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1、专题二专题二 微生物的实验室培养与应用微生物的实验室培养与应用v一、培养基v1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。v2种类：v按物理性质分为：v按用途分为：v3营养成分：一般都含有水、 、 、无机盐和生长因子，还需满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求碳源碳源氮源氮源 、 。液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基 、 。选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基二、无抗菌技术二、无抗菌技术1.含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法的方法关键：防止关键：防止外来杂菌外来杂菌的入侵的入侵2.
2、方法方法消毒方法：消毒方法： 、巴氏消毒和化学药剂消毒、巴氏消毒和化学药剂消毒灭菌法：灼烧灭菌、干热灭菌、灭菌法：灼烧灭菌、干热灭菌、 灭菌灭菌煮沸消毒煮沸消毒高压蒸汽高压蒸汽条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌3.消毒和灭菌的区别消毒和灭菌的区别v4.无菌技术具体操作v对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。v将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。v为避免周围环
3、境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。v实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。v三纯化大肠杆菌以及菌种的保藏v(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。v(2)纯化大肠杆菌v原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。v方法：平板划线法、稀释涂布平板法。平板划线法、稀释涂布平板法。v(3)菌种的保藏v短期保存：固体斜面培养基上4保存，菌种易被污染或产生变异。v长期保存：20甘油管在冷冻箱中保藏。v1高温灭菌的原理是什么？v提示高温可以使菌体细胞内的蛋白质、核酸变性失活，从而达到灭菌的目的
4、。v2接种过程为什么要在酒精灯的火焰旁进行？v提示因为这里是一个无菌区，可以避免杂菌污染。v四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数v1菌种筛选：选择培养基，是唯一氮源v实验原理v筛选菌株：提供有利于目的菌株生长的条件(如营养、温度、pH等)，同时抑制其他微生物的生长，常用选择培养基筛选。v2统计菌落数目：v(1)方法：稀释涂布平板法统计活菌数(显微镜直接计数法不能排除死菌)尿素尿素显微镜直接计数法显微镜直接计数法v(2)计数规则 3.计算公式计算公式:每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数=(C/V)*M,C代表某一稀代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平
5、板时所用代表涂布平板时所用的稀释液的体积的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数代表稀释倍数v土壤取样：从距地表约38cm的土壤层取样4.实验步骤实验步骤:土壤取样土壤取样制备培养基制备培养基微生物的培养与观微生物的培养与观察察细菌的计数细菌的计数v3什么是菌落？它有什么用途？v提示菌落是单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面的特征不同，它可以作为鉴别菌种的重要依据。v1实验原理v即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌v2.纤维素分解菌的筛选： 法五、分解纤维素的微生物的分离五、
6、分解纤维素的微生物的分离刚果红染色刚果红染色v2实验流程土壤取样、选择培养、梯度稀释、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上、挑选产生透明圈的菌落1.1.下列说法正确的是（下列说法正确的是（ ）A.A.铵盐、硝酸盐可以作为自养微生物的氮源铵盐、硝酸盐可以作为自养微生物的氮源B.B.凡是碳源都能提供能量凡是碳源都能提供能量C.C.除水以外的无机物仅提供无机盐除水以外的无机物仅提供无机盐D.D.无机氮源不能提供能量无机氮源不能提供能量【解析解析】选选A A。本题考查了微生物生长所需要的营养物质及其功。本题考查了微生物生长所需要的营养物质及其功能。铵盐、硝酸盐是最常用的无机氮源，可以被自养微生物利能
7、。铵盐、硝酸盐是最常用的无机氮源，可以被自养微生物利用；用；COCO2 2是微生物的碳源，但不能提供能量；氨可为硝化细菌提是微生物的碳源，但不能提供能量；氨可为硝化细菌提供能量和氮源。供能量和氮源。A2.2.细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭菌、酒精擦拭、细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭菌、酒精擦拭、火焰灼烧等几种不同的处理方法，依次用于杀灭哪些部火焰灼烧等几种不同的处理方法，依次用于杀灭哪些部位的杂菌（位的杂菌（ ）接种环接种环 手手 培养基培养基 高压锅高压锅A. B. C. D.A. B. C. D.【解析解析】选选C C。本题考查了无菌操作技术。高压蒸汽灭菌锅是灭菌。本题考查了无菌操
