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1、18 18 遗传病的诊断遗传病的诊断 Diagnosis of Genetic Disease 遗传病的诊断遗传病的诊断 ?前言 遗传病的常规诊断 分子诊断 遗传病的常规诊断遗传病的常规诊断 一、遗传疾病诊断的主要内容一、遗传疾病诊断的主要内容 ?病史采集 ?症状与体症 ?家系分析 ?染色体检查 ?生化检查 二、对已出现症状的患者的诊断二、对已出现症状的患者的诊断 明确的临床诊断 确定其遗传规律 ?三、携带者的检出三、携带者的检出 携带者携带者 ?携带有隐性致病基因，本人表现正常的个体； ?携带有显性致病基因，但没有外显的正常个体； ?携带有致病基因，迟发个体； ?染色体平衡易位或倒位的个体。
2、 携带者的检出携带者的检出 ?临床水平 细胞水平 酶与蛋白质水平 基因水平 四、产前诊断四、产前诊断 遗传学检查遗传学检查 细胞培养、染色体检查、分子诊断等； ?生化检查生化检查 特殊蛋白质、酶、代谢底物、中间产物和终?产物等； 物理诊断物理诊断 B超、X线、胎儿镜、电子监护等。 ?需产前诊断的对象：需产前诊断的对象： 夫妇之一有染色体畸变，特别是平衡易位携带者，或者夫妇染色体正常，但出生过染色体异常的患儿的夫妇； ?35岁以上的高龄孕妇； ?夫妇之一有开放性神经管畸形，或出生过这种畸形患儿的夫妇； ?夫妇之一有先天性代谢缺陷，或出生过这种患儿的夫妇； ?X连锁遗传病基因携带者孕妇； ?原因不
3、明的习惯性流产的孕妇； ?羊水过多的孕妇； ?夫妇之一有致畸因素接触史的孕妇； ?具有遗传病家族史，又系近亲婚配的孕妇。 虽然具备了上述条件，但如果出现先兆流产、妊娠时间过长、有出血倾向者，则不宜做产前诊断，另外应拒绝仅要求仅做胎儿性别的检查。 ?取胎儿细胞和羊水方法有：取胎儿细胞和羊水方法有： ?羊膜穿刺法 ?绒毛取样法 ?脐带穿刺 胎儿镜检查 孕妇外周血胎儿细胞富集 分子诊断分子诊断 一、分子诊断学的发展一、分子诊断学的发展 ?从第一代遗传标志（RFLP） ?第二代遗传标志（STR） ?第三代遗传标志（SNP） 二、分子诊断的策略和常用技术二、分子诊断的策略和常用技术 基因诊断的策略基因诊
4、断的策略 ?基因突变的检测 ?mRNA检测 ?基因连锁检测 基因诊断的基本技术基因诊断的基本技术 ?核酸杂交 ?聚合酶链反应 ?DNA测序 ?基因芯片技术 其它常用的技术 PCR-RFLP ?PCR 利用一对或数对特异性引物，将目标 DNA扩增； 酶切 利用某些限制性内切酶消化 PCR产物，如PCR产物中含有相应的酶切位点序列， DNA链则被切开； 电泳 利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切后的PCR产物，根据电泳图谱判断结果。 PCR-ASO：使用只有几十个核苷酸的探针，检测被检DNA中的同源序列。由于探针比较短，当被检DNA序列与探针不完全互补，甚至只要有一个碱基的差异，杂交分子就不能稳
5、定形成，因此该方法的灵敏度非常高，特异性也非常好。 PCR-ASO PCR-SSCP 当双链DNA变性为两条单链后，各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象，因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化，甚至只有一个碱基变化，空间构象也有可能发生变化，电泳条带也随之变化。 PCR-SSCP 三、分子诊断技术的应用三、分子诊断技术的应用 基因诊断在遗传病中的应用基因诊断在遗传病中的应用 例如：镰状细胞贫血的基因诊断例如：镰状细胞贫血的基因诊断 ?酶解正常人DNA和患者DNA，用标记的?珠蛋白基因为探针作Southern杂交 镰状细胞贫血的基因诊断镰状细胞贫血的基因诊断 限
6、制性内切酶限制性内切酶Mst切割的序列是切割的序列是CCTNAGG （其中（其中N是任何一种核苷酸），是任何一种核苷酸）， 切割正常切割正常DNA产生产生1.1kb ? ?珠蛋白的珠蛋白的DNA片段；若切割患者片段；若切割患者DNA时，时， 由于由于A? ? T破坏了破坏了Mst的位点，便形成的位点，便形成1.3kb ? ?珠蛋白的珠蛋白的DNA片段。片段。 例如：血友病例如：血友病A的基因诊断的基因诊断 ?PCR技术与RFLP相结合的方法。 首先用PCR技术将包含突变DNA的片段扩增出来，然后用识别该位点的限制酶来酶解，电泳后直接检测多态性位点的状态。 基因诊断在肿瘤中的应用基因诊断在肿瘤中
7、的应用 ras基因突变的检测基因突变的检测 ras基因突变的检测可采用 PCR-ASO方法进行，已知ras基因突变的热点在12、13及61密码子。 ? p53基因的检测基因的检测 ? 目前常用PCR法进行检测p53突变的热点是外显子5-8，一般可先选用外显子5-8的引物进行扩增，其后再进行突变位点的详尽分析，甚至测序。另一初步检测p53基因突变的方法为PCR-SSCP，然后测序。 DNA分型分型 DNA分型也分子诊断的重要内容，特别是在研究检测HLA类型、T细胞受体类型等方面具有重要意义，而分型的结果对研究疾病关联的基因类型和疾病易感性基因等方面具有较大的价值。 帕金森病基因诊断的研究进展帕金
8、森病基因诊断的研究进展 ?家系研究 ?连锁基因的研究 ?4号染色体相连锁的呈常染色体显性遗传的PD（PARKI） ?6号染色体相连锁的呈常染色体隐性遗传的少年型PD（PARK2） ?2号染色体相连锁的呈常染色体显性遗传的PD（PARK3） ?散发性PD遗传易感性的研究 四、疾病分子诊断的展望四、疾病分子诊断的展望 未来的分子诊断主要发展方向未来的分子诊断主要发展方向 ?胚胎着床前诊断在囊胚8个细胞期，通过对其中一个细胞的染色体核型分折和原位杂交，从而将人类的遗传缺陷控制在最早期阶段； 母体外周血中胎儿细胞分析技术； 对常见病、多发病如心血管系统疾病、糖尿病、精神疾病、神经系统疾病、恶性肿瘤、哮喘、近视眼等进行分子诊断。 五、疾病分子诊断所带来的问题五、疾病分子诊断所带来的问题 ? 准确性 稳定性 复杂性 基因歧视 The End
