高中生物 12基因工程的基本操作程序配套课件 新人教版选修3

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1、活活 页页 规规 范范 训训 练练12基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序活活 页页 规规 范范 训训 练练活活 页页 规规 范范 训训 练练课程标准课程标准概概述基因工程的基本操作程序。述基因工程的基本操作程序。课标解读课标解读1.通通过比比较、分析，掌握目的基因、分析，掌握目的基因获取的常取的常见方法。方法。2.理解目的基因理解目的基因导入受体入受体细胞的具体胞的具体过程。程。3.结合基因的表达合基因的表达过程，掌握目的基因程，掌握目的基因检测与与鉴定的具体操作。定的具体操作。活活 页页 规规 范范 训训 练练1基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序(1) 的的获取。取。(2

2、) 的构建。的构建。(3)将目的基因将目的基因导入入 。(4)目的基因的目的基因的 。目的基因的获取目的基因的获取 目的基因目的基因基因表达载体基因表达载体受体细胞受体细胞检测与鉴定检测与鉴定活活 页页 规规 范范 训训 练练2目的基因的获取目的基因的获取(1)目目的的基基因因：主主要要是是指指 的的基基因因，也也可可以以是是一一些些具有具有 的因子。的因子。(2)常见方法：常见方法：从基因文库中获取从基因文库中获取基因文库的种类基因文库的种类编码蛋白质编码蛋白质调控作用调控作用基因组文库基因组文库cDNA文库文库活活 页页 规规 范范 训训 练练利用利用PCR技技术扩增目的基因增目的基因a原

3、理：原理： 。b条条件件： 、DNA模模板板、 、四四种种脱脱氧氧核核苷苷酸。酸。c过程程：目目的的基基因因DNA受受热变性性后后解解链为单链， 与与单链相相应互互补序序列列结合合，然然后后在在 作作用用下下进行行延延伸伸，如此重复循如此重复循环多次。多次。d结果果：每每一一次次循循环后后，目目的的基基因因的的量量可可以以 ，即成指数形式，即成指数形式扩增增(约为2n，n为扩增循增循环的次数的次数)。人人工工合合成成法法：如如基基因因比比较小小， 又又已已知知，可借助可借助 用化学方法直接人工合成。用化学方法直接人工合成。DNA双链复制双链复制引物引物Taq酶酶引物引物DNA聚合酶聚合酶增加一

4、倍增加一倍核苷酸序列核苷酸序列DNA合成仪合成仪活活 页页 规规 范范 训训 练练思思维维激激活活1 PCR过过程程中中，需需要要解解旋旋酶吗？所所需需要要的的DNA聚聚合合酶应具有什么特点？具有什么特点？提提示示PCR过过程程中中，DNA双双链链解解开开是是在在高高温温下下完完成成的的，不不需需要要解解旋旋酶酶；由由于于PCR过过程程温温度度较较高高，所所以以需需要要能能耐耐高高温温的的DNA聚合酶。聚合酶。活活 页页 规规 范范 训训 练练1提取目的基因方法的比较提取目的基因方法的比较方方法法基因文库的构建基因文库的构建PCR技术技术扩增扩增人工合成人工合成基因组文库基因组文库部分基因文库

5、部分基因文库(如如cDNA文库文库)活活 页页 规规 范范 训训 练练过过程程供体细胞中的供体细胞中的DNA 限制酶限制酶许多许多DNA片段片段 连接连接表达载体表达载体 导入导入受体细胞受体细胞外源外源DNA扩增，扩增，产生产生特定性状特定性状 分离分离目的基因目的基因目的基因的目的基因的mRNA 反转录反转录单链单链DNA 合成合成双链双链DNA 插入插入载体载体 导入导入受体菌群受体菌群(cDNA文库文库) 分离分离目的基因目的基因目的基因目的基因DNA 高温高温 解链解链单链单链DNA 与引与引 物结物结 合、合、 DNA 聚合聚合 酶酶大量目大量目的基因的基因蛋白质蛋白质的氨基的氨基