8、作技术。高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌；用酒精擦拭双手是消毒的的一个设备，通常用于培养基的灭菌；用酒精擦拭双手是消毒的一种方法；火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种一种方法；火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。工具，如接种环。C3.3.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（是（ ）A.A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸C.C.待培养基冷
9、却至待培养基冷却至5050左右时，进行倒平板左右时，进行倒平板D.D.待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约5 min5 min10 min10 min后，将平板倒过来后，将平板倒过来放置放置【解析解析】选选A A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺序为：计算序为：计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板，故倒平板，故A A项错误。项错误。A4.4.分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是（分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是（ ）A.A.经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上基上
10、B.B.选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少C.C.经稀释培养后，用刚果红染色经稀释培养后，用刚果红染色D.D.对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上基上【解析解析】选选A A。经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维。经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物。设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物
11、。A5.5.某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题：观察与计数。请回答与此实验相关的问题：（1 1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了供了_和和_。除此之外，培养基还必须含有。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是的基本成分是_ 和和_ _ 。（2 2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_ 。（3 3）为了尽快观察到细菌
12、培养的实验结果，应将接种）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于了湖水样品的平板置于_ 中培养，培养的温度中培养，培养的温度设定在设定在3737。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种另一平板上接种_ 作为对照进行实验。作为对照进行实验。氮源氮源碳源碳源无机盐无机盐水水高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌恒温培养箱恒温培养箱无菌水无菌水（4 4）培养）培养2020小时后，观察到平板上有形态和颜色不同小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，种细菌。一般说来，菌落总数越
13、多，湖水遭受细菌污染的程度越菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_ _ 。（5 5）如果提高培养基中）如果提高培养基中NaClNaCl的浓度，可以用于筛选耐的浓度，可以用于筛选耐_ 细菌，这种培养基被称为细菌，这种培养基被称为_ 。多多大大盐（或盐（或NaCl）选择培养基选择培养基6 6。（。（20092009上海高考）氯苯化合物是重要的有机化工上海高考）氯苯化合物是重要的有机化工原料，原因是不易降解，会污染环境。某研究小组依照原料，原因是不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（如图下列实验方案（如图1 1），筛选出能高效降解氯苯的微），筛选出能高效降解氯苯的微生物生物SP1SP1
14、菌，培养基配方如下表。菌，培养基配方如下表。 （1 1）配制）配制号固体培养基时，除添加号固体培养基时，除添加号液体培养基号液体培养基成分外，还应添加成分外，还应添加1%1%的的_。（2 2）培养基配制时，灭菌与调）培养基配制时，灭菌与调pHpH的先后顺序是的先后顺序是_。（3 3）从用途上来说，）从用途上来说，号培养基和号培养基和号培养基分别属号培养基分别属于于_培养基和培养基和_培养基。在培养基。在号培养基中，号培养基中，为为SP1SP1菌提供氮源的成分是菌提供氮源的成分是_。（4 4）在营养缺乏或环境恶劣时，）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1SP1的菌体会变成一个的菌体会变成一个圆形的休眠
