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1、融合融合PCR2021/3/91（一）融合PCR的定义融合融合PCR技技术( fusion PCR)采用具有互采用具有互补末端的引物末端的引物, 形形成具有重叠成具有重叠链的的PCR产物物, 通通过PCR产物重叠物重叠链的延伸的延伸, 从而将不同来源的任意从而将不同来源的任意DNA 片段片段连接起来接起来, 此技此技术在不需在不需要内切要内切酶消化和消化和连接接酶处理的条件下理的条件下实现DNA片段的体片段的体外外连接接, 为同源重同源重组片段的构建提供了快速片段的构建提供了快速简捷的途径捷的途径。（The definition of fusion PCR）2021/3/92（二）融合PCR的
2、原理（The experiment principles ）P2、P4为具有末端互具有末端互补的引物的引物P1、P4为两端引物两端引物2021/3/932021/3/942021/3/95引物设计对连接片段进行扩增并回收将连接片段混合进行PCR扩增验证2021/3/96图（a）1：Marker、24：未融合片段、：未融合片段、5：融合后片段：融合后片段图（b）1：Marker、25：未融合片段、：未融合片段、6：融合后片段：融合后片段2021/3/97（三）融合PCR的其他应用（The other application of fusion PCR）基因片段的缺失基因片段的缺失目目标片段的缺失
3、片段的缺失在片段的左右两端在片段的左右两端设计末端互末端互补的引物的引物进行融合行融合2021/3/98总结融合融合PCR是一种高效体外是一种高效体外连接目的片段和定点缺失目的基因的有效方法之一。接目的片段和定点缺失目的基因的有效方法之一。2021/3/99参考文献：1李敏，杨谦.一种高效构建同源重组DNA片段的方法融合PCRJ中国生物工程杂志. 2007, 27( 8): 53 58.2021/3/910引物设计原则1、长度：1530bp，其有效长度Ln=2(G十C)十(A十T)一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。2、G十c含
4、量：应在40%一60%之间，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去510度。引物长度小于20时，其Tm恒等于4(G十C)十2(A十T)。3、碱基分布的随机性：应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。4、引物自身：不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构。5、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3端的互补重叠。6、上下游引物的互补性：一个引物的3末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。7、3末端：如果可能的话，每个引物的3末端碱基应为G或C。8、引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。2021/3/911谢谢 谢！谢！ 放映结束 感谢各位的批评指导！让我们共同进步2021/3/912
