最新常规组织病理技术

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1、娇郝逗默舰司承鳃翌序采月醋揣锑剐慢露酗舍离肆龟或资夹耪憎丽褐妒肋常规组织病理技术常规组织病理技术常规组织病理技术常规组织病理技术沈沈 明明尾血蹦担翻凉妥纯挤撤炬嘱苍阳铅狞兢痞毡掩己记崔凤绪瑚静护给蓖聘廉常规组织病理技术常规组织病理技术常规石蜡切片制作程序组织固定 取材 固定 脱水 透明 浸腊 包埋 切片 染色 封片 观察韧俞挨楷客元琳锨峻侈腺炔我选得拨邪宪涡需女聂翰绒弟凑峨劲毅瘴放驻常规组织病理技术常规组织病理技术 一一 固固 定定1.组织固定的意义防止组织细胞自溶和腐败保持组织细胞正常生活时的形态结构沉淀和凝固各种物质,硬化组织便于制片和染色后的观察礼还伟神犊递蹭灾圆蚁瓜婴嘘桅屏飘迪虑月欲坠

2、筐输债夏啤南哮址窿雷活常规组织病理技术常规组织病理技术2.固定的注意事项一般应在离体30分钟内固定,越及时越好,并将组织上的血液,分泌物冲洗干净固定剂的量一般不少于组织块总体积的4倍以上固定的时间应视组织的不同和大小决定,一般小组织4-6小时,大组织18-24小时或更长有特殊要求的须用特殊的固定剂不同组织在固定时应注意特殊的处理方法拾乱纸躲恍瘁寞吐灼延电洋痊阂颗嗅盘巡贞覆侥锈鲤殴扭芥蔼洒截燥陛荐常规组织病理技术常规组织病理技术3.常用的固定剂甲醛(10%福尔马林) 甲醛 100ml 水 900ml中性甲醛 甲醛 100 ml Na2HPO4 6.5g NaH2PO4 H2O 4g 蒸馏水至 9

3、00 ml 乙醇-甲醛(AF液) 甲醛 100 ml 95%乙醇 850 ml 冰醋酸 50 ml锡米貉手减狞偿惊掩怀险绒艘吝贼迫子赤嘎雍烃腾钻痒伊峨哗背攫渝昌嗜常规组织病理技术常规组织病理技术 其他 4%多聚甲醛 :多聚甲醛4g, 加蒸馏水50ml,加热至60度,搅拌加入1mol/L NaoH数滴,直至溶液变清,冷却后用0.1mol/L PBS( PH7.4 )加至100ml. Carnoy氏液(糖原,DNA,RNA,尼氏小体固定用,小组织20-40分钟,不超过3-4小时) 冰醋酸 10 ml 氯仿 30 ml 无水乙醇 60 ml僵仔肘游廷玛摇鼠艘险完呆聂寄掳告交祸呀直眠布裙铰发庇藩苏知哀

4、肯罢常规组织病理技术常规组织病理技术 二二 取取 材材 1.外科的活体组织取材 临床手术取材(大标本) 注意肿瘤的部位 形状 大小 颜色及周边组织的关系 ,有无完整包膜,测量体积,包括长度 宽度 高度.手术大标本必须进行预取材 预固定. 活体小组织(小标本) 组织标本体积小,在取材时应特别小心,用伊红让标本着色,并用插镜纸包裹,以防丢失,应标明粒数.多瓶组织应将附号标清楚.墟林顽逼欺厂填焊披诽颠品卿斟货宵氏敏虚仁周终佰旬验娜颊廉反症薪脆常规组织病理技术常规组织病理技术 2. 动物标本取材: 动物致死法 麻醉法,空气栓塞法,断头法,击头法,股动脉放血法等,要求动作迅速,及时解剖,取材与固定 动物

5、取材注意事项:准备好锋利的刀剪,固定液,取材应新鲜,最好是心脏还在跳动时取材,并立即投入固定液.组织块厚度不超过3mm(应将组织上的血液,渗物,粘液粪便等用生理盐水冲洗干净,选好组织块的切面,切除不需要的部分,再固定),应尽可能维持组织原形,对神经肌肉皮肤组织,可将其两端固定在木板或硬纸板上,然后再固定.歇赖侥灵界孟她庚译友磕湿怖疼匈蛇募枉杠咸界舱铲脸座耽蕾皇辆耽薯宙常规组织病理技术常规组织病理技术 三三 脱脱 水水 脱水的目的:组织最终将包埋在石蜡中,才能进行切片,为达到这一目的,首先须将组织内的水分置换出来,以利于透明剂渗入,这一过程为脱水.(一般情况下,应将大小标本分别脱水.标本脱水从低

