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1、ABO亚型简介(jin ji) 根据血型血清学试验所表现的抗原性强弱程度的分级量化等血根据血型血清学试验所表现的抗原性强弱程度的分级量化等血清学特征清学特征(tzhng)(tzhng)，可鉴别出各种，可鉴别出各种ABOABO亚型亚型 A A抗原亚型较多：主要是抗原亚型较多：主要是A1A1（占（占80%80%）和）和A2A2亚型（占亚型（占20%20%） ，其，其它的它的A A亚型（亚型（A3A3、AmAm、AxAx、AintAint、AelAel、AyAy等）较少见或罕见等）较少见或罕见 B B抗原的亚型比抗原的亚型比A A亚型少，较常见的有亚型少，较常见的有B1B1、B3B3、BmBm、Bx
2、Bx、BelBel等亚等亚型型 O O型血型中，常把孟买型、类孟买型和一些型血型中，常把孟买型、类孟买型和一些H H缺失型、缺失型、HmHm表型等表型等归类为归类为H H抗原的亚型抗原的亚型 第1页/共63页第一页，共64页。可以根据以下原则可以根据以下原则(yunz)(yunz)区分区分A A亚型亚型1.红细胞与抗A及抗A1的凝集强度；2.红细胞上与抗A，B的凝集强度；3.红细胞上H抗原强弱4.血清中是否(sh fu)存在抗A1;5.分泌型人唾液中A及H物质的存在第2页/共63页第二页，共64页。A1 和 A2 亚型区别：A1和A2是血型血清学方法(fngf)确定的最重要的A型红细胞亚型。
3、有两种有两种A A型抗原型抗原(kngyun)(kngyun)：A A和和A1A1A1A1亚型的红细胞上具有亚型的红细胞上具有A1A1和和A A抗原抗原(kngyun)(kngyun)，其血清中含有抗，其血清中含有抗B B抗体；抗体；A2A2亚型的红亚型的红细胞上只有细胞上只有A A抗原抗原(kngyun)(kngyun)，其血清中除含抗，其血清中除含抗B B抗体外，还可能有少量抗抗体外，还可能有少量抗A1A1抗体。抗体。第3页/共63页第三页，共64页。A1型红细胞A2型红细胞与抗A血清反应4+4+与抗A1血清反应4+抗原位点数目 成人1000000250000脐血310000140000-
4、乙酰-D-半乳糖胺转移酶在PH6时最多、活性较强在PH7时最多、活性较弱含不同抗原(kngyun)红细胞区别第4页/共63页第四页，共64页。其它(qt)A亚型AintAint亚型（亚型（A1-A2 intermediateA1-A2 intermediate）：与抗）：与抗- -1 1反应反应(fnyng)(fnyng)程度介程度介于之间于之间第5页/共63页第五页，共64页。型：很罕见很罕见(hn jin)(hn jin)的亚型（的亚型（1 110001000） 主要特征：与抗主要特征：与抗- -和抗和抗- -, ,均反应呈现混合凝集现象均反应呈现混合凝集现象 即即A3A3细胞与抗细胞与抗
5、-A-A和大多数抗和大多数抗-A-A，B B孵育后出现一些由数个红细胞孵育后出现一些由数个红细胞形成的小凝集块，并被绝大多数游离的非凝集红细胞包围。形成的小凝集块，并被绝大多数游离的非凝集红细胞包围。 无无A1A1抗原抗原第6页/共63页第六页，共64页。大多数人血清中无抗大多数人血清中无抗A1,A1,偶见有抗偶见有抗A1A1；有较强有较强H H物质物质容易被误认为容易被误认为O O型；型；白血病可引起抗原减弱白血病可引起抗原减弱(jinru)(jinru)，显现于，显现于A3A3类似的反应类似的反应型：第7页/共63页第七页，共64页。end型：与A3类似；与一些抗A、抗A,B出现混合视野凝
