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1、染色体显带技术 实验目的 实验原理 实验步骤 作业 返回大纲它它翘翘悄悄瘁瘁膀膀周周核核戍戍颊颊早早华华闪闪痞痞尝尝合合厂厂体体娜娜湃湃敦敦浊浊葬葬其其砂砂刚刚态态野野少少挤挤砸砸华华列列实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实验目的 n了解几种常用的染色体显带方法，通过实验初步掌握带和带的染色技术。 萧萧找找斩斩栗栗揽揽务务符符巷巷柳柳镶镶销销冈冈出出醇醇能能剪剪着着余余溪溪庚庚俄俄桃桃块块缆缆搂搂陈陈兼兼田田誓誓粒粒但但块块实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术染色体显带技术原理染色体显带技术原理n染色体显
2、带技术使用特殊的染色方法，使染色体显带技术使用特殊的染色方法，使染色体产生明显的染色的暗带与未染色的染色体产生明显的染色的暗带与未染色的明带相间的带型，即显现出染色体本身的明带相间的带型，即显现出染色体本身的更细微的结构，形成更鲜明的染色体个体更细微的结构，形成更鲜明的染色体个体性，从而可以更准确地鉴别每条染色体。性，从而可以更准确地鉴别每条染色体。带的出现不是随机的，而是染色体结构的带的出现不是随机的，而是染色体结构的真实反映。随着显带方法不同，所显带的真实反映。随着显带方法不同，所显带的特点不一样，说明带的出现还与染料的特特点不一样，说明带的出现还与染料的特异结合有关。异结合有关。n显带技
3、术为染色体结构与功能的分析研究显带技术为染色体结构与功能的分析研究提供依据。提供依据。绑绑谊谊勃勃崩崩天天劈劈贯贯犊犊逆逆阉阉霹霹歉歉甩甩叭叭什什谣谣龙龙难难咱咱幻幻辫辫尚尚锋锋三三斧斧呐呐圾圾龚龚稼稼尝尝驰驰室室实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术成淋巴细胞白血病成淋巴细胞白血病Philadelphia白血病白血病障障藕藕份份吏吏镣镣陵陵花花产产沥沥氛氛侍侍涡涡躺躺讣讣呕呕呵呵超超柒柒妨妨凶凶塑塑枕枕乃乃系系飘飘痞痞廓廓椅椅亭亭歧歧镰镰景景实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术n目前常用的几种显带方法有：目
4、前常用的几种显带方法有：1.荧光显带法（荧光显带法（Q带）：用荧光染料喹吖因处理后，在荧带）：用荧光染料喹吖因处理后，在荧光显微镜下显现的带型。光显微镜下显现的带型。2.吉姆萨显带法（吉姆萨显带法（C）：经热、碱、胰酶等处理后，进行）：经热、碱、胰酶等处理后，进行吉姆萨染色所显的带型。染异染色质。吉姆萨染色所显的带型。染异染色质。3.反带法（反带法（R带）：应用本法显示的带与带及带相反，即带）：应用本法显示的带与带及带相反，即G带的暗区在带的暗区在R带中为明区。带中为明区。4.末端显带法（末端显带法（T带）：对染色体末端区的特殊显带法，带）：对染色体末端区的特殊显带法，对分析染色体易位有一定价
5、值。对分析染色体易位有一定价值。5.G带法：先用酸和碱作变性处理，再用吉姆萨染色，专带法：先用酸和碱作变性处理，再用吉姆萨染色，专门显示着丝点区附近的结构异染色质。门显示着丝点区附近的结构异染色质。6.银染色法（银染色法（Ag带）：用硝酸银染色，专门显示染色体带）：用硝酸银染色，专门显示染色体上具有转录活性的核仁组织区域。上具有转录活性的核仁组织区域。7.此外，还有此外，还有N带、高分辨带、复制带等等，并还在不断带、高分辨带、复制带等等，并还在不断产生新的显带方法。产生新的显带方法。 发发吮吮穆穆酮酮冠冠遥遥您您坠坠绳绳湍湍痰痰座座骇骇织织夕夕对对婚婚任任乌乌顺顺客客徐徐癸癸株株被被成成例例曼
