《植物生理学实验-植物组织中硝态氮测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物生理学实验-植物组织中硝态氮测定（15页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、植物体内硝态氮含量的测定 1教师提前烧水，讲解完内容后打开分光光度计开关2学生进教室先做硝态氮提取，后讲解实验内容。小白菜：小白菜：绿叶片、绿叶片、叶柄叶柄两个小组合作：两个小组合作： 一个小组测叶片，一个小组测叶片， 另一个小组测叶柄。另一个小组测叶柄。二者必须是同几株上的材料。二者必须是同几株上的材料。 三、实验材料三、实验材料材料剪碎、混匀材料剪碎、混匀精确称取精确称取 ，3 3份重复份重复放入具塞试管，加去离子水至放入具塞试管，加去离子水至10ml10ml沸水浴中提取沸水浴中提取30min30min( (最好最好2 2次，本实验提取次，本实验提取1 1次次) )塞子封口，橡皮筋捆扎在一
2、起塞子封口，橡皮筋捆扎在一起同几株小白菜（一组叶片、另一组叶柄）同几株小白菜（一组叶片、另一组叶柄）注：注：2个小组合作，结果共用，一起分析个小组合作，结果共用，一起分析一、测定意义：1 1、作为施肥指标：、作为施肥指标： 植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况。包括：硝态氮、亚硝态氮。供应情况。包括：硝态氮、亚硝态氮。 2 2、鉴定蔬菜及其加工品质、鉴定蔬菜及其加工品质：蔬蔬菜菜类类作作物物特特别别是是叶叶菜菜和和根根菜菜中中常常含含有有大大量量硝硝酸酸盐盐，在在烹烹调调和和腌腌制制过过程程中中可可转转化化为为亚亚硝硝酸酸盐盐而而危危害害健健康康。因因此
3、此，硝硝酸酸盐盐含含量量又又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。 人人人人体体体体摄摄摄摄入入入入的的的的硝硝硝硝态态态态氮氮氮氮来来来来自自自自蔬蔬蔬蔬菜菜菜菜，当当当当人人人人摄摄摄摄取取取取硝硝硝硝酸酸酸酸盐盐盐盐量量量量较较较较大大大大时时时时，体体体体内内内内的的的的NONONONO3 3 3 3还还还还原原原原成成成成NONONONO2 2 2 2进进进进入入入入血血血血液液液液，将将将将血血血血液液液液中中中中的的的的血血血血红红红红素素素素变变变变成成成成高高高高铁铁铁铁蛋蛋蛋蛋白白白白，引引引引起起起起肌肌肌肌体体体体中中中中毒毒毒毒。NONO
4、NONO2 2 2 2还还还还可可可可间间间间接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。 咸咸咸咸菜菜菜菜的的的的淹淹淹淹制制制制初初初初期期期期咸咸咸咸菜菜菜菜内内内内会会会会大大大大量量量量积积积积累累累累硝硝硝硝酸酸酸酸盐盐盐盐，硝硝硝硝酸酸酸酸盐盐盐盐含含含含量量量量升升升升高高高高数数数数倍倍倍倍或或或或数数数数十十十十倍倍倍倍，当当当当咸咸咸咸菜菜菜菜淹淹淹淹制制制制成成成成熟熟熟熟后后后后硝硝硝硝酸酸酸酸盐盐盐盐含含含含量量量量减减减减少少少少（很很很很低低低低），所所所所以以以
5、以，咸咸咸咸菜菜菜菜没没没没有有有有淹淹淹淹制制制制完完完完成成成成之之之之前前前前，不要食用。不要食用。不要食用。不要食用。 青青青青菜菜菜菜放放放放置置置置时时时时间间间间延延延延长长长长一一一一天天天天，体体体体内内内内的的的的硝硝硝硝酸酸酸酸盐盐盐盐含含含含量量量量会会会会不不不不断断断断增增增增加加加加，购购购购买买买买蔬蔬蔬蔬菜菜菜菜后后后后及及及及时时时时食食食食用用用用，不不不不要要要要放放放放置置置置时时时时间间间间过过过过长长长长，减少硝酸盐的积累。减少硝酸盐的积累。减少硝酸盐的积累。减少硝酸盐的积累。 二、测定原理：水杨酸法 在浓酸条件下，在浓酸条件下，NO3NO3与水杨
