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1、杨树组织培养报告人：张文林2015.7.1611、培养基及外源激素的选择 2、外植体 3、分化培养 4、生根培养 5、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法2 杨树杨树(Poplar)(Poplar)是重要的速生经济树种。扦插是是重要的速生经济树种。扦插是杨树的传统繁殖方式，由于年龄效应，多代扦插后杨树的传统繁殖方式，由于年龄效应，多代扦插后容易出现退化，通过脱毒复壮和杂交育种后，性状容易出现退化，通过脱毒复壮和杂交育种后，性状才能恢复。近年来生物技术的发展为杨树快繁和遗才能恢复。近年来生物技术的发展为杨树快繁和遗传改良开辟了广阔的前景。通过嫩枝、幼茎、嫩叶、传改良开辟了广阔的前景。通过嫩枝、
2、幼茎、嫩叶、叶柄、生长点和原生质体等的离体培养，可在短期叶柄、生长点和原生质体等的离体培养，可在短期内获得大量优质杨树苗木。内获得大量优质杨树苗木。3一一. .培养基及外源激素的选择培养基及外源激素的选择 培养基的种类是影响组培苗生长的关键因素。目培养基的种类是影响组培苗生长的关键因素。目前，在杨树组织培养的过程中前，在杨树组织培养的过程中MS、1/2MS、WPM等培养等培养基都有广泛的应用。基都有广泛的应用。MS与与WFM培养基均属于高盐培养基，培养基均属于高盐培养基，可以提供木本植物生长所需的盐类。可以提供木本植物生长所需的盐类。1 1、培养基的种类、培养基的种类4 张蕾等在京张蕾等在京2
3、 2杨再生体系建立的研究中提出，由杨再生体系建立的研究中提出，由于京于京2 2杨生长需要较高的营养，杨生长需要较高的营养，MS和和WPM培养基明显培养基明显优于优于GMS培养基，且培养基，且MS培养基更适于培养基更适于腋芽腋芽的启动和生的启动和生长。在长。在3535杨叶片不定芽诱导过程中，杨叶片不定芽诱导过程中，WPM培养基诱导培养基诱导芽迅速，芽发育正常且集中生长于切面大小叶脉处，芽迅速，芽发育正常且集中生长于切面大小叶脉处，各项指标均优于各项指标均优于MS培养基。不同杨树的生长环境与培养基。不同杨树的生长环境与生物学特性不同，导致适合其诱导、增殖及生根生生物学特性不同，导致适合其诱导、增殖
4、及生根生长的培养基不同。所以，杨树组织培养时，不能片长的培养基不同。所以，杨树组织培养时，不能片面评价培养基的优或劣。面评价培养基的优或劣。一一. .培养基及外源激素的选择培养基及外源激素的选择52.2.外源激素的选择外源激素的选择 植物组织培养过程中，外源生长调节剂是影响培植物组织培养过程中，外源生长调节剂是影响培养物形态建成的主要因子，细胞分裂素主要用于促进养物形态建成的主要因子，细胞分裂素主要用于促进细胞分裂和由器官或愈伤组织上分化不定芽，生长素细胞分裂和由器官或愈伤组织上分化不定芽，生长素则被用于诱导细胞的分裂和根的分化。在杨树的分化则被用于诱导细胞的分裂和根的分化。在杨树的分化培养过
5、程中，通常选用的细胞分裂素是培养过程中，通常选用的细胞分裂素是6-BA、ZT、 KT等，生长素为等，生长素为NAA。一一. .培养基及外源激素的选择培养基及外源激素的选择6 康薇等对美洲黑杨叶片离体再生的研究中指出，康薇等对美洲黑杨叶片离体再生的研究中指出，不同细胞分裂素与不同细胞分裂素与0.02 mg/L NAA0.02 mg/L NAA配合诱导叶片不定配合诱导叶片不定芽，其效果差异明显，芽，其效果差异明显，0.02 mg /L 6-BA0.02 mg /L 6-BA分化率为分化率为91.1%, ZT91.1%, ZT次之，次之，KTKT浓度小于浓度小于0. 2 mg/L0. 2 mg/L时
6、只分化出根。时只分化出根。一一. .培养基及外源激素的选择培养基及外源激素的选择7 Wang Wang等在对银中杨茎段的离体再生研究中指出，等在对银中杨茎段的离体再生研究中指出，采用采用MSMS为基础培养基，附加较低浓度的为基础培养基，附加较低浓度的TDZTDZ，采用正常，采用正常光和黄光为光源，有利于银中杨茎段不定芽的分化，光和黄光为光源，有利于银中杨茎段不定芽的分化，而采用而采用B5B5为基础培养基附加较高浓度的为基础培养基附加较高浓度的TDZTDZ会对不定芽会对不定芽的分化产生抑制。将的分化产生抑制。将TDZTDZ与与6 -BA6 -BA配合使用效果明显优配合使用效果明显优于单独使用，在