15、体，这种休眠体被称为圆形的休眠体，这种休眠体被称为_。琼脂琼脂先调先调pH，后灭菌，后灭菌通用通用选择选择硝酸铵硝酸铵芽孢芽孢（5 5）将）将SP1SP1菌接种在含不同浓度氯苯的菌接种在含不同浓度氯苯的号培养基中号培养基中培养，得到生长曲线（如图培养，得到生长曲线（如图2 2）。从图）。从图2 2中可知中可知SP1SP1菌在菌在_ 培养条件下最早停止生长，其原因是培养条件下最早停止生长，其原因是_ 。20mg/L氯苯氯苯氯苯最早耗尽氯苯最早耗尽【自主解答自主解答】本题主要考查培养基的相关知识。本题主要考查培养基的相关知识。（1 1）固体培养基必须含有适量的琼脂。）固体培养基必须含有适量的琼脂。
16、（2 2）为了防止杂菌污染，配置培养基时，应该先调节）为了防止杂菌污染，配置培养基时，应该先调节pHpH，然后灭菌。然后灭菌。（3 3）号培养基是为了获得更多的菌株，属于通用培养基，号培养基是为了获得更多的菌株，属于通用培养基，号培养基是为选择出号培养基是为选择出SP1SP1菌株，属于选择培养基，菌株，属于选择培养基，号培号培养基成分中含氮物质为硝酸铵，可以为养基成分中含氮物质为硝酸铵，可以为SP1SP1菌株提供氮源。菌株提供氮源。（4 4）当环境条件较差时，一些菌体会形成芽孢休眠体，来）当环境条件较差时，一些菌体会形成芽孢休眠体，来适应不良环境。适应不良环境。（5 5）SP1SP1菌株是以氯
17、苯为碳源，当氯苯消耗尽时，菌株因缺菌株是以氯苯为碳源，当氯苯消耗尽时，菌株因缺少碳源而不能继续生存，故氯苯含量越少，少碳源而不能继续生存，故氯苯含量越少，SP1SP1菌株越早停菌株越早停止生长。止生长。答案：答案：（1 1）琼脂）琼脂 （2 2）先调）先调pHpH，后灭菌，后灭菌（3 3）通用）通用 选择选择 硝酸铵硝酸铵 （4 4）芽孢）芽孢（5 5）20mg/L20mg/L氯苯氯苯 氯苯最早耗尽氯苯最早耗尽 7.7.下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：验，完成下列问题：实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较
18、实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进多。将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛胨培养基、盛9mL9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛无菌培养皿、盛90mL90mL无菌水的锥形
19、瓶、恒温箱。无菌水的锥形瓶、恒温箱。( (1)1)方法步骤：方法步骤：倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在平板，应在_ 操作。操作。制备土壤稀释液：取土样制备土壤稀释液：取土样10g10g加入盛有加入盛有90mL90mL无菌水的锥无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1mL1mL，转至盛，转至盛有有9mL9mL的无菌水的试管中，依次稀释到的无菌水的试管中，依次稀释到10107 7稀释度。稀释度。涂布：按照由涂布：按照由10107 710103 3稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别
20、吸取0.1mL0.1mL进进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布_个。个。培养：放入恒温箱内，在培养：放入恒温箱内，在28283030下培养下培养3d3d4d4d。酒精灯火焰旁酒精灯火焰旁3 1细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在_ 的平板进行计数。如果测试的平均值为的平板进行计数。如果测试的平均值为5050，则每克样品中的菌落数是则每克样品中的菌落数是_。（稀释度是。（稀释度是10105 5）(2)(2)预期结果：相同稀释度下，
21、牛肉膏蛋白胨培养基上预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数的菌落数_（填（填“多于多于”或或“少于少于”）无氮）无氮培养基上的数目。原因是培养基上的数目。原因是_。303005107无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌生存繁殖，而牛无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌生存繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存多于多于【自主解答自主解答】本题主要考查了微生物的培养、分离本题主要考查了微生物的培养、分离和计数等。在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌和计数等。在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌污染。为了保证结果准确，一般设置污染。为
22、了保证结果准确，一般设置3 35 5个平板，个平板，选择菌落数在选择菌落数在3030300300的平板进行计数，并取平均值，的平板进行计数，并取平均值，则每克样品中的菌落数为（则每克样品中的菌落数为（50500.10.1）10105 5=5=510107 7。牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合其他细菌生存，所实验结果的影响，该培养基适合其他细菌生存，所以，它比无氮培养基上的菌落数目多。以，它比无氮培养基上的菌落数目多。 在微生物数量测定时，应选取具有合适的菌落在微生物数量测定时，应选取具有合适的菌落数的培养基，如
