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1、cobas 8000-c 702 工作原理工作原理 DEC, 2014 1.光学检测原理光学检测原理 2. ISE检测原理检测原理 光路图光路图光学原理光学原理当光通过溶液时，溶液中不同物质会吸收不同波长的光，吸收的越多，透过的越少。溶液中物质的浓度与吸收光的强弱（吸光度）呈一定的数学关系。朗勃朗勃-比尔定律比尔定律(Lambert- Beers Law)The Lambert-Beer law 就是溶液中物质的浓度与吸光度呈线性关系A = * c * lc:溶液中测量物质的浓度 :摩尔吸光系数l: 光径由于由于 and l 都是常量，所以能够得到 Abs concLambert- Beers
2、 Law（朗勃（朗勃-比尔定律）比尔定律）如果不知道，就需要计算测量物质的定标曲线。然后跟据未知浓度的物质的测量不知道，就需要计算测量物质的定标曲线。然后跟据未知浓度的物质的测量吸光度值，结合定标曲线计算该物质的浓度，如下图。吸光度值，结合定标曲线计算该物质的浓度，如下图。 Concentration (amount of substance)Absorbance (amount of color)40123456706050302010Calibrator/standard (cfas)Unknown sampleCobas c 702 定标概念定标概念 Lot calibrationRea
3、gent lot specificCalibration of a cassette, which is 24 h on board.Newest calibration Calibration to be transferred Calibration (newest、 Lot. Calibration) is transferred to cassette, which does not have any calibration data.Cobas c 702 定标类型定标类型定标品定标品S1小数点位数与计算小数点位数与计算K值得关系值得关系如果修改了定标品如果修改了定标品1的小数点位数
4、，该注意什么？的小数点位数，该注意什么？Cell Blank Measurements1.Stored Cell Blank ：周保养杯空白数据，做为比色杯本底保存在系统周保养杯空白数据，做为比色杯本底保存在系统内，每执行一次内，每执行一次Cell Blank measurement ,杯空白数据自动更新。杯空白数据自动更新。2.Passing Cell Blank ：每个比色杯用于分析测量之前进行的杯空白测每个比色杯用于分析测量之前进行的杯空白测量，该杯空白数据与量，该杯空白数据与Stored Cell Blank 比较不超过比较不超过0.1ABS 为合格。为合格。1）某个比色杯连续两次）某
5、个比色杯连续两次Passing Cell Blank 与与Stored Cell Blank 超过超过0.1ABS，仪器报仪器报“Abnormal cell blank (twice) ”,仪器自动启用该比色杯。仪器自动启用该比色杯。2）连续）连续10个比色杯连续两次个比色杯连续两次Passing Cell Blank 与与Stored Cell Blank 超过超过0.1ABS，仪器报，仪器报“Abnormal cell blank (ten times) ”,仪器自动停下来，不能进仪器自动停下来，不能进行样本检测。行样本检测。 （ 哪些情况会报哪些情况会报10X？）？）光度计检查（光度计检
6、查（Photometer Check）：）：包含在日保养维护组合里，是指包含在日保养维护组合里，是指第一个比色杯在第一个比色杯在12个波长的空白吸光度值。（个波长的空白吸光度值。（解读解读）C 702 反应顺序反应顺序Cobas c 702 10分钟反应时间共测38个点，测光间隔为16.2秒。两点终点法两点终点法R3一点终点法一点终点法两点速率法两点速率法速率速率A法法Last mp1st. mpSample Reag. at R1 timing 1.光学检测原理光学检测原理 2. ISE检测原理检测原理 Modular ISE Modular ISE 检测所需要的电极检测所需要的电极1 1、
7、ISEISE电极电极RefRef电极电极内部充满 KCL凝胶，外部的 KCL参比液流经电极内部，管路有微孔与凝胶相通，然后与样本流混合，提供稳定的参比信号RefRef电极在机稳定性：至少电极在机稳定性：至少6 6个月个月2 2、ISEISE电极电极 NaNa电极电极 玻璃膜电极3 3、ISEISE电极电极 K K电极电极 PVC膜电极4 4、ISEISE电极电极 ClCl电极电极 PVC膜电极K K、NaNa、ClCl在机稳定性：在机稳定性：3 3个月或个月或90009000个测试个测试Ref. 参比电极- 每个电极所测得的信号都是相对于参比电极而言的每个电极所测得的信号都是相对于参比电极而言
8、的- 每个离子电极都与参比电极形成回路每个离子电极都与参比电极形成回路- 电动势电动势 (EMF): 是指参比电极和离子电极之间的电压是指参比电极和离子电极之间的电压盐桥混合液KCl 样本- 参比电极提供一个稳定的测定信号参比电极提供一个稳定的测定信号- 参比电极液使用的是参比电极液使用的是1mol 的的KCl 溶液溶液1. 分注分注550l 的内标液的内标液 (IS) 进行冲洗进行冲洗2. 冲洗完后，真空吸干内标液冲洗完后，真空吸干内标液3. 注射器抽取注射器抽取 65l KCl参比电极液通过参比电极形成盐桥参比电极液通过参比电极形成盐桥4. 分注分注500l 的的 IS 进入进入TOWER
9、用于用于1点定标点定标5. 其中其中300l 的的IS被吸取通过电极进行被吸取通过电极进行1点定标点定标6. 真空吸干内标液真空吸干内标液TOWER 内剩余的内标液内剩余的内标液7. 15l 的标本被吸入的标本被吸入TOWER内内8. 450l 的稀释液被吸入对标本进行稀释及混匀的稀释液被吸入对标本进行稀释及混匀9. 注射器再抽取注射器再抽取 65l KCl参比电极液通过参比电极形成盐桥盐参比电极液通过参比电极形成盐桥盐10. 350l 被稀释好的样本被吸收通过电极进行检测被稀释好的样本被吸收通过电极进行检测11. 真空吸走剩余的样本到废液系统真空吸走剩余的样本到废液系统 Preparatio
