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1、实验八实验八 细菌鉴定中常用的生化实验细菌鉴定中常用的生化实验;一、实验目的一、实验目的l掌握糖发酵实验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。l掌握以上实验的用途。;二、实验原理二、实验原理l淀粉实验l糖发酵实验l 发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 溴甲酚紫变色范围pH5.26.8, pH6.8紫色 l 发酵后产生的气体： 甲烷、氢、二氧化碳等杜氏小管内有气泡，产气漂浮;糖发酵实验景象;二、实验原理二、实验原理lM.R.及V.P实验l 甲基红实验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、l乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培育基就会变酸，使参与培育基l的甲基红指示剂由橘黄
2、色变为红色。;二、实验原理二、实验原理lM.R.及V.P实验l VP实验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的才干，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。;二、实验原理二、实验原理l吲哚实验l 吲哚实验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，构成红色的玫瑰吲哚。;三、实验器材三、实验器材l培育基l1、淀粉培育基 :500ml分装于四个三角瓶，包扎，121126灭菌30minl蛋白胨 10g 可溶性
3、淀粉 2gl氯化钠 5g 琼脂 1520gl牛肉膏 5g 水 1000ml lpH 7.2l2、糖发酵培育基：300ml分装于28只试管，包扎，112115灭菌30minl蛋白胨 10g 氯化钠 5g l葡萄糖 10g 水 1000mll pH 7.4 溴甲酚紫溶液1.6%水溶液1ml l3、M.R.及V.P实验:600ml分装于56只试管，包扎，112115灭菌30minl蛋白胨 5g K2HPO4 5g l葡萄糖 5g 水 1000ml lpH 7.27.4l4、吲哚培育基:300ml分装于28只试管，包扎，121126灭菌30minl蛋白胨 10g 氯化钠 5g l水 1000ml pH
4、 7.6;三、实验器材三、实验器材l菌种l1、大肠杆菌l2、枯草芽孢杆菌l3、未知菌l其他l1、试管6组 28个/组每个试管带一个德汉氏小管l2、平皿2组 16个/组l3、三角瓶2组 8个/组;四、实验步骤四、实验步骤一预备实验器材，配制培育基一预备实验器材，配制培育基二接种培育二接种培育二接种培育二接种培育;试验名称被接菌种1被接菌种2被接菌种3对照（管数）1.淀粉水解实验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种2.糖发酵大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种3.MR试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种4.VP试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种5.
5、吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌葡萄球菌1支/每组不接种;三结果察看三结果察看l葡萄糖/乳糖发酵实验，H2S产生实验直接察看。lVP实验：去塞，加40KOH 15滴，振荡，再加等量奈酚，振荡，37振荡培育30min，察看。lMR实验：加甲基红试剂23滴，察看。l吲哚实验：加1ml乙醚作用是萃取出吲哚。振荡，静止片刻使分层，沿管壁渐渐参与吲哚试剂10滴，察看。;五、实验结果及分析五、实验结果及分析试验名称1.淀粉水解实验2.糖发酵3.MR试验4.VP试验5.吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌金黄色葡萄球菌对照;六、思索题六、思索题1、糖发酵实验中，所安装的杜氏小管起什么作用？2 、V.P.实验与M.R.实验的最初作用物以及最终产物有什么异同？为什么会出现最终产物的不同。3、吲哚是细菌分解哪一种氨基酸的产物？;
