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1、抗核抗体基本概念及临床检测抗核抗体基本概念及临床检测传统定义传统定义 针对细胞核成分的自身抗体的总称。针对细胞核成分的自身抗体的总称。广义定义广义定义 针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称 靶靶抗抗原原存存在在于于包包括括细细胞胞核核、细细胞胞浆浆、细细胞胞骨骨架架、细细胞胞分分裂裂结构等部位结构等部位抗核抗体的定义抗核抗体的定义ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊
2、断、病情判断和疗效观察的指标织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标在非结缔组织病中也可出现阳性。在非结缔组织病中也可出现阳性。正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为常表现为IgM型型高滴度高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病则高度提示自身免疫性疾病 目前，目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。筛查实验。ANA检测的临床意义检测的临床意义系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮活动期活动期非活动期非活动期药物诱导的红斑狼疮药物诱导的红斑狼疮混合性结缔组织病（混合性结缔组
3、织病（MCTD、Sharp综合征）综合征）类风湿性关节炎类风湿性关节炎进行性系统性硬化症进行性系统性硬化症多发性肌炎及皮肌炎多发性肌炎及皮肌炎干燥综合征干燥综合征慢性活动性肝炎慢性活动性肝炎溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎其它风湿病其它风湿病正常人正常人 9510080100100100204020508595305070803040265-10ANA检测的临床意义ANA实验室检测策略推荐实验室检测策略推荐ANA间接免疫荧光法筛查实验间接免疫荧光法筛查实验间接免疫荧光法检测间接免疫荧光法检测ANA基本原理基本原理间接免疫荧光法间接免疫荧光法 包被包被HEp-2细胞的基质玻片细胞的基质玻片样本中样本中A
4、NA-IgGFITC标记的抗人标记的抗人IgG抗体抗体l抗原谱完整抗原谱完整 (细胞核、细胞浆中近百种自身抗原细胞核、细胞浆中近百种自身抗原)l人源细胞，无种属非特异荧光干扰人源细胞，无种属非特异荧光干扰l肿瘤细胞，易于培养及商品化生产肿瘤细胞，易于培养及商品化生产l核质比大，可观察到多种不同荧光核型核质比大，可观察到多种不同荧光核型ANA筛查的经典和标准基质筛查的经典和标准基质: HEp-2均质型核点型着丝点型核仁型Scl-70粗颗粒型细颗粒型核膜型.核糖体P蛋白线粒体型高尔基体溶酶体肌动蛋白波形蛋白基于基于Hep-2细胞为基质的细胞为基质的ANA初筛实验初筛实验ANA间接免疫荧光法筛查试验
5、的实际价值间接免疫荧光法筛查试验的实际价值l初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果）初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果）l尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围）尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围）l获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果几个相对常见且重要的荧光核型几个相对常见且重要的荧光核型均质型核点型着丝点型核仁型粗颗粒型核膜型.核糖体P蛋白线粒体型肌动蛋白常见且
6、重要核型的标准l核型表现相对典型l阳性率相对较高l靶抗原相对明确应重视应重视ANA滴度的检测滴度的检测抗体滴度的临床意义1、明确界定自身免疫性疾病患者；2、作为疾病进程、临床疗效和病情预后及转归等的判断指标当前国际主流ANA间接免疫荧光法检测系统广泛采用的起始稀释度为1:40。即该检测系统的正常参考范围为1:40。梯度稀释时的稀释因子为1:2。HOB公司产品推荐按照1:80开展稀释。 荧光强弱及血清稀释度荧光强弱及血清稀释度荧光强弱判读荧光强弱判读 观察标本的特异性荧光强度一般用“+”号表示。“”为无或仅见极微弱荧光；“+”为荧光较弱但清楚可见；“+”为荧光明亮；“+”为耀眼的强荧光。临床上根
7、据特异性荧光强度达临床上根据特异性荧光强度达“+ +”以上判定为阳性以上判定为阳性抗体梯度稀释抗体梯度稀释起始稀释：起始稀释：1:801:80梯度稀释（稀释因子梯度稀释（稀释因子2 2）1:1601:1601:3201:3201:6401:6401:12801:12801:25601:2560直至抗体转阴直至抗体转阴各稀释度的反应性各稀释度的反应性抗体滴度抗体滴度临床意义临床意义1:801:640阳性阳性+1:80阳性，需结合临床表现综合判断阳性，需结合临床表现综合判断阳性阳性+1:160阳性，提示可能存在相关疾病阳性，提示可能存在相关疾病阳性阳性+弱弱+1:320明确阳性，提示可能存在相关疾