6、集；但end型个体唾液中只含H抗原(kngyun)，不含A物质第8页/共63页第八页，共64页。其它(qt)A亚型x（Ao）型：更罕见的亚型更罕见的亚型主要特征：抗原十分主要特征：抗原十分(shfn)(shfn)弱，仅仅只能通过抗弱，仅仅只能通过抗- -，检测，通常其血清中存，检测，通常其血清中存在抗在抗- -。如果未用抗。如果未用抗- -，进行检测，则，进行检测，则AxAx表型易被误定为型。表型易被误定为型。 第9页/共63页第九页，共64页。Ax型红细胞与B型血清（抗A抗体）不发生凝集或弱凝集与O型血清可发生程度不一的凝集，这可能是因为O型血中抗A效价比B型血抗A效价高及0型血清中有抗A、
7、B抗体故现做ABO血型(xuxng)鉴定时，应加O型血清（内含抗A、抗B及抗AB），以防将Ax型误定为O型。 其它(qt)A亚型x（Ao）型：第10页/共63页第十页，共64页。其它(qt)A亚型x（Ao）型：血清中存在抗A1分泌型体液及红细胞上有H抗原(kngyun)与抗H的凝集增强第11页/共63页第十一页，共64页。Am亚型：更加罕见更加罕见 主要特征主要特征(tzhng)(tzhng)：AmAm型红细胞在常规试验中不与抗型红细胞在常规试验中不与抗- -、抗、抗-B-B和抗和抗- -，反应，但其血清反定型时出现，反应，但其血清反定型时出现正反定型不一致，只有抗正反定型不一致，只有抗B B
8、，缺乏抗，缺乏抗- -第12页/共63页第十二页，共64页。Ael仅能通过吸收(xshu)放散试验才能证明红细胞上有A抗原存在的个体第13页/共63页第十三页，共64页。血型血型正定型试验正定型试验血型血型物质物质抗原数细胞抗原数细胞（103103）血清中抗血清中抗A1A1抗抗A A抗抗ABAB抗抗H H抗抗A1A1A A1 14+4+4+4+w+w+4+4+A,HA,H81011708101170无无A A2 24+4+4+4+2+2+0 0A,HA,H240290240290少少A A3 32+mf2+mf2+mf2+mf3+3+0 0A,HA,H3535很少很少AendAendWkmfW
9、kmfwkmfwkmf3+3+0 0H H200(200(只有只有10%10%细细胞产生凝集胞产生凝集) )无无AxAx0/w+0/w+12+12+4+4+0 0H H4 4几乎全部几乎全部AmAm0 00 04+4+0 0A,HA,H0.21.90.21.9无无AelAel0 00 04+4+0 0H H0.11.40.11.4经常经常第14页/共63页第十四页，共64页。一些一些ABOABO亚型病亚型病例例(bngl)(bngl)分分析析第15页/共63页第十五页，共64页。病例病例(bngl)分析分析献血(xin xu)者,男, 23岁。在献血(xin xu)时检测血型发现正反定型不一致
10、,即送本院血型室鉴定。第16页/共63页第十六页，共64页。第17页/共63页第十七页，共64页。H物质测定用抗H与献血者红细胞反应并同时采用其他正常成人新鲜Bc、Oc做平行对照(duzho)。各红细胞与抗H凝集强度为Oc 献血者红细胞Bc。抗H呈增强反应。第18页/共63页第十八页，共64页。吸收放散试验：取献血者红细胞与效价为256的人源抗-A血清混合冷吸收后进行放散,释放液与A型试剂红细胞反应(fnyng)出现凝集,说明其红细胞上确有A抗原存在。第19页/共63页第十九页，共64页。唾液中血型物质测定：唾液中未检出血型物质,该献血者为非分泌型。抗AB反应强度(qingd)试验：用抗AB效
11、价为4和抗B效价为16血清分别与献血者红细胞反应,抗AB、抗B凝集强度(qingd)分别为3 +、2 + ,由上可得出抗AB增强。第20页/共63页第二十页，共64页。该个体(gt)可能是哪种血型？第21页/共63页第二十一页，共64页。病例病例(bngl)(bngl)分析分析患者男,20岁,临床诊断为急性单核细胞白血病(M5a),血液检果:WBC100.17109/L,PLT9109/L,申请(shnqng)输注红细胞及血小板制品。输血前进行血型鉴定为Rh(D)阳性,ABO血型正反定型(室温)不相符,正定型红细胞与抗A、抗B均不凝集,反定型血浆与A、O型红细胞不凝集,与B型红细胞强凝集。第2