6、酸序列酸序列 推测推测mRNA的核苷的核苷酸序列酸序列 推测推测基因的基因的核苷酸核苷酸序列序列 化学化学 合成合成目的基因目的基因活活 页页 规规 范范 训训 练练优点优点操作简单操作简单专一性专一性可在短时间内大量可在短时间内大量扩增目的基因扩增目的基因专一性强，可产生自专一性强，可产生自然界中不存在的新基然界中不存在的新基因因缺点缺点工作量大、盲目工作量大、盲目性大、专一性差性大、专一性差操作过程较麻操作过程较麻烦，技术要求烦，技术要求过高过高需要严格控制温度、需要严格控制温度、技术要求高技术要求高适用范围小适用范围小活活 页页 规规 范范 训训 练练2PCR技术与技术与DNA复制的比较

7、复制的比较比较项目比较项目DNA复制复制PCR技术技术区区别别解旋方解旋方式式解旋酶催化解旋酶催化DNA在高温下变性解旋在高温下变性解旋场所场所细胞内细胞内(主要在细胞核内主要在细胞核内)细胞外细胞外(主要在主要在PCR扩增仪中扩增仪中)酶酶解旋酶、解旋酶、DNA聚合酶聚合酶耐热的耐热的DNA聚合酶聚合酶温度温度细胞内温和条件细胞内温和条件控制温度，需控制温度，需90 95 高温高温结果结果合成合成DNA分子分子合成合成DNA片段或基因片段或基因活活 页页 规规 范范 训训 练练联系联系(1)模板：均需要脱氧核苷酸双链作为模板模板：均需要脱氧核苷酸双链作为模板(2)原料：均为四种脱氧核苷酸原料

8、：均为四种脱氧核苷酸(3)酶：均需酶：均需DNA聚合酶聚合酶(4)引物：都需要引物，使引物：都需要引物，使DNA聚合酶从引物的聚合酶从引物的3端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸活活 页页 规规 范范 训训 练练特特别别提提醒醒(1)真真核核细细胞胞的的基基因因编编码码区区含含有有不不能能表表达达的的内内含含子子，因因此此，不不能能直直接接用用于于基基因因的的扩扩增增和和表表达达。获获得得真真核核细细胞胞中中目目的的基因时，一般用人工合成的方法。基因时，一般用人工合成的方法。(2)PCR扩扩增增的的过过程程：目目的的基基因因DNA受受热热变变性性后后解解链链为为单单链链，引引物物与与单单链

9、链相相应应的的互互补补序序列列结结合合，然然后后在在DNA聚聚合合酶酶作作用用下下进进行行延延伸伸，如如此此重重复复循循环环多多次次。由由于于延延伸伸后后得得到到的的产产物物同同样样可可以以和和引引物物结结合合，因因而而每每一一次次循循环环后后目目的的基基因因的的量量可可以以增增加加一一培培，即即成指数形式扩增成指数形式扩增(约为约为2n，其中，其中n为扩增循环的次数为扩增循环的次数)。活活 页页 规规 范范 训训 练练【巩固【巩固1】 下下列列获取目的基因的方法中需要模板取目的基因的方法中需要模板链的是的是()。从从基基因因文文库中中获取取目目的的基基因因利利用用PCR技技术扩增增目目的的基

10、基因因反反转录法法通通过DNA合合成成仪利利用用化化学学方方法法人人工工合合成成A BC D活活 页页 规规 范范 训训 练练解解析析PCR利利用用的的是是DNA双双链链复复制制原原理理，即即将将双双链链DNA之之间间的的氢氢键键打打开开，变变成成单单链链DNA，作作为为聚聚合合反反应应的的模模板板。反反转转录录法法则则是是以以目目的的基基因因转转录录成成的的信信使使RNA为为模模板板，在在逆逆转转录录酶酶的的作作用用下下，先先反反转转录录形形成成互互补补的的单单链链DNA，再再合合成成双双链链的的DNA。、则均不需要模板。则均不需要模板。答案答案D活活 页页 规规 范范 训训 练练1基因表达