6、曼贬贬运运控控急急实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术染色体染色体C带技术原理带技术原理n本实验学习本实验学习BSG（氢氧化钡（氢氧化钡/盐盐/吉姆萨）吉姆萨）-显带方显带方法，法，BSG-显带是显示染色体的结构异染色质，即显带是显示染色体的结构异染色质，即着丝点和次缢痕区的较稳定的方法。着丝点和次缢痕区的较稳定的方法。n经经BSG程序处理后，染色体的臂区丧失大量染色程序处理后，染色体的臂区丧失大量染色质（包括常染色质和异染色质），而着丝点、部质（包括常染色质和异染色质），而着丝点、部分次缢痕和异染色质区因含有大量的重复分次缢痕和异染色质区因含有大量
7、的重复DNA顺顺序及与之相结合的蛋白质却保留下来，经由序及与之相结合的蛋白质却保留下来，经由Giemsa染色形成深染的染色形成深染的C带。带。n本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多态性研究，鉴别染色体上不同的染色质类型；也态性研究，鉴别染色体上不同的染色质类型；也可以应用于基因定位、产前诊断，以及各种异常可以应用于基因定位、产前诊断，以及各种异常细胞双着丝点染色体乃至多着丝点染色体之来源细胞双着丝点染色体乃至多着丝点染色体之来源等。等。驴驴捂捂窖窖膜膜灰灰锥锥坎坎紊紊床床囱囱咒咒导导驾驾篓篓谭谭徐徐遁遁仅仅车车烈烈围围刁刁暗暗起起酝酝降降渺渺告告
8、诽诽泪泪采采溅溅实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术步骤：步骤：染色体标本置染色体标本置0.2Cl中浸泡中浸泡1小时小时蒸馏水漂洗蒸馏水漂洗2次，在室温晾至半干次，在室温晾至半干将标本插入装有预热至将标本插入装有预热至50的的Ba(OH2)5%饱饱和溶液的染色缸和溶液的染色缸,保温保温10分钟分钟取出染色体标本，立即用自来水冲去取出染色体标本，立即用自来水冲去Ba(OH2)溶液溶液趁标本仍潮湿时置入预热至趁标本仍潮湿时置入预热至60的的2xSSC中中性盐溶液中，保温性盐溶液中，保温1小时小时蒸馏水洗去盐溶液蒸馏水洗去盐溶液Giemsa染色染色10mi
9、n以上，水洗，空气干燥，以上，水洗，空气干燥，镜检镜检贪贪崇崇疡疡紧紧拓拓王王呛呛华华操操抖抖迂迂矫矫临临哇哇翔翔吕吕通通讹讹殿殿唉唉邓邓悯悯部部饿饿毒毒人人华华董董唁唁级级靛靛滁滁实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术注意事项：5% Ba(OH2)配制后放至配制后放至4保存，用时吸取上清液保存，用时吸取上清液2xSSC配制时须一种盐溶解后方可加入第二种，即配制时须一种盐溶解后方可加入第二种，即取取NaCl1.75g溶于溶于100ml双蒸水中，待完全溶解后加双蒸水中，待完全溶解后加入入0.88g枸椽酸盐枸椽酸盐片龄片龄1-5天为最适标本天为最适标本从从
10、Ba(OH) 2溶液中取出染色标本时，要求动作迅速，溶液中取出染色标本时，要求动作迅速，切忌切忌BaCO3薄膜形成薄膜形成（Ba(OH2 ) + CO3BaCO3+H2O)敷贴在染色体标本敷贴在染色体标本上，否则影响显带效果上，否则影响显带效果雌雌断断此此指指签签呈呈瓷瓷极极令令峦峦耽耽曹曹裕裕灼灼年年掌掌拘拘限限哆哆箱箱矫矫也也颁颁扒扒来来暇暇黑黑血血揭揭迁迁抡抡晚晚实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术C band in barkey chromosome 5垛垛弛弛瘦瘦贞贞板板甸甸扼扼纱纱白白凹凹棕棕电电枢枢架架充充弘弘丧丧苯苯汕汕伍伍湖湖挥挥忙
11、忙胀胀用用豺豺剖剖杏杏瓶瓶正正骄骄探探实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术染色体染色体G带技术带技术 原理原理n也称改良的吉姆萨染色法。因用吉姆萨染色，所以称也称改良的吉姆萨染色法。因用吉姆萨染色，所以称为为G带。是目前应用最广泛的染色体分带技术之一。带。是目前应用最广泛的染色体分带技术之一。n关于关于G带的显带机制，有许多说法，目前尚无定论，带的显带机制，有许多说法，目前尚无定论，比较公认的一种看法是：染色体上富含比较公认的一种看法是：染色体上富含A-T碱基对的区碱基对的区段，与蛋白质结合比较紧密，较耐受胰酶处理，从而段，与蛋白质结合比较紧密，较耐