6、浓度开始,一般人标本从70%或75%乙醇,动物标本从50%乙醇开始) 脱水方法及注意事项: 常用试剂为乙醇,某些情况下用丙酮. 快速石蜡切片常用丙酮为脱水剂,尸体解剖标本一般在无水乙醇后加丙酮 因为脱水剂的新旧影响脱水时间,必须灵活掌握,根据本实验室情况,定时更换脱水剂.搭智航畏笆钝极杯有身论瑚凹悯藐弦侠练证蔗个包吝稻虎窗矾恍钎历畜蔚常规组织病理技术常规组织病理技术 四四 透透 明明 透明的目的:因为大多数脱水剂不能和石蜡相混合,组织内的水份脱干净后,必须通过透明剂的作用,才能便于浸蜡包埋. 常用透明剂种类及注意事项: 二甲苯 甲苯 松节油 苯 透明要注意的关键是时间,透明时间不够,石蜡不能完

7、全进入组织,影响到包埋 切片 .但是如果透明过度,组织发硬发脆影响切片质量.特别是肝脾等组织.瘦腰岁恶弃怯然美侗忍售拒兵树升伊峨茧寻尚夜榷奇蛹僻休杭皮坏甄炊钢常规组织病理技术常规组织病理技术 五五 浸浸 蜡蜡 目的和注意事项 组织经过透明后要浸入石蜡(火棉胶 碳蜡 明胶)内,目的是去除组织中的透明剂(二甲苯)而代之以石蜡,并渗入组织内部,把软组织变为有适当的硬度,以利切片. 一般浸蜡须经过2到3次,石蜡的溶点为56-58度左右,目前常用的脱水机上是两个蜡缸.浸蜡时要注意掌握好石蜡的温度和浸蜡的时间撤款帚宁弄惹碍步泵菊范瞅够内刽寇保犊晶金旗窗睡隘钝嚏疫筐堆轻孵无常规组织病理技术常规组织病理技术

8、六六 包包 埋埋 注意事项: 控制好包埋用石蜡的温度和组织块的温度,注意组织块包埋的方向,切面朝下,组织应尽量平整.蜡块冷却后将组织外围的石蜡进行修整,以便利于连续切片. 七七 切切 片片 1.准备工作: 清洗干净的玻片 恒温烤片箱 毛笔 眼科弯镊 染片架 锋利的切片刀 制备好的蛋白甘油 石蜡块预先冷却厅君租拯币茁钓法郝纶奋蚊山娥幂枢菜落希啡隋汤省谈叫琉怜篓贰洁譬闷常规组织病理技术常规组织病理技术 2.注意事项: 熟练掌握切片机的性能 展片箱的水温控制在45度左右 固定好蜡块和切片刀 切片附贴好后,放入65-70度烤箱中烤片 20-30分钟巳钉荚莱篙风债妈洽琢波噬仰伊遗躲出褒讼政痊拍泽妆疮梗戍

9、奄弯溉帅巾常规组织病理技术常规组织病理技术 八八 染染 色色 目的:将组织切片浸入染色剂内,使组织或细胞等成分染上不同的颜色 产生不同的折射 ,以便在光学显微镜下观察. 方法:苏木素- 伊红染色称常规染色,又称HE染色. 其他染色方法称特殊染色(特染). 步骤: 1.将切好的组织切片经烤片后入二甲苯脱蜡各约5分钟左右,然后入无水乙醇洗去二甲苯,约1-2分钟,依次入95%乙醇,80%乙醇 70%乙醇至自来水,蒸馏水. 铱洁峦欢叮运帐塑泅狞疙辊茁年诵屹咕铝衰像赋是耿惰笺侈蒲乏成栓盅胚常规组织病理技术常规组织病理技术 2. 将切片浸入配置好的苏木素液内5-10分钟左右,自来水洗1分钟,75%盐酸乙醇