11、载体的构建基因表达载体的构建(1)基基因表达载体的组成因表达载体的组成启动子启动子位置：基因的首端。位置：基因的首端。功能：是功能：是 识别和识别和结合的部位，驱动基因转录出结合的部位，驱动基因转录出 。基因表达载体的构建与转化基因表达载体的构建与转化 RNA聚合酶聚合酶mRNA活活 页页 规规 范范 训训 练练终止子止子位置：基因的尾端。位置：基因的尾端。功能：使功能：使 在所需要的地方停止下来。在所需要的地方停止下来。标记基因：基因：鉴别受体受体细胞中是否含有胞中是否含有 。(2)基因表达基因表达载体的功能体的功能使使目目的的基基因因在在受受体体细胞胞中中 ，并并且且可可以以遗传给下下一代

12、，使目的基因能一代，使目的基因能够 和和发挥作用。作用。(3)基因表达基因表达载体的构建体的构建一一般般用用同同一一种种限限制制酶分分别切切割割载体体和和目目的的基基因因，再再用用DNA连接接酶把两者把两者连接。接。转录转录目的基因目的基因稳定存在稳定存在表达表达活活 页页 规规 范范 训训 练练2将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞(1)转转化的概念化的概念目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内 的过程。的过程。(2)将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞 法：将目的基因导入双子叶植物和祼子植物。法：将目的基因导入双子叶植物和祼子植物。

13、 法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。 法：我国科学家独创的一种方法。法：我国科学家独创的一种方法。维持稳定维持稳定和表达和表达农杆菌转化农杆菌转化基因枪基因枪花粉管通道花粉管通道活活 页页 规规 范范 训训 练练(3)将目的基因将目的基因导入入动物物细胞胞方法：方法： 法。法。常用受体常用受体细胞：胞： 。(4)将目的基因将目的基因导入微生物入微生物细胞胞第第一一步步：首首先先用用Ca2处理理细胞胞，使使细胞胞处于于一一种种能能吸吸收收周周围环境中境中DNA分子的生理状分子的生理状态，这种种细胞称胞称为 细胞。胞。第第二二步步：将将重重组表表达达载

14、体体DNA分分子子溶溶于于缓冲冲液液中中与与感感受受态细胞胞混混合合，在在一一定定温温度度下下促促进感感受受态细胞胞吸吸收收 ，完成，完成转化化过程。程。显微注射显微注射受精卵受精卵感受态感受态DNA分子分子活活 页页 规规 范范 训训 练练思维激活思维激活2 为为什么微生物什么微生物细胞适合作胞适合作为基因工程的受体基因工程的受体细胞？胞？提提示示微微生生物物细细胞胞具具有有繁繁殖殖快快、多多为为单单细细胞胞、遗遗传传物物质质相相对对较少的优点，因此是基因工程常用的受体细胞。较少的优点，因此是基因工程常用的受体细胞。活活 页页 规规 范范 训训 练练1基因表达载体的构建步骤基因表达载体的构建

15、步骤(1)一一般般用用同同一一种种限限制制酶酶切切割割目目的的基基因因和和质质粒粒，使使其其产产生生相相同同的末端。的末端。(2)将将切切下下的的目目的的基基因因片片段段插插入入质质粒粒的的切切口口处处，再再加加入入适适量量DNA连连接接酶酶，形形成成一一个个重重组组DNA分分子子(重重组组质质粒粒)。构构建建过过程程(如下图如下图)。活活 页页 规规 范范 训训 练练活活 页页 规规 范范 训训 练练2将目的基因导入受体细胞的方法比较将目的基因导入受体细胞的方法比较细胞类细胞类型型方法方法说明说明特点特点植物细植物细胞胞农杆菌转农杆菌转化法化法目的基因插入到目的基因插入到Ti质粒的质粒的TD

