯氰活体有三聚氯氰活MPEG修饰修饰2.MPEG 硝基苯基碳酸盐修饰。硝基苯基碳酸盐修饰。3.修修饰物和饰物和rhlu-2的投入比、反应环境的的投入比、反应环境的PH、修饰反应的时间、修饰反应的时间、1%PEG4000的加入都会的加入都会影响到修饰产物的活性。影响到修饰产物的活性。五、发展前景五、发展前景修饰后的产物经过疏水层析和凝胶过滤即修饰后的产物经过疏水层析和凝胶过滤即可被提纯。可被提纯。目目前已经证明前已经证明rhIL-2 经不同的经不同的 PEG 化处理后，化处理后
11、，其循环半衰期均有不同程度的提高，其循环半衰期均有不同程度的提高，其其水溶性也得到极大提高，可不用水溶性也得到极大提高，可不用 SDS 助助溶在常温下保持长期稳定。溶在常温下保持长期稳定。参考文献参考文献1、中国药典中国药典2010版第三部；版第三部；2、重组人白细胞介素重组人白细胞介素-2 的化学修饰的化学修饰，吉，吉林大学，邹显峰；林大学，邹显峰；3、重组人白细胞介素重组人白细胞介素-2对人胃癌细胞对人胃癌细胞SGC7901/ADR多药耐药性的逆转研究多药耐药性的逆转研究, 大大连医科大学，屈重霄；连医科大学，屈重霄；4、重组人白细胞介素重组人白细胞介素-2的分离纯化及性质的分离纯化及性质鉴定鉴定，中国药科大学，李海娟，中国药科大学，李海娟陈炜陈炜 20095324