23、细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有数的培养基，如细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有3030300300个菌落数为宜；霉菌以每个培养皿内有个菌落数为宜；霉菌以每个培养皿内有1010100100个菌落数为个菌落数为宜。宜。9.9.（20092009安徽高考）下列是关于安徽高考）下列是关于“检测土壤中细菌总检测土壤中细菌总数数”实验操作的叙述，其中错误的是（实验操作的叙述，其中错误的是（ ）A.A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板菌后倒平板B.B.取取10104 4、10105 5、10106 6倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土
24、壤稀释液和无菌水各0.1mL0.1mL，分别涂布于各组平板上分别涂布于各组平板上C.C.将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，3737恒温培养恒温培养24244848小小时时D.D.确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300300以上的实验组以上的实验组平板进行计数平板进行计数D3030010.(200810.(2008全国卷全国卷)下列关于细菌的叙述，错误的是下列关于细菌的叙述，错误的是A.A.硝化细菌能以硝化细菌能以NHNH3 3作为氮源和能源物质作为氮源和能源物质B.B.某些细菌可以利用光能固定某些细菌可以利用光能固定COCO2 2合成有机物合成有机
25、物C.C.生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质物质D.D.含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌肠杆菌D【解析解析】选选D D。本题考查了微生物的营养和鉴别知识。本题考查了微生物的营养和鉴别知识。硝化细菌以硝化细菌以NHNH3 3作为氮源，进行化能合成作用；某些作为氮源，进行化能合成作用；某些细菌如蓝细菌（蓝藻）能进行光合作用。生长因子细菌如蓝细菌（蓝藻）能进行光合作用。生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨
26、基酸和碱基等。常用伊红维生素、氨基酸和碱基等。常用伊红- -美蓝培养基来美蓝培养基来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，如果有大肠杆菌，则菌落呈深紫色并带有金属光泽。如果有大肠杆菌，则菌落呈深紫色并带有金属光泽。11.11.（20092009辽宁、宁夏高考）（辽宁、宁夏高考）（1 1）在大肠杆菌培养过）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、异类型容易选择、 _ 、_ 等等优点，因此
27、常作为遗传学研究的实验材料。优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2 2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行培养基和培养皿进行_ _ （消毒、灭菌）处理；操作（消毒、灭菌）处理；操作者的双手需要进行清洗和者的双手需要进行清洗和_ _ ；静止空气中的细菌可；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_ 。温度温度酸碱度酸碱度易培养易培养生活周期短生活周期短灭菌灭菌消毒消毒损伤损伤DNA的结构的结构（3 3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要
28、）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的外，还应保证待测样品稀释的_ 。（4 4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的小等菌落特征对细菌进行初步的_ 。（5 5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_ 。（6 6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养）
29、若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。比例合适比例合适鉴定鉴定(或分类或分类)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生培养基上是否有菌落产生灭菌灭菌12.12.在农田土壤的表层自生固氮菌较多，用表层土制在农田土壤的表层自生固氮菌较多，用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是( )(
30、)加抗生素加抗生素 不加抗生素不加抗生素加氮素加氮素 不加氮素不加氮素加葡萄糖加葡萄糖 加蔗糖加蔗糖37 37 恒温箱中培养恒温箱中培养 28 28 30 30 温度下培温度下培养养A. B.A. B.C. D.C. D.C13.13.关于灭菌和消毒的不正确理解是（关于灭菌和消毒的不正确理解是（ ）A.A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子芽孢和孢子B.B.消毒和灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的C.C.常用灭菌法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸常用灭菌法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌汽灭菌D.D.常用消毒方法有煮沸法、巴氏消毒法、紫