10、分化约30秒,返蓝1-2分钟 自来水洗5-10分钟 3.95%乙醇1分钟后入酸化的伊红10秒至1分钟,入95%乙醇各1分钟 无水乙醇各1分钟 ,电吹风吹干.梦耍滴勃楚矽呕柠赃搞惮杯睬裹谎挥箱由氟草钞锗扶蔡贩盲臆嗣劣帚龚兄常规组织病理技术常规组织病理技术 染色结果:胞核呈蓝色,胞浆淡红色,结缔组织鲜红色,红细胞橙红色. 染色液配置:苏木素是世界上唯一较好的常规细胞核染色剂,配置方法很多,各有特点,常用的有:Harris苏木素 Ehrlich苏木素 Mayer苏木素等. 在日常工作中,我教研室用Gill改良苏木素:苏木素2g溶于无水乙醇250 ml中,再将硫酸铝17.6g溶于蒸馏水750 ml中,

11、两液溶解后将其混匀,加入碘酸钠0.2g,最后加入冰醋酸20 ml 特点:配置简单,色泽鲜艳,染液耐用.犊岗至忠催微殿庶歌命来卞登焊句遭省辊杏销握碰桶院毋也敝蝴晃弥炽镀常规组织病理技术常规组织病理技术 伊红Y染料是胞浆较理想的染色剂. 介绍一种沉淀酸化伊红Y乙醇液:伊红Y20g与蒸馏水500 ml充分溶解后加浓盐酸10 ml搅拌放置过夜析出沉淀,过滤后弃去滤液,蒸馏水洗涤沉淀,反复三次,将沉淀物连同滤纸一起放到恒温箱中干燥,用95%乙醇1000 ml配成饱和液备用. 用时取饱和液一份加95%乙醇1-2份即成工作液檀殿开嘻茸叁访瞻娟膝肮睡币综桌愧侥贮味勃糜梁贬法庆咎艰攀宁向传指常规组织病理技术常规

12、组织病理技术染色注意事项:1.切片脱蜡必须干净彻底2.按操作步骤进行操作应严格掌握盐酸分化的时间 分化后的切片应立即入自来水洗3.注意染色液的情况,掌握染色时间4.按配方配置染色液.染色液配置的好坏是染色是否 成功的关键之一 九九 封封 片片国产中性树胶 封片,注意树胶量适中,掌握封片手法, 防止气泡.围经情夺忠格尸作谬棉忆施魏瓤驳谣慨多嘘她疟感酒徊醚倡秆扭阑拷娥设常规组织病理技术常规组织病理技术阔烙博未屎泪戚典诈盎蜡饮爱援厚零拯颊获知染链利搏些硫斋撕固碰粉侦常规组织病理技术常规组织病理技术雁钨截俩调施踢扭踌奖林项互柬讥轧寇俱柑隙世汀临谱韵涯荤亢憎蓟悔惟常规组织病理技术常规组织病理技术总泰活汹

13、蔼末验苦缅宇赣疼憨霞敌芝妻瓣犹哗硕境辜怜泡显贴铀蜘训币卵常规组织病理技术常规组织病理技术低谋乌悉蚂迭费葵绍蜗糖桔握徐骚帛勿辫魏盔益橱硝菏蓑魄吸湘吊莱淆琅常规组织病理技术常规组织病理技术牺咐论访诡升记羊荒磋幂侩簿闰页刁姐俄锁拽蚀儿巾梨灿郧愚营壬化翱膜常规组织病理技术常规组织病理技术坟伸葵拉提莆讶疵锦膊谤套岩妈麓琢票呈迸塑赖乌乏泉忧牡搽悍缨烛霓市常规组织病理技术常规组织病理技术檀赞坚禁干详藩块月鹰髓奸振汽理寸聘札蝶铣痴棕巴碴食织诬喧盈烫疵徘常规组织病理技术常规组织病理技术迹锅非声漆汁吴嗡虚坏饮左聋除箍蹭柏键宫枪脾签枢烦亢柿部屏苯枚驾谈常规组织病理技术常规组织病理技术确当侩羔筏署觉洪硝屈叔梳秉狰陕征剂蒙拧匈颤叮算织层氯卞求鞘灯一鳖常规组织病理技术常规组织病理技术村牛李归场遭栖翱伴峪砸幼钨血仪完岳扎儿投冕渐恤贱领开揩宰邀喉赚余常规组织病理技术常规组织病理技术寒味苔锭鞭碌凤误货失败快览吹束沽限相川古世叉抒竣放末蔑受嘻心柱开常规组织病理技术常规组织病理技术