10、nInternal StandardSampleISE检测过程检测过程由此可知，由此可知，每个标本消耗样每个标本消耗样15ul 、DIL 450ul、REF130UL、IS 550ul（连续（连续测量）测量）/1100L（单次测量）（单次测量）ISE 定标定标在在rack receptionrack reception模式每模式每1010分钟执行一次分钟执行一次or or 检测标本时检测标本时。每24h24h执行一次执行一次一点定一点定标全点定全点定标补偿内部系统的变化Full point calibration:- 电极老化(slop)- 当前系统条件或试剂的偏差(offset)- 系统污染
11、导致的电极响应速率和携带污染1 point calibration:- 在样本测量之间的IS测量 考虑基于系统的漂移(如: 温度变化，电极膜的改变)ISE Standard 1 (Low)aqueous ISE Standard 2 (High) aqueous ISE Standard 3 (Compensator)protein basedISE Standard 3 (High)CalibratorsS1-Low and S2-High are measured for Na, K and ClS1 - Lowmmol/LS1 Highmmol/LNa120160K37Cl801202
12、point calibrationInternal standard solution 每次检测之前补偿电极相应的偏移和改变S1 Lowmmol/IS2 Highmmol/IInternal Standardmmol/I Na120160140K375Cl80120100ISE 的电动势测量的电动势测量S1、S2、S3分分别测量三次，每次量三次，每次测量取量取5个点的个点的电动势，在，在这5个点的个点的值中中会去掉一个最高和一个最低会去掉一个最高和一个最低值，取剩下的三个点的平均，取剩下的三个点的平均值作作为结果。果。如果在这三个值中最大偏差超过以下范围：Na 0,7 mV K 1,0 mV
13、CI 0,8 mV仪器将产生一个 NOISE的报警。3 780 - 120120 - 160Log Transformation Signal to concentration relationshipLog of concentrationISE ISE 定标定标 斜率计算斜率计算SlopesTargetmV/ decadeMargin mV/ decadeFailed (Slope?)Na+50 - 6845 49.9 45K+50 - 6845 49.9 -35由以上公式可知，在ISE硬件无故障的情况下，斜率是由S1和S2定标品EMF和浓度决定。内标的计算内标的计算1点定标点定标内部定标
14、在每次定标和做每个标本前进行 .飘移得到纠正- 电导线的连接电势变化、 膜、试剂，系统温度ISE 3. Internal standard calculation内标液浓度由斜率决定IS的EMFs 必须在S1和 S2的EMF均值附近由于IS浓度须用于每次病人结果计算，所以更换内标液后应该重新定标补偿值的计算补偿值的计算现有补偿液用完后，将使用S2替代作为S3。补偿值（C. value）在每次结果计算时自动对结果进行纠正S1 K+ : -45.4 S2 K+ : -26.1S3的浓度是由斜率（Slope）t S3 的EMFIS的浓度及电动势所共同决定的所共同决定的.ISE ISE 定标定标补偿值
15、的计算补偿值的计算ISE 3. Compensation Value CalculationTEST IS.EMF S1 EMF S2 EMF S3 EMF SLOPE IS.CONC. S3 CONC. C.VALUE Na -33.6 -37.3 -30.6 -34.1 53.6 141 138 -2 K -33.3 -45.4 -26.1 -36.8 52.4 5.1 4.37 -0.12 Cl 131.8 134.4 127.1 131.4 -41.5 92 94 7ISE 3. Compensation Value Calculation定标监测报告中的补偿值是给定的靶值减去测定的浓
16、度值所得每一个标本检测的结果都将加上相应的补偿值，得到最后的标本结果CIS : 内标液浓度EMFSampl 样本中特定离子的电压差EMFIS 内标液中特定离子的电压差 ISE check Na EMF K EMF Cl EMF REF EMF-32.0-34.4132.80.2-32.0-34.4132.70.2-32.0-34.5132.70.2-32.1-34.5132.70.2-32.1-34.5132.80.2-32.0-34.5132.80.1-32.1-34.6132.80.2-32.0-34.6132.80.2-32.0-34.6132.90.2-32.0-34.5132.90.
17、3-32.1-34.5133.00.3-32.1-34.5132.90.3-32.1-34.6132.80.3-32.1-34.6132.80.2-32.1-34.7132.80.2-32.1-34.7132.80.2-32.0-34.8132.90.2-32.1-34.7132.90.2-32.0-34.8132.80.1ISE CHECK 是只检测是只检测IS液流经液流经ISE检测单元时，各电极的电动，检测单元时，各电极的电动，势，不用势，不用DIL，如右图。，如右图。执行执行ISE Check 了解了解ISE的管的管路状况路状况总结总结Thank you for your attentionRoche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031ChinaThis presentation is our intellectual property. Without our written consent, it shall neither be copied in any manner, nor used for manufacturing, nor communicated to third parties.COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche
