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1、专题重点专题难点DNA 的粗提取以及鉴定的原理及步骤PCR 技术的基本操作和应用蛋白质的提取和分离的基本过程用电泳法分离蛋白质的基本操作理解 DNA 粗提取各个步骤的原理和目的PCR 技术的原理体内 DNA 复制与 PCR 技术的区别电泳法分离蛋白质的基本原理专题 5 5DNA DNA 和蛋白质技术课题 1DNA 的粗提取与鉴定DNA 的提取原理溶解度耐受性DNA 与杂质的_不同，DNA 与杂质对酶、高温、洗涤剂的_不同。DNA 粗提取的实验设计(1)材料的选取：选用 DNA 含量相对_的生物组织，如鸡血、菜花、洋葱等。NaCl 溶液NaCl 溶液(2) 破碎细 胞( 以鸡血 为例 ) ：鸡血
2、 细胞，加蒸 馏水，用_搅拌，用_过滤，收集滤液。玻璃棒纱布(3)去除杂质：利用 DNA 在不同浓度的_中溶解度不同，通过控制_的浓度去除杂质。(4)DNA 的析出：将处理后溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的_(体积分数为 95%)。酒精溶液较高DNA 的鉴定二苯胺试剂蓝色DNA 溶 解 在 2 mol/L 的 NaCl 溶 液 中 ， 加 入 4 mL 的_，沸水中加热 5 min，溶液变成_。DNA 提取材料和实验用具的选择1实验材料的选择原则是选用 DNA 含量高的生物组织。有些材料不宜选用，如哺乳动物成熟红细胞(猪、牛、羊的血细胞)无细胞核，无法提取 DNA。实验一般选用鸡血或菜花
3、作为实验材料。2鸡血细胞破碎以后释放出的 DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内 DNA 的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的 DNA 就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中 DNA 的损失。实验操作原理1.细胞破碎的原理动物细胞吸水涨破2.用不同浓度的 NaCl溶液提取 DNA 的原理DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小3.提纯 DNA 的原理酒精可以溶解蛋白质等杂质，而 DNA不溶于酒精；6080 可以使蛋白质变性，而 DNA 在 80 以上才会变性；利用蛋白水解酶的专一性可以水解蛋白质4.鉴定的原理在沸水浴
4、条件下 DNA 遇二苯胺呈蓝色DNA 的粗提取与鉴定实验中涉及的原理方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞柠檬酸钠溶液2.提取鸡血细胞的细胞核物质20 mL 蒸馏水3.溶解细胞核内的 DNA2 mol 的 NaCl 溶液 40 mL4.析出含 DNA 的黏稠物蒸馏水5.滤取含 DNA 的黏稠物6.将 DNA 的黏稠物再溶解2 mol/L 的 NaCl 溶液 20 mL7.过滤含 DNA 的 NaCl 溶液实验步骤分析方法步骤加入物质目的8.提取含有杂质较少的 DNA冷却的 95%的酒精 50 mL9.DNA 的鉴定A：1)向试管中加入 0.015 mol/L 的NaCl 溶液 5 mL2)加入
5、DNA3)加入 4 mL 二苯胺试剂B：1)向试管中加入 0.015 mol/L 的NaCl 溶液 5 mL2)加入 4 mL 二苯胺试剂续表：目的()：防止血凝。加速血细胞破裂。溶解DNA。使 2 mol/L 的 NaCl 溶液稀释至 0.14 mol/L，促使 DNA最大限度地析出。使含 DNA 的黏稠物被留在纱布上。使含 DNA 的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。除去含 DNA 的滤液中的杂质。提取 DNA。鉴定 DNA 的存在。A：出现蓝色；B：无变化。提取 DNA 的原材料【例 1】做 DNA 提取与鉴定实验时，用鸡血而不用猪血的原因是()A鸡血的价格低B猪的红细胞没有细胞核，不易提取
6、DNAC鸡血不凝固，猪血容易凝固D用鸡血提取 DNA 更简便【名师点拨】：DNA 提取实验材料选取的原则是 DNA 含量高，便于提取。猪为哺乳动物，成熟的红细胞没有细胞核，不含 DNA。【答案】：B【配对练习 1】能作为提取 DNA 的最佳材料的是()A鸡的全血C鸽子的血细胞液B老鼠的红细胞D菠菜绿叶解析：鸡的全血，血浆太多，应该除去血浆；老鼠作为哺乳动物，红细胞没有细胞核，没有 DNA ，不适合作材料；菠菜绿叶由于有色素，影响实验观察的效果；鸽子的血细胞液最为适合，能够获得较多的 DNA。答案：CDNA 提取的实验操作【例 2】在 DNA 的提取过程中下列操作的生成物可以丢弃的是()第一，放
7、入 2 mol/L 的 NaCl 溶液中，搅拌后过滤，得到黏稠物和过滤液；第二，放入 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中，搅拌后过滤，得到黏稠物和过滤液；第三，放入冷却的 95%酒精溶液中，搅拌后过滤，得到黏稠物和过滤液；ACBD【名师点拨】：不同浓度的 NaCl 溶液中 DNA 的溶解度不同，0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中 DNA 的溶解度最小，DNA 析出，过滤后，存在于黏稠物中。在 2 mol/L 的 NaCl 溶液中，DNA的溶解度大，过滤后，DNA 存在于滤液中。酒精可以溶解蛋白质等杂质，而 DNA 不溶于酒精，这正是 DNA 提取和进一步提纯的原理。【答案】：D
8、【配对练习 2】在 DNA 的粗提取中，两次有 DNA 的析出，其依据的原理是()DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小，DNA 析出酒精可以溶解蛋白质等杂质，而 DNA 不溶于酒精A两次都是B两次都是C第一次是，第二次是D第一次是，第二次是解析：在 DNA 的粗提取中，第一次 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小，DNA 析出；第二次酒精可以溶解蛋白质等杂质，而 DNA 不溶于酒精而析出，两次都有 DNA 的析出。答案：C影响 DNA 提取质量的因素【例 3】在 DNA 提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是()A不易破碎B减少提取过程中 DNA 的损失C增加 DNA 的含量D容易洗刷【名师点拨】：DNA 容易被玻璃容器吸附，为减少提取过程中 DNA 的损失，最好用塑料试管和烧杯。【答案】：B【配对练习 3】下列操作中，对 DNA 的提取量影响最小的是()A使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出 DNA 等核物质B搅拌时，要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌C在“析出 DNA 黏稠物”时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加D在用酒精沉淀 DNA 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却解析：搅拌时，要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌，有利于混合均匀，加速 DNA 析出，但是对 DNA 的提取量几乎没有影响。答案：B