31、外常用消毒方法有煮沸法、巴氏消毒法、紫外线消毒法、化学药剂消毒法线消毒法、化学药剂消毒法B【解析解析】选选B B。使用强烈的理化因素杀死物体内。使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌，常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高灭菌，常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒是指用较为温和的物理或化压蒸汽灭菌。消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒的过程。常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药剂消毒法等
32、。法、紫外线或化学药剂消毒法等。14.14.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ）A.A.科学家从科学家从70708080热泉中分离得到耐高温的热泉中分离得到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数估计值作为该样品菌落数估计值C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D.D.同其他生物环境
33、相比，土壤中的微生物数量最大，种同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多类最多【解析解析】选选B B。本题考查了微生物实验设计、物质分离和菌落统计的知。本题考查了微生物实验设计、物质分离和菌落统计的知识。统计菌落数时，要选择菌落数在识。统计菌落数时，要选择菌落数在3030300300的平板进行计数，而后取的平板进行计数，而后取平均值，作为该样品菌落数的估计值。平均值，作为该样品菌落数的估计值。B15.15.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分微所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大
34、部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌生物无法生长；在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（分离出（ ）大肠杆菌大肠杆菌 霉菌霉菌 放线菌放线菌 纤维素分解菌纤维素分解菌A. B. C. D.A. B. C. D.【解析解析】选选A A。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以利用纤维素，大部分微生物却不能；培养基中加入青霉素可以抑利用纤维素，大部分微生物却不能；培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，但霉菌能够生长。制细菌和放线菌，但
35、霉菌能够生长。A16.16.（1616分）根据你所学习的知识，回答下列问题：分）根据你所学习的知识，回答下列问题：（1 1）如果培养芽孢菌，配制固体培养基的基本步骤是：）如果培养芽孢菌，配制固体培养基的基本步骤是：称量称量溶化溶化_ _加棉塞加棉塞包扎。包扎。（2 2）如果检验自来水中的大肠杆菌是否超标，需要在）如果检验自来水中的大肠杆菌是否超标，需要在培养基中加入培养基中加入_ ；如果将农田土壤表层中的；如果将农田土壤表层中的圆褐固氮菌与其他细菌分离出来，则需要在圆褐固氮菌与其他细菌分离出来，则需要在_的的培养基上培养。按照培养基的用途划分，前者属于培养基上培养。按照培养基的用途划分，前者属
36、于_培养基，后者属于培养基，后者属于_培养基。培养基。调节调节(培养基的培养基的)pH分装分装伊红和美蓝伊红和美蓝无氮无氮鉴别鉴别选择选择（3 3）在细菌的培养过程中，将培养基分装到试管中的）在细菌的培养过程中，将培养基分装到试管中的高度约为试管高度的高度约为试管高度的X X；加棉塞时，棉塞在试管口内的；加棉塞时，棉塞在试管口内的长度是棉塞长度的长度是棉塞长度的Y Y；将培养基搁置斜面时斜面长度最；将培养基搁置斜面时斜面长度最多是试管长度的多是试管长度的Z Z。则。则X X、Y Y、Z Z对应的比值依次是对应的比值依次是_ 。（4 4）下列是木屑培养基各成分所占比例：木屑）下列是木屑培养基各成
37、分所占比例：木屑78%78%，米，米糠糠20%20%，石膏粉，石膏粉1%1%，蔗糖，蔗糖1%1%。此培养基加水后可用于平。此培养基加水后可用于平菇的培养，用简易的方法对培养基进行灭菌时，要重复菇的培养，用简易的方法对培养基进行灭菌时，要重复2 23 3次，其主要目的是有利于彻底杀灭萌发的次，其主要目的是有利于彻底杀灭萌发的_。1/5 2/3 1/3芽孢芽孢17.17.（1919分）尿素是一种重要的农业肥料，但若不经过分）尿素是一种重要的农业肥料，但若不经过细菌分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中细菌分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中的的
38、微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：题：（1 1）此培养基能否用于植物组织培养？）此培养基能否用于植物组织培养？_，理由，理由是是_ 。（2 2）培养基中加入尿素的目的是筛选）培养基中加入尿素的目的是筛选_，这种，这种培养基属于培养基属于_培养基。培养基。（3 3）“目的菌目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培