7、新疆杨和河北杨叶片不定芽诱导的过于单独使用，在新疆杨和河北杨叶片不定芽诱导的过程中添加程中添加0.25mg/L 6-BA+0.01mg/LTDZ0.25mg/L 6-BA+0.01mg/LTDZ与单独使用与单独使用TDZTDZ相比，河北杨与新疆杨叶片分化率分别相比，河北杨与新疆杨叶片分化率分别增加增加了了14.82%14.82%和和25.00%25.00%。一一. .培养基及外源激素的选择培养基及外源激素的选择8 陈伟纶等和诸葛强等的研究中也均发现此种现陈伟纶等和诸葛强等的研究中也均发现此种现象。不同的细胞分裂素其作用机理不同，以一定比象。不同的细胞分裂素其作用机理不同，以一定比例配合使用，可
8、以实现生物学的互补效应，有望在例配合使用，可以实现生物学的互补效应，有望在组织培养中产生更理想的效果组织培养中产生更理想的效果一一. .培养基及外源激素的选择培养基及外源激素的选择9二、外植体二、外植体 任何具有完整细胞核的植物细胞都具有细胞全能任何具有完整细胞核的植物细胞都具有细胞全能性。研究发现，与茎尖分生组织接连的组织具有较强性。研究发现，与茎尖分生组织接连的组织具有较强的形态发生能力。因此，外植体选取的原则为尽量选的形态发生能力。因此，外植体选取的原则为尽量选择幼嫩的部位，外植体越幼嫩，植株越容易再生。目择幼嫩的部位，外植体越幼嫩，植株越容易再生。目前，国内外研究者均采用直接采集外植体
9、或采用截取前，国内外研究者均采用直接采集外植体或采用截取水培或沙培后长出幼嫩部分作为外植体的方式，进行水培或沙培后长出幼嫩部分作为外植体的方式，进行离体快繁。离体快繁。1 1、外植体的选择、外植体的选择10 沈周高等利用中林沈周高等利用中林20012001杨、南林杨、南林9595杨和南抗杨这杨和南抗杨这3 3种黑杨杂种的叶片作为外植体，在产生的愈伤组织种黑杨杂种的叶片作为外植体，在产生的愈伤组织上成功诱导出苗。上成功诱导出苗。 丁霞等诱导胡杨叶丁霞等诱导胡杨叶30d30d后产生大量丛生芽。后产生大量丛生芽。 张春霞等对滇杨叶柄进行张春霞等对滇杨叶柄进行10 d10 d的诱导后产生绿色的诱导后产
10、生绿色芽点，芽点，30d30d时长出丛生芽。时长出丛生芽。二、外植体二、外植体11 易丽娟等利用中林美荷杨叶柄为外植体对其组织易丽娟等利用中林美荷杨叶柄为外植体对其组织培养及植株再生进行研究并取得了成功。培养及植株再生进行研究并取得了成功。 朱湘渝等利用朱湘渝等利用BNBN、N6N6、MSMS等等5 5种培养基诱导杨树花种培养基诱导杨树花药，也成功诱导出了杨树单倍体植株。药，也成功诱导出了杨树单倍体植株。 但于志水等在研究中指出水培苗的茎尖容易褐化，但于志水等在研究中指出水培苗的茎尖容易褐化，不易作为外植体。不易作为外植体。二、外植体二、外植体12 从上述研究结果的诱导时间来看，茎段所需时从上
11、述研究结果的诱导时间来看，茎段所需时间最短，叶片与花药所需时间较长。实践证明，杨间最短，叶片与花药所需时间较长。实践证明，杨树组织培养中，腋芽、茎尖、叶片均为较好的外植树组织培养中，腋芽、茎尖、叶片均为较好的外植体材料。体材料。二、外植体二、外植体132 2、外植体的消毒、外植体的消毒二、外植体二、外植体 在杨树无菌体系的建立中，外植体常用乙醇、在杨树无菌体系的建立中，外植体常用乙醇、次氯酸钠、氯化汞、双氧水和吐温等作为消毒剂。次氯酸钠、氯化汞、双氧水和吐温等作为消毒剂。叶片通常先采用叶片通常先采用70%-75%70%-75%乙醇处理乙醇处理10-60s10-60s再用再用HgCl2HgCl2
12、处理处理3-8min 3-8min 或次氯酸钠处理或次氯酸钠处理2-10 min,2-10 min,茎段、茎尖茎段、茎尖和腋芽在消毒中通常选用乙醇消毒和腋芽在消毒中通常选用乙醇消毒30-60s,30-60s,再用滴加再用滴加1-21-2滴叶温的滴叶温的HgCl2HgCl2溶液处理溶液处理5-15 min5-15 min。14 沈周高等对沈周高等对3 3种黑杨杂种叶片进行不同时长的消种黑杨杂种叶片进行不同时长的消毒处理，结果表明，毒处理，结果表明，0.1%Hgcl20.1%Hgcl2溶液消毒溶液消毒4 min4 min为最为最佳处理，叶片污染率为佳处理，叶片污染率为20%20%，出愈率为，出愈率
13、为76%76%。 金顺玉等利用叶片作为外植体，用金顺玉等利用叶片作为外植体，用75%75%乙醇消乙醇消毒毒1min1min附加附加NaClONaClO消毒消毒2min2min即获得了无菌苗。即获得了无菌苗。二、外植体二、外植体15 研究发现，将杨树半木质化新稍浸泡在蒸馏水研究发现，将杨树半木质化新稍浸泡在蒸馏水中中30 min30 min使其吸饱水分，可以减少使其吸饱水分，可以减少HgCl2HgCl2对其内部对其内部细胞组织的侵害。一般情况下，从优树上直接截取细胞组织的侵害。一般情况下，从优树上直接截取的外植体通常需要较复杂的消毒手段和较长的消毒的外植体通常需要较复杂的消毒手段和较长的消毒时间
14、，而茎尖与茎段等部位消毒时间长于叶片。另时间，而茎尖与茎段等部位消毒时间长于叶片。另外，对于花粉、子房、未成熟种子等多层包被的微外，对于花粉、子房、未成熟种子等多层包被的微小材料，为了不影响生长，可不经消毒。小材料，为了不影响生长，可不经消毒。二、外植体二、外植体16三、分化培养三、分化培养 在杨树组织培养过程中，不同类型的外植体经在杨树组织培养过程中，不同类型的外植体经过人工诱导，都能够重新开始细胞分裂与器官分化，过人工诱导，都能够重新开始细胞分裂与器官分化，长出根、芽等器官，最终形成完整植株。不同部位长出根、芽等器官，最终形成完整植株。不同部位的外植体的大小及摆放方式直接影响杨树组织培养的
15、外植体的大小及摆放方式直接影响杨树组织培养的分化率及成活率。的分化率及成活率。17 王树耀等指出王树耀等指出84K84K杨树叶的不同着生部位和同一杨树叶的不同着生部位和同一叶片的不同切块均对不定芽的诱导有影响，从第叶片的不同切块均对不定芽的诱导有影响，从第1 1片片叶到第叶到第5 5片叶不定芽诱导总数递减，叶片上切段、中片叶不定芽诱导总数递减，叶片上切段、中切段、下切段不定芽的诱导率分别为切段、下切段不定芽的诱导率分别为12.0%12.0%、13.3%13.3%、73.3%73.3%，不同切段不定芽诱导率存在显著差异，这可，不同切段不定芽诱导率存在显著差异，这可能是由于能是由于内源激素水平不同
16、内源激素水平不同引起的。引起的。三、分化培养三、分化培养18 沈周高等在研究了沈周高等在研究了3 3种黑杨杂种种黑杨杂种叶片不同放置方叶片不同放置方式式诱导愈伤后指出，叶片放置方式对于愈伤组织的诱导愈伤后指出，叶片放置方式对于愈伤组织的诱导有显著影响，叶片正面向上的诱导率明显高于诱导有显著影响，叶片正面向上的诱导率明显高于向下的。但在对胡杨的研究中，叶片不同放置方式向下的。但在对胡杨的研究中，叶片不同放置方式对于分化培养差异不大，这可能是由于不同的材料对于分化培养差异不大，这可能是由于不同的材料其表皮上气孔的数目、分布均不同，而这种差异导其表皮上气孔的数目、分布均不同，而这种差异导致叶片在离体
17、条件下对营养成分的吸收与利用不同。致叶片在离体条件下对营养成分的吸收与利用不同。三、分化培养三、分化培养19 研究还表明，采用研究还表明，采用畸形、浅绿、皱缩叶片畸形、浅绿、皱缩叶片作为作为外植体培养，将直接影响叶片的诱导过程，生长速外植体培养，将直接影响叶片的诱导过程，生长速度缓慢，难以成苗。宋玉霞等在进行银河度缓慢，难以成苗。宋玉霞等在进行银河1 1号杨树叶号杨树叶外植体再生体系建立的研究中指出，利用无菌生根外植体再生体系建立的研究中指出，利用无菌生根试管植株叶片作为外植体，在分化时间、分化率、试管植株叶片作为外植体，在分化时间、分化率、分化芽数方面均优于无菌无根试管植株叶片。茎段分化芽数
