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1、生物化学(shn w hu xu)与分子生物学教研室xxxQQ:xxxxxxxxxx :xxxxxxxxxxx血糖测定血糖测定(cdng)(cdng)葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -过氧化物酶法及肾上腺素对血糖浓过氧化物酶法及肾上腺素对血糖浓度的影响度的影响, , 尿糖检测尿糖检测第一页，共二十二页。实验课安排实验课安排(npi)(npi)二、注射二、注射(zhsh)(zhsh)肾上肾上腺素腺素三、三、30min30min尿糖检测尿糖检测(jin (jin c)c)四、注射后取血四、注射后取血五、血糖检测五、血糖检测一、注射前取血一、注射前取血第二页，共二十二页。实验内容：实验内容：测定血糖浓度
2、，观察测定血糖浓度，观察(gunch)(gunch)肾上腺素对血糖浓度肾上腺素对血糖浓度的影响的影响半定量测量尿糖半定量测量尿糖实验要求：实验要求：掌握葡萄糖氧化酶测定血糖的方法、原理、掌握葡萄糖氧化酶测定血糖的方法、原理、测定操作、正常参考值、临床意义测定操作、正常参考值、临床意义熟悉尿糖测定及意义熟悉尿糖测定及意义第三页，共二十二页。血糖血糖(xutng)(xutng)的调节的调节血糖血糖(xutng)(xutng)过高过高血糖血糖(xutng)(xutng)缺乏缺乏胰高血糖素胰高血糖素糖皮质激素糖皮质激素血糖的来源和去路血糖的来源和去路血糖血糖氧化分解氧化分解合成合成转化转化H H2 2
3、O+COO+CO2 2+ATP+ATP糖原糖原其它糖、其它糖、非糖物质非糖物质食物食物糖原糖原非糖物质非糖物质消化吸收消化吸收分解分解糖异生糖异生胰岛素胰岛素血糖平衡血糖平衡肾上腺素肾上腺素血糖调节相关神经系统：下丘脑血糖调节相关神经系统：下丘脑+ +自主神经自主神经尿糖尿糖注射葡萄糖注射葡萄糖血糖指血液中所含的葡萄糖，它是给机体提血糖指血液中所含的葡萄糖，它是给机体提供能量的主要物质，也是体内糖代谢情况的供能量的主要物质，也是体内糖代谢情况的重要生理指标。重要生理指标。一神经系统调节：下丘脑一神经系统调节：下丘脑+ +自主神经自主神经二体液调节，也叫激素调节，有升糖激素和二体液调节，也叫激素
4、调节，有升糖激素和 降糖激素降糖激素三还有一些器官：肝、肌肉以及肾脏等三还有一些器官：肝、肌肉以及肾脏等 化学感受器化学感受器第四页，共二十二页。肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺类激肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺类激素，素，主要在应激状态下发挥升高血糖主要在应激状态下发挥升高血糖(xutng)(xutng)的作的作用。用。肾上腺素肾上腺素机制机制cAMP肝、肌细胞的膜受体肝、肌细胞的膜受体血中的血中的肾上腺素肾上腺素磷酸化酶磷酸化酶葡萄糖葡萄糖乳酸乳酸(r sun)肝肝糖原糖原(tn yun)糖酵解糖酵解乳酸循环乳酸循环级联激活级联激活受刺激受刺激结合结合促进促进肌肌糖原糖原分解
5、分解第五页，共二十二页。糖代谢糖代谢(dixi)(dixi)紊紊乱乱高血糖低血糖6.93.0检测(jin c)1.临床医生：作为疾病诊断依据、指导用药以及判断(pndun)升糖药或降糖药的疗效2.糖尿病患者：监控自身血糖及尿糖变化，调节饮食、运动、就医等生活规律。肾糖阈单位：mmol/L尿糖正常血糖病理性病理性生理性生理性生理性 长期饥饿、剧烈运动后病理性胰岛细胞增生、胰岛细胞瘤、胰高血糖素分泌不足、严重肝病患者生理性餐后、情绪紧张时,肾上腺素分泌增加、注射葡萄糖病理性糖尿病、内分泌腺功能障碍、颅内压增高、严重脱水临床上重要的糖代谢紊乱也主要是血糖浓度过高高血糖症和过低低血糖症。第六页，共二十