39、养基生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的中的_ 和和_ ，实验需要振荡培养，原因，实验需要振荡培养，原因是是_ 。（4 4）转为固体培养基时，常采用）转为固体培养基时，常采用_ 的的方法接种，获得单菌落后继续筛选。方法接种，获得单菌落后继续筛选。不能不能缺少植物激素（或缺少植物需要的各种营养）缺少植物激素（或缺少植物需要的各种营养）目的菌目的菌选择选择尿素尿素葡萄糖葡萄糖为目的菌提供氧气为目的菌提供氧气稀释涂布平板稀释涂布平板或平板划线或平板划线（5）下列材料或用具：）下列材料或用具：培养细菌用的培养基与培养培养细菌用的培养基与培养皿，皿，玻棒、试管、锥形瓶和吸管，玻棒、试管、锥形瓶和吸管，
40、实验操作者的双实验操作者的双手。其中需要灭菌的是：手。其中需要灭菌的是：_；需要消毒的是：；需要消毒的是：_。（填序号）。（填序号）（6 6）在进行分离分解尿素的细菌的实验时，）在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A A同学从培同学从培养基上筛选出大约养基上筛选出大约150150个菌落，而其他同学只筛选出大个菌落，而其他同学只筛选出大约约5050个菌落。个菌落。A A同学的实验结果产生的原因可能有同学的实验结果产生的原因可能有_。（填序号）。（填序号）由于土样不同由于土样不同 由于培养基污染由于培养基污染由于操作失误由于操作失误 没有设置对照没有设置对照和和18.18.下表是关于对四种生物能源、
41、碳源、氮源、新陈代谢下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，其中正确的一组是类型的描述，其中正确的一组是( )( )A.A.硝化细菌与乳酸菌硝化细菌与乳酸菌 B.B.乳酸菌与根瘤菌乳酸菌与根瘤菌C.C.根瘤菌与衣藻根瘤菌与衣藻 D.D.硝化细菌与衣藻硝化细菌与衣藻D【解析解析】选选D D。乳酸菌不能直接利用。乳酸菌不能直接利用N N2 2，且能量来源为糖类；，且能量来源为糖类；根瘤菌进行生命活动所需要的能量来自于糖类等有机物分解。根瘤菌进行生命活动所需要的能量来自于糖类等有机物分解。19. 19. 某同学将必修与选修教材中细菌部分的知识进行归某同学将必修与选修教材中细菌部分的
42、知识进行归纳总结，得出下列结论，其中错误的是（纳总结，得出下列结论，其中错误的是（ ）细菌在生态系统中的成分可分为生产者、消费者或分细菌在生态系统中的成分可分为生产者、消费者或分解者解者单个或少数细菌在液体培养基中大量繁殖，可形成菌单个或少数细菌在液体培养基中大量繁殖，可形成菌落，可作为菌种鉴定依据落，可作为菌种鉴定依据与细菌共生的病毒称为噬菌体与细菌共生的病毒称为噬菌体细菌的遗传物质是细菌的遗传物质是DNADNA或或RNARNA细菌具有细胞壁，可用纤维素酶与果胶酶进行水解形细菌具有细胞壁，可用纤维素酶与果胶酶进行水解形成原生质体成原生质体细菌侵入人体后作为抗原可引起人体的体液免疫或细细菌侵入
43、人体后作为抗原可引起人体的体液免疫或细胞免疫胞免疫固体固体寄生寄生DNA主要成分是肽聚糖主要成分是肽聚糖A. B.A. B.C. D.C. D.【解析解析】选选A A。本题主要考查了细菌的相关知识。菌落。本题主要考查了细菌的相关知识。菌落是单个或少数细菌在固体培养基上形成的。噬菌体与细是单个或少数细菌在固体培养基上形成的。噬菌体与细菌之间是寄生关系。细菌的遗传物质是菌之间是寄生关系。细菌的遗传物质是DNADNA。细菌的细。细菌的细胞壁主要成分是肽聚糖，不能用纤维素酶和果胶酶水解。胞壁主要成分是肽聚糖，不能用纤维素酶和果胶酶水解。有些细菌存在于细胞外液中，通过体液免疫发挥作用，有些细菌存在于细胞
44、外液中，通过体液免疫发挥作用，还有些细菌寄生在细胞内，需要细胞免疫才起作用。还有些细菌寄生在细胞内，需要细胞免疫才起作用。20.20.在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于（件下操作，培养与观察，则乙组实验属于（ ）A.A.空白对照空白对照 B.B.标准对照标准对照C.C.相互对照相互对照 D.D.条件对照条件对照【
45、解析解析】选选D D。上述实验中，甲组是实验组，乙组是对照。上述实验中，甲组是实验组，乙组是对照组，给甲组某种处理，给乙组另一种条件的处理，则乙组，给甲组某种处理，给乙组另一种条件的处理，则乙组应该是条件对照。组应该是条件对照。D21.21.有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发纤维素酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发酵来生产，为了提高酶的产量，请你设计一个实验，利酵来生产，为了提高酶的产量
46、，请你设计一个实验，利用诱变育种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌株。用诱变育种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌株。（1 1）写出实验步骤：）写出实验步骤：将培养好的生产菌株分成两组，将培养好的生产菌株分成两组，_ 。制备含有制备含有_的固体培养基。的固体培养基。 _ _ 。 _ _ 。一组用一定剂量的诱变剂处理，另一组不处理作为对照一组用一定剂量的诱变剂处理，另一组不处理作为对照纤维素纤维素把诱变组的大量菌株接种到多个含有纤维素的固体培养基上，同时把诱变组的大量菌株接种到多个含有纤维素的固体培养基上，同时接种对照组（未处理）的菌株，把它们置于相同的适宜条件下培养接种对照组（未处理）的菌株，把它
47、们置于相同的适宜条件下培养一段时间后，取培养基用刚果红染色，观察记录菌落周围透一段时间后，取培养基用刚果红染色，观察记录菌落周围透明圈的大小情况明圈的大小情况（2 2）预期实验结果及结论：）预期实验结果及结论：诱变组中菌落周围的透明圈比对照组诱变组中菌落周围的透明圈比对照组_，说明，说明_ 。诱变组中菌落周围的透明圈与对照组诱变组中菌落周围的透明圈与对照组_，说明，说明_。诱变组中菌落周围的透明圈比对照组小，说明诱变组中菌落周围的透明圈比对照组小，说明_ 。（3 3）若获得纯净的高产菌株，需进行）若获得纯净的高产菌株，需进行_ 或或_ 操作。操作。大大诱变育种获得了高纤维素酶产量的菌株诱变育种