18、方面均优于无菌无根试管植株叶片。茎段诱导培养中通常采用诱导培养中通常采用1cm1cm大小的外植体，较容易诱导大小的外植体，较容易诱导出芽。出芽。三、分化培养三、分化培养20四、生根培养四、生根培养 杨树的生根培养大都采用杨树的生根培养大都采用1/2MS1/2MS为基础培养基，为基础培养基，附加一定量的附加一定量的NAA, lAA, IBANAA, lAA, IBA。汪建亚等在山地杨的。汪建亚等在山地杨的快速繁殖研究中指出，以快速繁殖研究中指出，以1/2MS1/2MS为基础培养基附加为基础培养基附加0.05mg/L NAA0.05mg/L NAA时，生根率达时，生根率达100%100%，但添加，
19、但添加lAAlAA后进行后进行生根培养时，效果普遍较差。林元震等在甜杨的组生根培养时，效果普遍较差。林元震等在甜杨的组织培养和快速繁殖研究中指出，采用织培养和快速繁殖研究中指出，采用1/41/4改良改良MS+0.1 MS+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA;mg/L IBA+0.1 mg/L NAA;进行生根培养，生根率可进行生根培养，生根率可达达100%100%，根短而粗，根数多。，根短而粗，根数多。21 史绍林等在新西伯利亚银白杨的根诱导过程中史绍林等在新西伯利亚银白杨的根诱导过程中发现，发现，IBAIBA与与NAANAA配合使用效果明显优于单独使用，配合使用效果明显优于单
20、独使用，两者配合使用时两者配合使用时NAANAA浓度应高于浓度应高于IBAIBA浓度，但浓度，但NAANAA浓度浓度过高易产生大块愈伤。当采用过高易产生大块愈伤。当采用1/2MS+0.1 mg/L 1/2MS+0.1 mg/L NAA+0.02 mg/L IBANAA+0.02 mg/L IBA作为根诱导培养基配方时，生根作为根诱导培养基配方时，生根率达率达90%90%，根数多，生长健壮。，根数多，生长健壮。四、生根培养四、生根培养22 史绍林等在山新杨的组培育苗过程中，采用史绍林等在山新杨的组培育苗过程中，采用了简化生根培养，在生根培养基中用一定比例的了简化生根培养，在生根培养基中用一定比例
21、的蛙石、草炭土、珍珠岩替代琼脂，用过滤自来水蛙石、草炭土、珍珠岩替代琼脂，用过滤自来水替代蒸馏水，混合培养基污染率儿乎为零，生根替代蒸馏水，混合培养基污染率儿乎为零，生根率达率达96%96%。后者有望替代传统生根培养，以获得更。后者有望替代传统生根培养，以获得更多高质量、高成活率的杨树幼苗。多高质量、高成活率的杨树幼苗。四、生根培养四、生根培养23五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法1 1、褐变现象、褐变现象褐变概念褐变概念 ：褐变是指外植体在诱导脱分化或再分化：褐变是指外植体在诱导脱分化或再分化过程中，自身组织从表面向培养基释放褐色物质，过程中
22、，自身组织从表面向培养基释放褐色物质，以至培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变以至培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。褐而死亡的现象。24克服外植体褐变措施克服外植体褐变措施：（1 1）选择适当的外植体选择适当的外植体 选择生长旺盛的，分生能力选择生长旺盛的，分生能力强的部位作为外植体材料，在进行组织培养过程中不强的部位作为外植体材料，在进行组织培养过程中不易产生褐变。易产生褐变。（2 2）培养材料进行预处理培养材料进行预处理 将外植体用流水冲洗后，将外植体用流水冲洗后，在在55左右处理左右处理1224h1224h，消毒后先接种在只含有蔗糖的，消毒后先接种在只含有蔗糖的
23、培养基上培养基上57d57d，使组织中的酚类物质部分先渗入培养，使组织中的酚类物质部分先渗入培养基。取出外植体，用适当方法清洗，再接种到适合的基。取出外植体，用适当方法清洗，再接种到适合的培养基上，可减轻外植体的褐变。培养基上，可减轻外植体的褐变。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法25（3 3）选择适当的培养基和培养条件选择适当的培养基和培养条件 在培养基的选在培养基的选择上应注意适当的无机盐成分、蔗糖浓度、激素水平择上应注意适当的无机盐成分、蔗糖浓度、激素水平与组合以及配合一些抗褐变剂等都可减轻褐变现象的与组合以及配合一些抗褐变剂等都可减轻褐