6、二页。血糖血糖(xutng)(xutng)测定方法测定方法葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法广泛使用广泛使用, ,特异性强、价廉、操作特异性强、价廉、操作(cozu)(cozu)简单简单福林福林- -吴宪法吴宪法邻甲苯胺法邻甲苯胺法己糖激酶法己糖激酶法超微量复原铁氰化钾法超微量复原铁氰化钾法第七页，共二十二页。第一步：第一步：第二步：第二步：TrinderTrinder反应反应H H2 2O O2 2 苯酚苯酚4-4-氨基安氨基安 替比林替比林H H2 2O O 醌亚胺醌亚胺 + +O O2 2红色红色氧化缩合氧化缩合3737o oC C505nm505nm比色测定比色测定3737o oC C葡萄糖
7、葡萄糖O O2 2H H2 2O O葡萄糖酸葡萄糖酸H H2 2O O2 2氧化氧化葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖氧化酶法原理(yunl)(yunl)葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶GODGOD辣根过氧化物辣根过氧化物(u yn hu w)(u yn hu w)酶酶PODPOD第八页，共二十二页。具体操作具体操作1 1空腹称重已称好空腹称重已称好2 2耳缘静脉耳缘静脉(jngmi)(jngmi)取血取血取血部位去毛，接着擦拭酒精，涂二甲苯、取血部位去毛，接着擦拭酒精，涂二甲苯、凡士林。凡士林。用三棱针刺破耳缘静脉放血，离心管收集用三棱针刺破耳缘静脉放血，离心管收集血液血液2-3ml2-3ml干棉球压迫止血，
8、离心，干棉球压迫止血，离心，1500rpm1500rpm，10min10min，取出放试管架上备用。，取出放试管架上备用。3 3注射肾上腺素注射肾上腺素腹侧皮下注射肾上腺素腹侧皮下注射肾上腺素(0.4mL/kg(0.4mL/kg体重体重) )，记录在注射时间，操作如图：记录在注射时间，操作如图：第九页，共二十二页。9正确(zhngqu)抓兔耳缘静脉(jngmi)皮下注射(p xi zh sh)1.注射时，把兔子皮肤提注射时，把兔子皮肤提起来，在褶皱处，竖着进起来，在褶皱处，竖着进针针1.5-2cm。2.注射完后等一会再把针注射完后等一会再把针头拔出。轻按注射部位。头拔出。轻按注射部位。30 m
9、in后再采血。后再采血。错误抓兔第十页，共二十二页。5 5取取4 4支试管，按下表参加支试管，按下表参加(jir)(jir)试试剂剂: :6 6混匀后，混匀后，37OC37OC水浴水浴15min15min；取出冷却，空白；取出冷却，空白(kngbi)(kngbi)管调零，管调零，505nm505nm处比色测定。处比色测定。标准标准正常正常注后注后空白空白血清样品血清样品葡萄糖标准液葡萄糖标准液蒸馏水蒸馏水酶酚混合试剂酶酚混合试剂0.020.023.003.000.020.023.003.000.020.023.003.000.020.023.003.004 4注射后取血注射后取血: 2-3ml
10、,: 2-3ml,离心离心(lxn)(lxn)，取出备用。，取出备用。(ml)第十一页，共二十二页。标准标准正常正常注后注后A A血糖血糖(xutng)(xutng)检测结果记录检测结果记录第十二页，共二十二页。计算计算(j (j sun)sun)：1.1.注射注射前、后前、后的血糖的血糖(xutng)(xutng)浓度浓度2.2. 注射注射(zhsh)(zhsh)后血糖浓度增高率后血糖浓度增高率A A肾肾 - A- A正正A A正正 100%100%增高率增高率 = = C C测测A A测测 A A标标 C C标标= =mmol/Lmmol/L家兔血糖正常参考值家兔血糖正常参考值5.34-6