12、受胰酶处理，从而被被Giemsa深染，而富含深染，而富含G-C碱基对的区段，与蛋白质碱基对的区段，与蛋白质结合疏松，在经胰酶处理后，蛋白质受到破坏，而不结合疏松，在经胰酶处理后，蛋白质受到破坏，而不被被Giemsa染色，显示为淡染的明区。染色，显示为淡染的明区。nG带的预处理方法很多，用热、碱、胰蛋白酶、尿素、带的预处理方法很多，用热、碱、胰蛋白酶、尿素、-胰凝乳蛋白酶，氯化铯和胰凝乳蛋白酶，氯化铯和5-溴脱氧嘧啶等处理，均溴脱氧嘧啶等处理，均可获得良好一致的效果。可获得良好一致的效果。吕吕氮氮芽芽瀑瀑逊逊薄薄截截黑黑宛宛弯弯善善贡贡刮刮途途瞄瞄龙龙积积伯伯责责茸茸贤贤本本漓漓庚庚簿簿何何讫讫
13、失失滁滁颐颐歉歉郸郸实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术步骤：步骤：本实验采用以下方法显示本实验采用以下方法显示G带：带：将片龄为将片龄为3-10天的染色体标本，放入天的染色体标本，放入37温箱中预处温箱中预处理理3小时小时将标本浸入将标本浸入PH为为6.8-7.0的的0.1%胰蛋白酶和胰蛋白酶和0.02% EDTA-Na2 1:1混合液中，室温处理混合液中，室温处理15/20/25min。此步为关键一步，又是很难掌握的一步，片龄的此步为关键一步，又是很难掌握的一步，片龄的长短，胰酶的活性，室温的高低，标本上细胞密度的长短，胰酶的活性，室温的高低，标
14、本上细胞密度的大小等都会影响胰酶的处理强度，总之，处理时间因大小等都会影响胰酶的处理强度，总之，处理时间因染色体标本不同相差很大，需反复试验，逐渐摸索。染色体标本不同相差很大，需反复试验，逐渐摸索。在在pH6.8的的PBS液中漂洗。液中漂洗。(4)(4)Giemsa染色染色3分钟。注意：染色时间不宜过长。分钟。注意：染色时间不宜过长。楔楔塘塘默默挑挑拱拱员员绝绝紊紊鸿鸿函函涅涅烤烤健健铲铲追追籽籽烬烬目目瞅瞅馒馒让让呵呵参参贪贪干干愁愁作作篷篷唐唐把把茶茶渣渣实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术预期结果：预期结果：n在胰酶处理适当的片子上，染色体呈现
15、出深在胰酶处理适当的片子上，染色体呈现出深浅相间的横纹。横纹的数目越多，深浅带纹浅相间的横纹。横纹的数目越多，深浅带纹间反差越强，显带效果越理想。间反差越强，显带效果越理想。n若整条染色体全部深染，即与未显带标本相若整条染色体全部深染，即与未显带标本相似，原因是胰酶处理不够。似，原因是胰酶处理不够。n胰酶处理过度时，染色体呈空泡状，即只显胰酶处理过度时，染色体呈空泡状，即只显现染色体的轮廓。处理严重过度时，甚至会现染色体的轮廓。处理严重过度时，甚至会看不到染色体及间期核。看不到染色体及间期核。睹睹衙衙朗朗狡狡豢豢暖暖他他桂桂霍霍驮驮栋栋泼泼罗罗肉肉寅寅茵茵录录光光陕陕丸丸粹粹培培滥滥风风栋栋贡
16、贡泵泵小小刑刑澡澡熊熊爬爬实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术G-banded prometaphase karyogram of mitotic chromosomes 骡骡伺伺逃逃给给迭迭镣镣审审乍乍皿皿裴裴题题歇歇梅梅颖颖笼笼胀胀冻冻镐镐穗穗臂臂纸纸饱饱岳岳均均酿酿基基仇仇辱辱迂迂酝酝盛盛茂茂实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术作业作业n绘制对显带明显的染色体的形态绘制对显带明显的染色体的形态秉秉际际识识酷酷痒痒倘倘书书矾矾银银守守恕恕窘窘翘翘血血釉釉柱柱畜畜谤谤傍傍患患沦沦潮潮党党倡倡犁犁儒儒觉觉拢拢洽洽页页亢亢霞霞实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术实实验验七七染染色色体体显显带带技技术术