24、变现象的发生。培养过程中还要注意适宜的培养条件，因为在发生。培养过程中还要注意适宜的培养条件，因为在酚类物质的合成和氧化过程中，有许多酶系统参与，酚类物质的合成和氧化过程中，有许多酶系统参与，其中部分酶系统是光活性的。较高的温度会使酶促褐其中部分酶系统是光活性的。较高的温度会使酶促褐变加强。所以建议在培养初期保持较低的温度变加强。所以建议在培养初期保持较低的温度(15-20 (15-20 ) )，黑暗或弱光下培养，均可减轻培养材料的褐变。，黑暗或弱光下培养，均可减轻培养材料的褐变。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法262.2.污染的原因及对策污
25、染的原因及对策 污染是指在植物组织培养过程中，培养基和污染是指在植物组织培养过程中，培养基和培养材料滋生杂菌，最终导致培养失败的现象。培养材料滋生杂菌，最终导致培养失败的现象。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法27（1 1）细菌污染及对策）细菌污染及对策 细菌性污染的主要症状是材料附近出现载液状和发细菌性污染的主要症状是材料附近出现载液状和发酵泡沫状物体，或在材料附近的培养基中出现混浊和云酵泡沫状物体，或在材料附近的培养基中出现混浊和云雾状痕迹。一般在接种后雾状痕迹。一般在接种后1-2d1-2d即可发现。外植体带菌污即可发现。外植体带菌污染的解
26、决措施是对外植体进行彻底消毒。即根据不同材染的解决措施是对外植体进行彻底消毒。即根据不同材料选择合适的消毒剂和消毒方法料选择合适的消毒剂和消毒方法; ;对特殊材料先进行预对特殊材料先进行预处理处理; ;对材料内部带菌的组织，在培养基中加入适量抗对材料内部带菌的组织，在培养基中加入适量抗生素，以达最佳消毒效果。此外，培养基的灭菌力求彻生素，以达最佳消毒效果。此外，培养基的灭菌力求彻底，而且操作人员要严格按照无菌操作顺序操作。底，而且操作人员要严格按照无菌操作顺序操作。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法28（2 2）真菌污染及对策）真菌污染及对策
27、真菌性污染主要指霉菌引起的污染，一般接种后真菌性污染主要指霉菌引起的污染，一般接种后3 -8 3 -8 d d可在培养基中发现各种颜色的菌斑。多由空气污染和瓶可在培养基中发现各种颜色的菌斑。多由空气污染和瓶口边缘以及取放封口纸扬起的灰尘和真菌抱子落入器皿中口边缘以及取放封口纸扬起的灰尘和真菌抱子落入器皿中造成。因此，每次使用接种室和超净工作台前，先用紫外造成。因此，每次使用接种室和超净工作台前，先用紫外线灯杀菌线灯杀菌20 min20 min，再用，再用75%75%的酒精喷雾降尘。接种时先用的酒精喷雾降尘。接种时先用75%75%的酒精棉球擦拭瓶子外部，然后再放入超净台。接种的酒精棉球擦拭瓶子外
28、部，然后再放入超净台。接种时，瓶子要拿成斜角，瓶口放在火焰上方，利用气流上升时，瓶子要拿成斜角，瓶口放在火焰上方，利用气流上升的原理，以阻止空气中飘扬的抱子落入瓶内，取封口纸时的原理，以阻止空气中飘扬的抱子落入瓶内，取封口纸时动作要轻。另外，如发现霉菌污染应及时清除。动作要轻。另外，如发现霉菌污染应及时清除。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法29（3 3）内源菌污染及对策）内源菌污染及对策 在植物组织培养过程中，较难处理的是内源菌污染。在植物组织培养过程中，较难处理的是内源菌污染。内源菌污染是由于外植体材料内部的微生物内源菌污染是由于外植体材料