16、NA上上通过农杆菌通过农杆菌进入进入植物细胞植物细胞插入到植物细胞中插入到植物细胞中的染色体的染色体DNA上上目的基因表目的基因表达达经济、有效，适合于双经济、有效，适合于双子叶植物和裸子植物子叶植物和裸子植物活活 页页 规规 范范 训训 练练植物植物细胞细胞基因枪基因枪法法目的基因包裹在微小的金粒或钨粒表面目的基因包裹在微小的金粒或钨粒表面用基因枪高速射入到受体细胞或组织中用基因枪高速射入到受体细胞或组织中目的基因表达目的基因表达成本较高，是单子叶成本较高，是单子叶植物中常用的基因转植物中常用的基因转化方法化方法花粉管花粉管通道法通道法含目的基因的溶液含目的基因的溶液滴加在柱头上滴加在柱头上

17、(或用含或用含目的基因的溶液处理花粉粒目的基因的溶液处理花粉粒)花粉粒吸入花粉粒吸入目的基因目的基因授粉授粉目的基因表达目的基因表达简便、经济，我国科简便、经济，我国科学家独创学家独创活活 页页 规规 范范 训训 练练动物细动物细胞胞显微注射显微注射法法目的基因片段目的基因片段受精卵的核内受精卵的核内受精卵受精卵经胚胎早期培养一般时间后移植到雌性经胚胎早期培养一般时间后移植到雌性动物的输卵管或子宫内动物的输卵管或子宫内使其发育成转使其发育成转基因动物基因动物最为有效地将目的基最为有效地将目的基因导入动物细胞的方因导入动物细胞的方法法微生物微生物细胞细胞感受态细感受态细胞胞Ca2处理微生物细胞处

18、理微生物细胞感受态细胞感受态细胞将将基因表达载体在缓冲液中与感受态细胞基因表达载体在缓冲液中与感受态细胞混合混合一定温度下促使感受态细胞吸收一定温度下促使感受态细胞吸收DNA分子分子简便、经济、有效简便、经济、有效活活 页页 规规 范范 训训 练练特特别别提提醒醒(1)基基因因表表达达载载体体的的构构建建是是实实施施基基因因工工程程的的第第二二步步，也是基因工程的核心。也是基因工程的核心。(2)对对于于植植物物来来说说，受受体体细细胞胞可可以以是是受受精精卵卵和和体体细细胞胞，但但常常用用体体细胞。细胞。(3)对对于于动动物物来来说说，受受体体细细胞胞一一般般是是受受精精卵卵。受受精精卵卵作作

19、为为受受体体细细胞胞具具有有体体积积大大、易易操操作作、经经培培养养可可直直接接表表达达性性状状的的优优点点。而而动动物体细胞的全能性受限。物体细胞的全能性受限。活活 页页 规规 范范 训训 练练【巩固【巩固2】 请请据据图回答下列回答下列问题。(1)基因工程的核心步基因工程的核心步骤是是_。(2)利用利用_技技术可以可以获得大量的目的基因。得大量的目的基因。该技技术利用利用_的原理，将基因的核苷酸序列不断加以复制，使其的原理，将基因的核苷酸序列不断加以复制，使其数量呈指数增数量呈指数增长。(3)图中中_位于目的基因的首端，位于目的基因的首端，是是_识别和和结合的部位。抗生合的部位。抗生素抗性

20、基因的作用是作素抗性基因的作用是作为_，用用 于于鉴别受体受体细胞中是否胞中是否导入了目的入了目的基因。基因。活活 页页 规规 范范 训训 练练解析解析本题考查基因表达载体的组成及其构建。基因工程的核本题考查基因表达载体的组成及其构建。基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建；目的基因的获取方法很多，其心步骤是基因表达载体的构建；目的基因的获取方法很多，其中中PCR技术能迅速获得大量目的基因，其依据的原理是技术能迅速获得大量目的基因，其依据的原理是DNA双链复制原理；基因表达载体必须包含目的基因、启动子、标双链复制原理；基因表达载体必须包含目的基因、启动子、标记基因、终止子，其中启动子位于目的基

21、因的首端，是记基因、终止子，其中启动子位于目的基因的首端，是RNA聚聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录为合酶识别和结合的部位，驱动基因转录为mRNA，抗生素抗性，抗生素抗性基因作为标记基因用于鉴别受体细胞中是否含有目的基因。基因作为标记基因用于鉴别受体细胞中是否含有目的基因。答案答案(1)基基因表达因表达载体的构建体的构建(2)PCRDNA双双链复制复制(3)启启动子子RNA聚合聚合酶标记基因基因活活 页页 规规 范范 训训 练练1分子检测分子检测(1)检检测测转转基基因因生生物物的的染染色色体体上上是是否否插插入入了了目目的的基基因因，这这是是目目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。的基