12、2页/共63页第二十二页，共64页。思考思考(sko)该做哪些实验(shyn)确定ABO血型？第23页/共63页第二十三页，共64页。 1、红细胞ABH抗原检测:采用(ciyng)试管法在室温及4 ,使被检者红细胞分别与抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB 和抗-H单抗反应 ,鉴定其ABH抗原。实验(shyn)方法第24页/共63页第二十四页，共64页。 2、血浆 ABO 血型抗体及不规则抗体检测:采用试管法,使血浆与标准 A、B 型红细胞反应。 检测ABO血型系统抗体;采用微柱凝胶抗球蛋白试验(shyn) ,使血浆与3 人份O型筛检红细胞反应 ,检测ABO血型系统以外的不规则抗体。第25页/共
13、63页第二十五页，共64页。 3、红细胞吸收放散试验:在压积红细胞中加入(jir)2 倍体积人源抗-A血清 ,混匀 ,37 吸收30 min后转入4 过夜 ,离心去血清 ,将吸收后的红细胞用 4 生理盐水洗涤 5 次(末次洗液留作对照) ,56 放散10 min ,离心取放散液 ,采用试管法 ,在室温及 4 分别与A型红细胞反应 ,检测红细胞弱A抗原。第26页/共63页第二十六页，共64页。 4、唾液血型物质检测:把抗-H单克隆试剂、人源抗-A血清(xuqng)和人源抗-B 血清(xuqng)分别按呈现 +凝集的最高稀释倍数稀释,将被检者的唾液煮沸后,与稀释的抗-H单克隆试剂、人源抗-A 血清
14、(xuqng)和人源抗-B 血清(xuqng)作中和抑制试验,检测是否有 H、A、B 血型物质。第27页/共63页第二十七页，共64页。1.在室温及4 ,被检者红细胞与抗A、抗A1 、抗B 均不凝集,与抗AB 微弱凝集,与抗H 均明显凝集;2.血浆与标准A 型红细胞及O 型筛检红细胞均不凝集,与标准B 型红细胞强凝集;3.红细胞吸收人源抗A血清(xuqng)后的放散液与A型红细胞有明显凝集;4.唾液中检出H 及A 血型物质,未检出B 血型物质第28页/共63页第二十八页，共64页。1、该患者是何血型？2、该患者该如何进行输血？3、该实验室做法是否(sh fu)正确？有何补充之处？第29页/共6
15、3页第二十九页，共64页。病例病例(bngl)分析分析献血者屠某，女，36岁，原定为B型，与B型白血病患者徐某主、次测配血均配合(pih)，而与另一个体陆某血清在盐水介质中弱凝集。第30页/共63页第三十页，共64页。第31页/共63页第三十一页，共64页。红细胞吸收放散试验：以效价128的抗A、抗B试剂(shj)分别与屠某红细胞、A1B型红细胞在4吸收1h，吸收后抗A效价64，抗B效价0.A1B红细胞吸收后，抗A、抗B效价均为0.经56放散，屠某红细胞放散液中抗A效价为32，抗B为2，A1B型红细胞放散液中抗A、抗B效价均为2.第32页/共63页第三十二页，共64页。第33页/共63页第三十
16、三页，共64页。第34页/共63页第三十四页，共64页。该献血者可能是哪种血型(xuxng)？该患者作为献血者，其红细胞和血浆可以输给哪种血型(xuxng)的受血者？第35页/共63页第三十五页，共64页。病例病例(bngl)分析分析在河北省血液中心2002年1月15日组织的一次无偿献血中,检验科遇到(y do)1份正反定型不符标本送血型参比实验室检测。第36页/共63页第三十六页，共64页。正定型反定型抗A抗B抗H抗A1抗AB ABO4+2+mf 2+4+W+当反定型的反应条件(tiojin)在37时,A细胞侧凝集消失,证明是冷凝集素所致,而B细胞侧仍存在弱凝集。第37页/共63页第三十七页