29、内部的微生物( (如内生细菌、如内生细菌、真菌等真菌等) )不能被一般的表面消毒方法所清除，随着材料带不能被一般的表面消毒方法所清除，随着材料带入培养过程造成的。针对内源菌污染，有以下防治对策入培养过程造成的。针对内源菌污染，有以下防治对策: :改进外植体消毒方法改进外植体消毒方法。反复检查培养物反复检查培养物。使用抗使用抗生素生素。抗生素能抑制污染菌的生长，在使用初期效果较好。抗生素能抑制污染菌的生长，在使用初期效果较好。但抗生素不能完全杀死污染菌，因此潜伏的污染可能会给但抗生素不能完全杀死污染菌，因此潜伏的污染可能会给植物以后的生长带来问题植物以后的生长带来问题。五、杨树组织培养中应注意的
30、问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法30玻璃化概念：玻璃化是指在培养过程中材料玻璃化概念：玻璃化是指在培养过程中材料呈半透明状，组织结构发育畸形的现象，又呈半透明状，组织结构发育畸形的现象，又称称“过度水化过度水化“。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法3 3、玻璃化现象、玻璃化现象31（1 1）玻璃化防治对策）玻璃化防治对策 利用固体培养，增加琼脂浓度，降低培养基的利用固体培养，增加琼脂浓度，降低培养基的衬质势，造成细胞吸水阻遏，可降低玻璃化。琼脂衬质势，造成细胞吸水阻遏，可降低玻璃化。琼脂浓度应不低于浓度应不低于0.8%
31、0.8%，条状琼脂先用双蒸水浸泡，条状琼脂先用双蒸水浸泡24 h24 h去除杂质，粉状琼脂应尽可能选用含灰量低于去除杂质，粉状琼脂应尽可能选用含灰量低于2. 5%2. 5%的琼脂粉。因为琼脂杂质中的的琼脂粉。因为琼脂杂质中的Ca2+Ca2+、Mg2+Mg2+、Fe2+Fe2+、Zn2Zn2十、十、Cu2+Cu2+等含量较高，会影响培养基中矿质元素等含量较高，会影响培养基中矿质元素的含量和比例。的含量和比例。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法32 玻璃化发生是玻璃化发生是“生长因子不平衡的产物生长因子不平衡的产物”、是培、是培养物养物“中毒中毒”
32、、不能很好适应培养基和培养环境的、不能很好适应培养基和培养环境的结果。因而提高培养物对逆境的耐受能力是有益结果。因而提高培养物对逆境的耐受能力是有益的。可适当提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，的。可适当提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，降低培养基中的渗透势，减少培养基中植物材料降低培养基中的渗透势，减少培养基中植物材料可获得的水分，造成水分胁迫。可获得的水分，造成水分胁迫。33 注意通气，尽可能降低培养容器内的相对空注意通气，尽可能降低培养容器内的相对空气湿度和改善氧气供应状况。目前较多使用塑料气湿度和改善氧气供应状况。目前较多使用塑料薄膜封口，要注意薄膜的通透性或改用透气膜。薄膜封口，要注意
33、薄膜的通透性或改用透气膜。 适当降低培养基中适当降低培养基中NH4+NH4+浓度，或者及时转移，浓度，或者及时转移，使使NH4+NH4+浓度高低交替浓度高低交替; ;适当提高培养基中的适当提高培养基中的Ca2+Ca2+浓浓度度; ;注意细胞分裂素和生长素的配合以及激素和注意细胞分裂素和生长素的配合以及激素和K+K+之间的配合，以兼顾不定芽增殖系数和抑制玻璃化之间的配合，以兼顾不定芽增殖系数和抑制玻璃化的发生。的发生。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法34控制温度，适当进行低温处理，避免过高的培养控制温度，适当进行低温处理，避免过高的培养温度，可消除玻璃化。温度，可消除玻璃化。五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法增加自然光照。试验发现，玻璃苗放于自然光下几增加自然光照。试验发现，玻璃苗放于自然光下几天后，玻璃化逐渐消失。天后，玻璃化逐渐消失。3536