22、因能否在真核生物中稳定遗传的关键。方方法法： 技技术术(DNA探探针针转转基基因因生生物物 )。结果：如果显示出杂交带，就表明目的基因结果：如果显示出杂交带，就表明目的基因 。(2)检测目的基因是否转录检测目的基因是否转录方方法法： 技技术术(DNA探探针针转转基基因因生生物物 )。结果：如果显示出杂交带，则表明目的基因结果：如果显示出杂交带，则表明目的基因 。目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定 DNA分子杂交分子杂交DNA已插入染色体已插入染色体DNA中中分子杂交分子杂交mRNA转录出了转录出了mRNA活活 页页 规规 范范 训训 练练(3)检测目的基因是否翻目的基因是否翻译成蛋白成蛋

23、白质方法：方法： 。结果：若有果：若有杂交交带出出现，则表明目的基因表明目的基因 。2个体水平鉴定个体水平鉴定包包括抗虫、抗病的括抗虫、抗病的 实验，以确定是否有抗性及抗性，以确定是否有抗性及抗性程度。基因工程程度。基因工程产品需要与天然品需要与天然产品活性品活性进行比行比较等。等。抗原抗原抗体杂交抗体杂交已形成蛋白质产品已形成蛋白质产品接种接种活活 页页 规规 范范 训训 练练思思维维激激活活3 进进行行目目的的基基因因导入入及及转录检测时，均均用用到到DNA探探针，该探探针的脱氧核苷酸序列如何？其的脱氧核苷酸序列如何？其检测依据是什么？依据是什么？提提示示把把“目目的的基基因因片片段段”进

24、进行行放放射射性性同同位位素素标标记记或或进进行行荧荧光光标标记记，用用标标记记好好的的基基因因片片段段做做探探针针，与与受受体体生生物物的的基基因因组组DNA进进行行杂杂交交，如如果果有有杂杂交交带带出出现现，根根据据分分子子杂杂交交的的基基本本原原理理，说说明明目目的的基基因因与与受受体体细细胞胞基基因因组组DNA具具有有同同源源性性，也也就就是是说说目目的的基基因因已已经经被被导导入入受受体体细细胞胞内内，反反之之，则则说说明明目目的的基基因因没有进入受体细胞中。没有进入受体细胞中。活活 页页 规规 范范 训训 练练目的基因导入受体细胞的结果分析目的基因导入受体细胞的结果分析活活 页页

25、规规 范范 训训 练练说明：说明：上上图中中发生生与与发生生相比，相比，会使目的基因的会使目的基因的遗传特特性得以性得以稳定定维持和表达，原因是在持和表达，原因是在进行行细胞分裂胞分裂时，细胞核上胞核上的的DNA经复制后平均分配到两个子复制后平均分配到两个子细胞中，保胞中，保证了了亲子代子代遗传性状的性状的稳定性，而定性，而细胞分裂胞分裂时，细胞胞质是不均分的，子是不均分的，子细胞不一定含有目的基因。胞不一定含有目的基因。活活 页页 规规 范范 训训 练练【巩巩固固3】 目目的的基基因因导入入受受体体细胞胞后后，是是否否可可以以稳定定维持持和和表表达达其其遗传特特性性，只只有有通通过鉴定定和和

26、检测才才能能知知道道。下下列列属属于于目目的的基因基因检测和和鉴定的是定的是()。检测受受体体细胞胞是是否否有有目目的的基基因因检测受受体体细胞胞是是否否有有致致病病基基因因检测目目的的基基因因是是否否转录mRNA检测目目的的基因是否翻基因是否翻译蛋白蛋白质A B C D活活 页页 规规 范范 训训 练练解析解析目的基因的检测包括：首先检测转基因生物的染色体目的基因的检测包括：首先检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是用上是否插入了目的基因，方法是用DNA探针，使探针，使DNA探探针与基因组针与基因组DNA杂交；其次检测目的基因是否转录出了杂交；其次检测目的基因是否转录出了m