6、酸反应，与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。生成硝基水杨酸。 硝硝基基水水杨杨酸酸在在碱碱性性条条件件下下（pH12pH12）呈呈黄黄色色，最最大大吸吸收收峰峰的的波波长长为为410nm410nm，在在一一定定范范围围内内，其其颜颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。三、材料： 小白菜所用仪器、试剂已备好在实验台上所用仪器、试剂已备好在实验台上四、操作步骤程序：410410+6.30 +6.30 (S22P(S22P型分光光度计型分光光度计) )2 2样品液的制备样品液的制备3 3样品液的测定样品液的测定比色比色4. 4. 结果计算结果计算1 1标准曲线的制作
7、（学生不做）标准曲线的制作（学生不做）过滤到过滤到25ml25ml容量瓶，容量瓶，去离子水冲洗残渣，定容去离子水冲洗残渣，定容材料剪碎、混匀材料剪碎、混匀精确称取精确称取 ，3 3份重复份重复放入具塞试管，加去离子水放入具塞试管，加去离子水10ml10ml沸水浴中提取沸水浴中提取30min30min塞子封口，橡皮筋捆扎在一起塞子封口，橡皮筋捆扎在一起自来水冷却自来水冷却2 2个小组合作，结果共用分析个小组合作，结果共用分析同几株材料同几株材料同几株材料同几株材料一组叶片、另一组叶柄一组叶片、另一组叶柄一组叶片、另一组叶柄一组叶片、另一组叶柄2 2、样品液的制备、样品液的制备容量瓶、漏斗容量瓶、
8、漏斗洗刷一遍洗刷一遍3 3、样品液的测定、样品液的测定比色比色4 4支试管支试管 空白试管空白试管样品试管样品试管3 3支支加加5%5%水杨酸水杨酸- -硫酸硫酸( ( ( (在磁盘中加在磁盘中加在磁盘中加在磁盘中加! ! ! ! 移液管立即冲洗移液管立即冲洗移液管立即冲洗移液管立即冲洗) ) ) ) 冷却比色冷却比色(410nm)(410nm)加加 9.3ml 8% NaOH 9.3ml 8% NaOH加蒸馏水加蒸馏水各加样品液各加样品液试管洗刷一遍试管洗刷一遍试管洗刷一遍试管洗刷一遍, , , ,防止不防止不防止不防止不净致重复间误差较大净致重复间误差较大净致重复间误差较大净致重复间误差较
9、大溶液加到试管溶液加到试管溶液加到试管溶液加到试管底部，以免影底部，以免影底部，以免影底部，以免影响结果重复性响结果重复性响结果重复性响结果重复性两组合作测定须用两组合作测定须用同一台分光光度计同一台分光光度计使用强酸、强碱一定注使用强酸、强碱一定注使用强酸、强碱一定注使用强酸、强碱一定注意安全，如意外发生外意安全，如意外发生外意安全，如意外发生外意安全，如意外发生外溅立即用水冲洗和擦洗溅立即用水冲洗和擦洗溅立即用水冲洗和擦洗溅立即用水冲洗和擦洗室温放置室温放置10min10min 分光光度计：比色杯用水冲洗，擦镜纸擦分光光度计：比色杯用水冲洗，擦镜纸擦净；比色杯倒液不超净；比色杯倒液不超2/
10、32/3；用完后及时洗净；用完后及时洗净! ! 废液（因含浓酸、碱）倒在专门收集容器废液（因含浓酸、碱）倒在专门收集容器内，切勿倒入水池内内，切勿倒入水池内!测定结束后，将试管彻底洗刷干净（因含测定结束后，将试管彻底洗刷干净（因含强碱），倒置在试管架上强碱），倒置在试管架上! !注意事项注意事项：式中：式中：C C标准方程计算得标准方程计算得NONO3 3- -N N浓度浓度 V V提取样品液总量提取样品液总量 W W样品鲜重样品鲜重4、结果计算（课后计算）：、结果计算（课后计算）：NONO3 3- -NN含量含量(g/g) =(g/g) =CVCVW 结果记录：记载表老师签字 用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去 值日生负责注意值日生负责注意: 清理分光光度计、比色皿、台面清洗。清理分光光度计、比色皿、台面清洗。下一个实验：地点：B125# 第8周植物叶片光合、蒸腾和呼吸速率的测定植物叶片光合、蒸腾和呼吸速率的测定 ( (实验实验19)19)叶绿素荧光参数的测定叶绿素荧光参数的测定 ( (实验讲义实验讲义) )