8、病明确阳性，提示可能存在相关疾病阳性阳性+阳性阳性+1:640中等阳性，提示可能存在相关疾病中等阳性，提示可能存在相关疾病阳性阳性+阳性阳性+1:1280强阳性，高度提示存在相关疾病强阳性，高度提示存在相关疾病阳性阳性+阳性阳性+1:2560极强的阳性，高度提示存在相关疾病。极强的阳性，高度提示存在相关疾病。ANA荧光滴度判读举例荧光滴度判读举例HOB公司间接免疫荧光法产品系列公司间接免疫荧光法产品系列产品系列产品系列基质基质检测项目检测项目ANA筛查筛查HEp-2细胞细胞ANA各种不同核型各种不同核型dsDNA绿蝇短膜虫绿蝇短膜虫抗抗dsDNA抗体抗体AKA大鼠食管大鼠食管抗角蛋白抗体抗角蛋
9、白抗体ANCA中性粒细胞中性粒细胞乙醇和甲醛固定乙醇和甲醛固定抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体组织器官组织器官大鼠肝大鼠肝/肾肾/胃胃ASMAPCAAMALKM-1LC-1HEp-2细胞产品系列细胞产品系列 （举例）（举例）166孔孔1010孔孔812孔孔ANA靶抗原确认实验靶抗原确认实验条带酶免分析法检测条带酶免分析法检测ANA基本原理基本原理LIA检测方法原理检测方法原理底物底物颜色反应颜色反应硝酸纤维膜硝酸纤维膜IgG抗体抗体碱性磷酸酶标记的抗人碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体抗体ANAANA谱系列谱系列U1-nRNP U1-nRNP 和和 SmSm抗原抗原SLE: 5-30%SL
10、E: 5-30%SLE: 15-40%SLE: 15-40%MCTD: 95-100%MCTD: 95-100%功能功能: :参与参与mRNAmRNA前体的剪切前体的剪切SS-A (Ro-60), Ro-52 和和SS-BAnti-SS-A (60 kDa)干燥综合征.:40-95%SLE: 20-60%新生儿狼疮: 96%Anti-SS-B干燥综合征.:40-95%SLE: 10-20%新生儿狼疮: 78%Anti-Ro-52 (52 kDa)非特异功能: 调控RNA翻译功能:RNA聚合酶III辅助蛋白XScl-70 (DNA-拓扑异构酶拓扑异构酶I)功能: 在DNA复制和转录过程中完成双链
11、解螺旋疾病疾病:硬化症硬化症: 50% - 75%Anti-Scl-70 特点特点局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为10% 和和48%。抗抗Scl-70抗体阳性的患者通常病情发展快、预抗体阳性的患者通常病情发展快、预后差、多器官累及。后差、多器官累及。PM-Scl抗原抗原: 几种多肽复合物几种多肽复合物(分子量间于分子量间于20-100kDa)，主要的靶抗原为主要的靶抗原为100 kDa 相关疾病相关疾病: 硬化症硬化症:2% - 5% 肌炎肌炎:8%重叠综合征重叠综合征:24%Jo-1抗原:组氨酰tRNA合成酶(50 kDa),细胞浆中的磷蛋白相关疾
12、病: 多肌炎/皮肌炎的血清学标志，阳性率为25- 35%，当伴有肺间质纤维化的多肌炎，阳性率可高达70%。 着丝点着丝点抗原：动粒中的4种蛋白：A (17 kDa), B (80 kDa), C(140 kDa), D蛋白 (50 kDa)。着丝点蛋白 B为主要的靶抗原 (与IIF：100%)功能: 分裂期纺垂体的附着点 相关疾病: 硬化症:18%局限型: 80% - 95%(CREST综合征) PCNA:细胞增殖相关核抗原细胞增殖相关核抗原I型型抗原抗原:DNA聚合酶聚合酶的辅助蛋白的辅助蛋白 发挥控制细胞周期的作用发挥控制细胞周期的作用相关疾病相关疾病: 系统性红斑狼疮的特异性抗体，但其发
13、生率仅为系统性红斑狼疮的特异性抗体，但其发生率仅为3%。 染色体结构示意图染色体结构示意图DNA核小体染色体染色质组蛋白dsDNA抗原：双链DNA，天然DNA(脱氧核糖核酸骨架)相关疾病：dsDNA: 为SLE的诊断标准之一，阳性率为60-90%，不同的检测方法诊断特异性差别较大。抗体滴度与疾病的活动性、狼疮肾炎的发病风险具有相关性。组蛋白组蛋白抗原:H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4(主要的靶抗原为H1和H2B)相关疾病: 药物诱导性 LE: 100%(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体)各种结缔组织病：SLE: 30-80% SSc: 30% SS: 10
14、%核小体核小体抗原:组蛋白和DNA形成的复合物 相关疾病: SLE：高特异性指标，阳性率为50-95%，特异性几乎100%，抗核小体抗体可独立于抗dsDNA抗体单独出现，因而抗核小体抗体与抗dsDNA抗体联合检测，可提高SLE的血清学检出率。40 S亚基60 S亚基亚基P0P1 P1P2 P2抗原抗原:核糖体核糖体60S 亚基中的亚基中的3种蛋白质种蛋白质:P0, P1, P2. 具备相同的碳端抗原位点具备相同的碳端抗原位点核糖体核糖体 P蛋白蛋白相关疾病相关疾病: SLE:为为SLE的高特异性指标，阳性率为的高特异性指标，阳性率为5-15%，常见于神经狼疮。常见于神经狼疮。AMA与与AMA-M2靶抗原:线粒体亚结构上几种生化性质明确的物质，可分为九种类型。其中最常见临床意义比较明确的为AMA M2，由AMA不同亚型的临床相关疾病，因而对AMA阳性结果做进一步的分型实验非常重要。主要相关疾病: PBC:（高滴度AMA M2）85% - 95%。在其他慢性肝脏疾病（30%）和进行性系统性硬化症（7-25%）中也可检出AMA M2，但滴度较低。