27、RNA，方法是用基因探针与，方法是用基因探针与mRNA杂交；最后检测目的基因杂交；最后检测目的基因是否翻译了蛋白质，方法是进行抗原是否翻译了蛋白质，方法是进行抗原抗体杂交。抗体杂交。答案答案C活活 页页 规规 范范 训训 练练【例【例1】 水水稻种子中稻种子中70%的磷以植酸形式存在。植酸易同的磷以植酸形式存在。植酸易同铁、钙等金属离子或蛋白等金属离子或蛋白质结合排出体外，是多种合排出体外，是多种动物的抗物的抗营养因养因子，同子，同时，排出的大量磷，排出的大量磷进入水体易引起水入水体易引起水华。为从根本上从根本上解决水稻中的高植酸解决水稻中的高植酸问题，可将植酸，可将植酸酶基因基因导入水稻，培

28、育入水稻，培育低植酸低植酸转基因水稻品种。下基因水稻品种。下图是是获取植酸取植酸酶基因的流程。基因的流程。目的基因的获取目的基因的获取 活活 页页 规规 范范 训训 练练据据图回答下面的回答下面的问题。(1)图中基因中基因组文文库_(填填“小于小于”“”“等于等于”“”“大于大于”)cDNA文文库。(2)B过程需要的程需要的酶是是_；A、C过程中程中_(填填“可以可以”“”“不可以不可以”)使用同一种探使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。含目的基因的菌株。(3)目的基因目的基因和和除从构建的文除从构建的文库中分离外，中分离外，还可以分可以分别利用利用图中中_和和_为模板直接模板直接进行行PCR

29、扩增，增，该过程中程中所用所用酶的的显著特点是著特点是_。活活 页页 规规 范范 训训 练练思维导图：思维导图：活活 页页 规规 范范 训训 练练深深度度剖剖析析基基因因组组文文库库包包含含本本物物种种全全部部遗遗传传信信息息，cDNA文文库库仅仅包包含含部部分分遗遗传传信信息息；由由mRNA构构建建cDNA文文库库需需逆逆转转录录酶酶，筛筛选选目目的的基基因因时时，可可用用同同一一种种探探针针对对由由基基因因组组文文库库或或cDNA文文库库中中获获取取的的目目的的基基因因予予以以检检测测，若若通通过过PCR技技术术扩扩增增目目的的基基因因，可可利利用用DNA或或cDNA作作为为模模板板，该该

30、扩扩增增过过程程需需耐耐高高温温的的DNA聚聚合酶参与。合酶参与。答案答案(1)大大于于(2)逆逆转录酶可以可以(3)DNAcDNA耐高温耐高温活活 页页 规规 范范 训训 练练【例【例2】 1抗抗胰蛋白胰蛋白酶缺乏症是北美常缺乏症是北美常见的一种的一种单基因基因遗传病，病，患者成年后会出患者成年后会出现肺气肺气肿及其他疾病，及其他疾病，严重者甚至死亡。利重者甚至死亡。利用基因工程技用基因工程技术将控制将控制该酶合成的基因合成的基因导入羊的受精卵，最入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺培育出能在乳腺细胞表达人胞表达人1抗胰蛋白抗胰蛋白酶的的转基因羊，从基因羊，从而更容易而更容易获得得这种种酶。基因

31、表达载体的构建与转化基因表达载体的构建与转化 活活 页页 规规 范范 训训 练练下列关于下列关于该过程的叙述中程的叙述中错误的是的是()。A载体体上上绿色色荧光光蛋蛋白白基基因因(GFP)的的作作用用是是便便于于筛选含含有有目目的基因的受体的基因的受体细胞胞B将将目目的的基基因因导入入羊羊膀膀胱胱细胞胞中中，将将会会更更加加容容易易得得到到1抗抗胰胰蛋白蛋白酶C培培养养出出的的转基基因因羊羊的的所所有有细胞胞中中都都含含有有该目目的的基基因因，故故该羊有性生殖羊有性生殖产生的后代也都能生的后代也都能产生生1抗胰蛋白抗胰蛋白酶D目的基因与目的基因与载体重体重组过程需要程需要DNA连接接酶的催化作