48、获得了高纤维素酶产量的菌株相同相同诱变育种没有使菌株发生变化诱变育种没有使菌株发生变化诱变育种获得了低纤维素酶产量的菌株诱变育种获得了低纤维素酶产量的菌株平板划线平板划线稀释涂布平板稀释涂布平板22.22.富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一，主要是指富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一，主要是指利用不同微生物间生命活动的特点不同，仅适应该条件的微生物利用不同微生物间生命活动的特点不同，仅适应该条件的微生物生长旺盛，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易生长旺盛，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分地从自然界
49、中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物等综合多个方面进行选离的微生物的特点，从物理、化学、生物等综合多个方面进行选择，如温度、择，如温度、pHpH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答：苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答：（1 1）本实验所需要的培养基为）本实验所需要的培养基为_ ，碳，碳源为源为_ 。（2 2）实验原理是）实验原理是_ 。（3 3）重复
50、培养的目的是重复培养的目的是_ 。（4 4）的菌落中大部分是降解的菌落中大部分是降解_ 的的微生物。微生物。选择培养基选择培养基对羟基苯甲酸对羟基苯甲酸利用以对羟基苯甲酸为惟一碳源的选择培养基，经利用以对羟基苯甲酸为惟一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的微生物增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例对羟基苯甲酸对羟基苯甲酸v（5）为_组，为_组，设置的目的是_v_ 。v（6）采用_ 法，接种到的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是_ 。对照对照实验实验说明通过富集培养的确得到了
51、欲分离的目标微生物说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物单菌落挑取单菌落挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷却，接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷却，同时，打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，同时，打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物vv (2008年广东高考)苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，为土壤样品，请回答下列问题：v(1)中
52、培养目的菌株的选择培养基中应加入_作为碳源，中不同浓度碳源的培养基_(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用_ 法。v(2)为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于_；苯酚苯酚A稀释涂布平板稀释涂布平板培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基中加入苯酚作培养基中加入苯酚作为碳源为碳源v使用_ 法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？ _。v(3)如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？ _。v(4)实验过程中如何防止其他微生物的污染？v_。采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷采用固体平板培养细菌时要倒置
53、培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。稀释涂布平板法或平板划线稀释涂布平板法或平板划线用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌体，一定时间后，用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌体，一定时间后，测定培养液中苯酚含量测定培养液中苯酚含量培养基无菌；接种环灭菌；接种过程无菌操作培养基无菌；接种环灭菌；接种过程无菌操作v答案(1)苯酚A稀释涂布平板v(2)培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基中加入苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线v采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。v(3)用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌体，一定时间后，测定培养液中苯酚含量v(4)培养基无菌；接种环灭菌；接种过程无菌操作