17、，共64页。唾液物质测定(cdng)唾液中只分泌H物质。用最佳稀释度的抗-A、抗-B血清对唾液进行测定(cdng),没有发现A、B物质。第38页/共63页第三十八页，共64页。该个体(gt)可能是哪种血型？第39页/共63页第三十九页，共64页。第40页/共63页第四十页，共64页。家系血型家系血型(xuxng)遗传图遗传图第41页/共63页第四十一页，共64页。家族中其它cisAB 型者大部分为非分泌型,即使是分泌型也仅分泌H 物质(wzh)。仅发现1 名(先证者之父) 分泌A 及H 物质(wzh)第42页/共63页第四十二页，共64页。第43页/共63页第四十三页，共64页。PCRSSPP
18、CRSSP方法用于方法用于ABOABO疑难血型疑难血型(xuxng)(xuxng)检定检定样品来源：2001年7月-2002年6月河南各地血站及省血液中心血清学方法检测ABO血型正反定型不符的血样共30份。选出本实验室再次(zi c)血清学检测仍正反定型不符或仍存在疑问的9例作ABO基因检测；另挑选A、B、O、AB型正常样品各2例抽提DNA扩增ABO基因作为对照。第44页/共63页第四十四页，共64页。标本的基本情况1、2、5、7、8号为健康无偿献血者(2号检测出存在(cnzi)抗M)，3号为急性单核细胞白血病(AML)M5患者，4号为1名持续发烧原因待查的患者，6号为自身免疫性溶血性贫血、乙
19、型肝炎、Goombs试验呈阳性，9号为肝癌患者；第45页/共63页第四十五页，共64页。第46页/共63页第四十六页，共64页。提取DNA扩增引物PCR扩增PCR扩增产物的检测 取扩增后标本(biobn)在含05gg的溴化乙锭(EB)的2琼脂糖凝胶中电泳15-20min，观察结果；根据是否产生扩增片段以及片段的长度确定ABO基因型(同时扩增出6和7特异性片段确定A2基因)。第47页/共63页第四十七页，共64页。第48页/共63页第四十八页，共64页。讨论讨论(toln) 根据血清反应格局，1(有冷抗体影响)、2、5、7号判断为亚型，其中5、7号未能检测出B抗原，检出的基因型证实了相应基因的存
20、在并最终确定血型；3号是由于疾病使血型抗原减弱，4号可能因疾病使抗体减弱，6号产生自身(zshn)抗体使血型判断困难，8号因血清中有较强的冷抗体影响了反定型，9号可能是抗B减弱，此5例均通过AB0基因的检测确定了血型。患者经基因检测确定血型，给予同型血输注治疗均取得满意的效果。第49页/共63页第四十九页，共64页。 向东，刘曦，郭忠慧等，上海地区中国人群中ABO亚型的研究(ynji)，中国输血杂志，2006，19（1）：25-27第50页/共63页第五十页，共64页。目的研究中国人群中各种ABO亚型分布的特点,以及(yj)在A、B亚型中不规则ABO抗体的发生率。方法 用常规方法对本中心200
21、32004年的献血者血样共440617份进行筛选,对于正反定型不符的血样进一步作血清学以及(yj)分子生物学分析,并分类。另外,使用抗H和抗A1,筛选A2、A2B亚型。第51页/共63页第五十一页，共64页。ABO亚型初筛 用抗A,抗B做正定型(dng xng),用Ac,Bc、Oc做反定型(dng xng)。使用96孔板,用Vivace型自动加样仪每份血样加后,650g离心30s,放置10min,用判读仪比色并以肉眼判断。凡正反定型(dng xng)不符或凝集明显较弱的血样,均进行手工复检。第52页/共63页第五十二页，共64页。 由于A2及A2B亚型通常正反定型相符,所以对筛选中检出的A2、
22、A2B未加统计,而另用抗H和抗A1分别对随机选取的2693份A型和869份AB型健康献血者血样进行筛选,对筛选岀的血样重复正反定型以及抗H、抗A1检测,并检测血清(xuqng)中的可能存在的抗A1。第53页/共63页第五十三页，共64页。结果(ji gu) 从440617份健康献血者血样中,筛选出的ABO亚型共66例(不包括A2,A2B和类孟买)。其中,A亚型22例,B亚型41例:AxB11例,AelB3例,Ax3例,Ael2例,Amh2例,A31例,Bx11例,B39例,ABx7例,AB35例,Bel3例,Bm2例,ABel1例,ABend1例,ABm1例,Bend1例;另检出B(A)型1例