32、用的催化作用活活 页页 规规 范范 训训 练练思维导图：思维导图：活活 页页 规规 范范 训训 练练深深度度剖剖析析基基因因表表达达载载体体包包括括目目的的基基因因、启启动动子子、终终止止子子、标标记记基基因因等等；将将目目的的基基因因导导入入动动物物细细胞胞，常常以以受受精精卵卵作作为为受受体体细细胞；将目的基因与载体结合，需要胞；将目的基因与载体结合，需要DNA连接酶的催化作用。连接酶的催化作用。答案答案C活活 页页 规规 范范 训训 练练 思维拓展思维拓展基因表达载体的几个关键组成的作用：基因表达载体的几个关键组成的作用：标标记记基基因因便便于于筛筛选选；目目的的基基因因使使转转基基因因

33、生生物物获获得得我我们们所所需需的的性性状状；启启动动子子启启动动目目的的基基因因的的转转录录；终终止止子子终终止止目目的的基基因因的的转转录录；复复制制原原点点使使DNA复复制制以以便便于于进进行行表表达达载载体体的的扩扩增增。另另外外，一一般般情情况况下下常常用用同同一一种种限限制制酶酶切切割割目目的的基基因因和和载载体体，以以便便于于表表达达载载体体的的构构建建，但但是是特特殊殊情情况况下下，用用不不同同的的限限制制酶酶切切割割目目的的基基因因和和载载体体，如如果果切切出出的的黏黏性性末末端端相相同同，也也是是可可行行的。的。活活 页页 规规 范范 训训 练练【例例3】 在在判判断断抗抗

34、虫虫基基因因是是否否成成功功转入入棉棉花花基基因因组的的方方法法中中，不不属于分子属于分子检测的是的是()。A通通过观察害虫吃棉叶是否死亡察害虫吃棉叶是否死亡B检测目的基因片段与目的基因片段与DNA探探针能否形成能否形成杂交交带C检测目目的的基基因因转录形形成成的的mRNA与与DNA探探针能能否否形形成成杂交交带D检测目目的的基基因因表表达达产物物蛋蛋白白质能能否否与与特特定定抗抗体体形形成成杂交交带目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定活活 页页 规规 范范 训训 练练思维导图：思维导图：活活 页页 规规 范范 训训 练练深深度度剖剖析析A项项属属于于个个体体生生物物学学水水平平的的鉴鉴定

35、定，不不是是分分子子检检测测。B、C两两项项为为分分子子检检测测，利利用用分分子子杂杂交交技技术术，观观察察目目的的基基因因及及目目的的基基因因转转录录形形成成的的mRNA能能否否与与DNA探探针针进进行行杂杂交交形形成成杂杂交交带带；D项项也也为为分分子子检检测测内内容容，利利用用抗抗原原抗抗体体杂杂交交的的原原理理，检检测测基基因表达产物能否与特定抗体形成杂交带。因表达产物能否与特定抗体形成杂交带。答案答案A活活 页页 规规 范范 训训 练练温馨提示温馨提示(1)DNA探针是用放射性元素或荧光分子标记的目的探针是用放射性元素或荧光分子标记的目的基因的脱氧核苷酸单链。基因的脱氧核苷酸单链。(2)进行转录水平的检测原理与复制水平的检测原理相似，只是进行转录水平的检测原理与复制水平的检测原理相似，只是被检测的物质不再是转基因生物基因组被检测的物质不再是转基因生物基因组DNA，而是转基因生物，而是转基因生物细胞内的细胞内的mRNA；进行翻译水平的检测，则是利用抗原与抗体；进行翻译水平的检测，则是利用抗原与抗体特异性结合的原理。特异性结合的原理。(3)不论是复制水平、转录水平还是翻译水平的检测，都是在体不论是复制水平、转录水平还是翻译水平的检测，都是在体外进行的。外进行的。