11、.62 mmol/L)5.34-6.62 mmol/L)第十三页，共二十二页。1.1.葡萄糖氧化酶试纸法干化学法：特异性强，葡萄糖氧化酶试纸法干化学法：特异性强，临床常用。检测临床常用。检测(jin c)(jin c)原理是葡萄糖氧化酶法。原理是葡萄糖氧化酶法。2.2.班氏定性试验：价廉，操作班氏定性试验：价廉，操作(cozu)(cozu)简单，比较简单，比较常用，但易受尿中复原性物质干扰。常用，但易受尿中复原性物质干扰。尿糖测定尿糖测定(cdng)(cdng)第十四页，共二十二页。14班氏定性班氏定性(dng xng)(dng xng)试验试验原理：原理： 根据沉淀显色的深浅，对尿糖作半定量
12、根据沉淀显色的深浅，对尿糖作半定量(dngling)(dngling)检检测。测。(CHOH)(CHOH)n nCHCH2 2OHOH+ + +4OH4OH- -(CHOH)(CHOH)n nCHCH2 2OHOH+ + + H H2 2O O2CuOHH H2 2O O+ +黄色黄色碱性碱性葡萄糖葡萄糖葡萄糖酸葡萄糖酸红色红色COOHCOOH2CuOH2CuOHCHOCHO2Cu2Cu2+2+CuCu2 2O O煮沸煮沸分解分解(fnji)第十五页，共二十二页。操作步骤操作步骤A尿2滴 B尿2滴再煮沸5min班氏剂20滴班氏剂20滴煮沸5min待完全沉淀待完全沉淀(chndin)到管底后到管
13、底后10min，比照，比照判断标准判定结果。判断标准判定结果。第十六页，共二十二页。沉淀颜色沉淀颜色 结果符号结果符号葡萄糖含量葡萄糖含量（g/100mlg/100ml）蓝色蓝色- -无糖无糖 0 0绿色绿色+ +微量微量 0.5 0.5以下以下黄绿色黄绿色+少量少量 0.5 0.51.01.0土黄色土黄色+中量中量 1.0 1.02.02.0红棕红棕+大量大量 2.0 2.0以上以上尿糖结果判断尿糖结果判断(pndun)(pndun)标准标准第十七页，共二十二页。尿糖检测结果尿糖检测结果(ji gu)(ji gu)记录记录颜色颜色 结果符号结果符号A A尿尿B B尿尿第十八页，共二十二页。【
14、本卷【本卷须须知】知】1.微量加微量加样枪样枪的使用的使用(shyng)2.先加先加0.02ml，完全冲到管，完全冲到管底。底。3.0.02ml加加样样要精确要精确第十九页，共二十二页。下一次实验下一次实验(shyn)(shyn)牛血清白蛋白的别离、纯化及鉴定牛血清白蛋白的别离、纯化及鉴定第二十页，共二十二页。尿糖：指尿中的葡萄糖。尿糖：指尿中的葡萄糖。重吸收原尿尿糖尿糖血液血液(xuy)(xuy)葡萄糖肾糖阈：尿中开始出现葡肾糖阈：尿中开始出现葡萄糖时最低血糖浓度萄糖时最低血糖浓度8.96-10.08mmol/L8.96-10.08mmol/L。尿糖阳性尿糖阳性(yngxng)(yngxng
15、)见于：见于：高糖饮食、精神冲动、糖高糖饮食、精神冲动、糖尿病、肾性糖尿病、甲状尿病、肾性糖尿病、甲状腺功能亢进、内服或注射腺功能亢进、内服或注射大量葡萄糖等。大量葡萄糖等。第二十一页，共二十二页。内容(nirng)总结生物化学与分子生物学教研室。血糖测定葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法及肾上腺素对血糖浓度的影响, 尿糖检测。测定血糖浓度，观察肾上腺素对血糖浓度的影响。H2O+CO2+ATP。血糖指血液中所含的葡萄糖，它是给机体提供能量的主要物质，也是体内糖代谢情况的重要生理指标。二体液调节，也叫激素调节，有升糖激素和。肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺类激素，主要在应激状态下发挥(fhu)升高血糖的作用。葡萄糖O2H2O第二十二页，共二十二页。