23、、CisAB型2例。第54页/共63页第五十四页，共64页。 从2693份A型和869份AB型血样中,检出A214例(0.520%);A2B亚型35例(4.03%)。对1695例上海献血者同期(tngq)随机抽样调查:A型占29.9%,B型占28.6%,AB型占11.0%。结合本次筛选的A2和A2B结果推算岀:A2占总人群的比例为为29.9 % 0. 520 % = 0. 156 %A2B占总人群的比例为11. 0 % 4. 03 % = 0. 443 %。第55页/共63页第五十五页，共64页。ABO亚型分布的不平衡性根据对上海献血者同期随机抽样调查,AB型和A型人数的比例为:AB/A=11
24、.0%/29.9%=0.368。如果A亚型完全符合孟德尔遗传规律(gul)遗传,则在AB型和A型中检出亚型的概率相同,因此A2B/A2=AB/A。第56页/共63页第五十六页，共64页。 但在AB型中检出A2B的几率(j l)远高于A型中检出A2的几率(j l)。其它“A亚型B”的检出率也远高于A亚型的检出率第57页/共63页第五十七页，共64页。如上所示,A亚型中,A亚型B的检出率明显较高,和非亚型数据比较(bjio),检出率分别高出倍为:(A2B/A2)/(AB/A)=2.84/0.368=7.72倍;(AxB/Ax)/(AB/A)=3.67/0.368=9.97倍;(AelB/Ael)/
25、(AB/A)=1.5/0.368=4.08倍。第58页/共63页第五十八页，共64页。B亚型中,AB亚型的检出率和非亚型数据(shj)比较,检出率高出:(AB3/B3)/(AB/B)=0.556/0.385=1.44倍;(ABx/Bx)/(AB/B)=0.636/0.385=1.65倍;(ABel/Bel)/(AB/B)=0.333/0.385=0.865倍;(ABm/Bm)/(AB/B)=0.5/0.385=1.30倍。第59页/共63页第五十九页，共64页。Ogasawara等观察到A2B在日本人中的检出率偏高的现象,对此现象的解释(jish)是某些强势B基因对A基因有抑制作用。本次试验观
26、察到的现象显示,不但A2B检出率存在偏高的现象,AxB,AelB的检出率均偏高,特别是AxB型的检出率高出期望值的10倍。第60页/共63页第六十页，共64页。 较合理的解释是A2和Ax亚型本身是异质性的,某些A2,Ax型转移酶转移N乙酰半乳糖基的能力较弱,不能将某些类型的H抗原(kngyun)(如3型H抗原(kngyun)转变成A抗原(kngyun),因此无论在A亚型还是A亚型B中均表现为亚型;第61页/共63页第六十一页，共64页。 另一些A型转移酶能够将各种类型的H抗原转变为A抗原,只是效率较差或转移酶的量较少,因此当红细胞上仅存在A型转移酶时不容易被发现,而当同时存在B型转移酶时,由于
27、竞争作用,表现出A抗原明显减弱的现象。对于B亚型来说,虽然也存在AB亚型较多的现象,但表现不明显。这可能说明B亚型和正常B型转移酶之间的区别,主要表现在对红细胞上不同(b tn)类型H抗原的作用能力的差别,而非作用效率的差别上。第62页/共63页第六十二页，共64页。谢谢(xi xie)大家观赏！第63页/共63页第六十三页，共64页。内容(nirng)总结ABO亚型简介。其它A亚型x（Ao）型：。2、该患者该如何进行输血。在河北省血液中心2002年1月15日组织的一次无偿献血中,检验科遇到1份正反定型不符标本送血型参比实验室检测。样品来源：2001年7月-2002年6月河南(h nn)各地血站及省血液中心血清学方法检测ABO血型正反定型不符的血样共30份。选出本实验室再次血清学检测仍正反定型不符或仍存在疑问的9例作ABO基因检测。谢谢大家观赏第六十四页，共64页。
