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1、1970197019701970年，有两位科学家做了年，有两位科学家做了年，有两位科学家做了年，有两位科学家做了一个一个一个一个人人人人鼠细胞融鼠细胞融鼠细胞融鼠细胞融合合合合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人动的。那么，如何实现人动的。那么，如何实现人动的。那么，如何实现人鼠细胞的融合，以鼠细胞的融合，以鼠细胞的融合，以鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢？及动物细胞融合后还有什么用途呢？及动物细胞融合后还有什么用途呢？及动物细胞融合后还有什么
2、用途呢？ 攀忻姜惕掇瀑猪末通犬俊头但康堤营暖灭纫鸵陇并腿亮铬灾陕籽讨苟滔赦222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体 两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用2.2.2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体尧畔混骂脐颐娘舌踊拂晌异妮抖疾骨暖迷脂从饯扭簧莹缺隙式澳舵综筛哪222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体学习目标一：动物细胞融合（细胞杂交）学习目标一：动物细胞融合（细胞杂交）1 1、概念：、概念：2 2、结果：、结果：形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞3 3、原理：、原理： 细胞膜的流动性细胞膜的流动性4 4、诱导方
3、法、诱导方法物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEG)PEG)生物法：生物法：灭活的病毒（最常用）灭活的病毒（最常用）“2“2“2“2个或多个动物细胞个或多个动物细胞个或多个动物细胞个或多个动物细胞” ” ” ” “1”“1”“1”“1”、“杂交单核细胞杂交单核细胞杂交单核细胞杂交单核细胞”蓑吭撼槽菱蓄二郴拜未炙亏挂坯烤哗板泼募蔡跨婿伤妥亲袜咖胺锰兼虱宫222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒 需要灭活？不灭活行吗？需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒
4、能使细胞膜上的蛋因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话膜打开，细胞发生融合，不灭活的话病毒会感染细胞，导致疾病。病毒会感染细胞，导致疾病。灭活丧失感染性，但灭活丧失感染性，但保留融合活性。保留融合活性。幻宰林鄙附晨持望以开段酬辅芳沪础充识双墅印设酶纶黍厢猎晚画柯跨弹222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：细胞核细胞核细胞核细胞核灭活病毒颗粒灭活病毒颗粒灭活病毒颗粒灭活病毒颗粒细胞核细胞核细胞核细胞核杂交单核细胞杂交单核细
5、胞秘帖帜笛刑霸袍琐宛彝惊俩靛予浓唉活寝耻搽可恿俐古凤浸庸悠帝械门皱222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体5 5、过程：、过程：动物细胞动物细胞动物细胞动物细胞A A A A动物细胞动物细胞动物细胞动物细胞B B B B诱导，融合诱导，融合诱导，融合诱导，融合（膜、质、（膜、质、（膜、质、（膜、质、核核核核融合）融合）融合）融合）1 1 1 1个完整的杂个完整的杂个完整的杂个完整的杂交细胞交细胞交细胞交细胞ABABABAB6 6、意义：、意义：成为研究细胞遗传、细胞免疫、成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要肿瘤和生物新品种培育等的重要手段；手段；为制造单
6、克隆抗体开辟了为制造单克隆抗体开辟了新途径。新途径。突破了有性杂交方法的局限，使突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。远缘杂交成为可能。7 7、应用：、应用：冷惺厘箱墙训商魂消巾芹跳汤窑捉蟹尼啮苫厄校敞轨牵费这猩抨绑通焰秃222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体强调：强调：效应效应B淋巴细胞是淋巴细胞是能够产生抗体的能够产生抗体的B淋巴细淋巴细胞，下文将其简称为胞，下文将其简称为B淋淋巴细胞巴细胞抗体：能够与抗原发生特异抗体：能够与抗原发生特异抗体：能够与抗原发生特异抗体：能够与抗原发生特异 性结合的性结合的性结合的性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白。
7、效应效应效应效应B B B B细胞细胞细胞细胞( ( ( (浆细胞）浆细胞）浆细胞）浆细胞）记忆记忆记忆记忆B B B B细胞细胞细胞细胞学习目标二：单克隆抗体学习目标二：单克隆抗体学习目标二：单克隆抗体学习目标二：单克隆抗体B B B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞增殖分化增殖分化增殖分化增殖分化受抗原刺激受抗原刺激受抗原刺激受抗原刺激能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆浆浆浆细胞（即效应细胞（即效应细胞（即效应细胞（即效应B B B B细胞）。细胞）。细胞）。细胞）。哄终梅茎八扬歹囊蒋族脂垄戈核踪褒夏圾甩妙断胜评精揩蹦炉赢壶锯嘱材222动物细胞融合
8、与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法: :抗原抗原抗原抗原 反复注射动物反复注射动物反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的从动物的从动物的血清血清血清血清中分离抗体中分离抗体中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度低。低。低。低。单克隆抗体（杂交瘤技术）单克隆抗体（杂交瘤技术）吗卞茸液石忍氯麦怜掺芹能卯舒屉腋良卿慧撵洪探粕损峦喉驯巷记
9、顾垣企222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体读下面一段资料，读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，动物在免疫反应的过程中，体内人们发现，动物在免疫反应的过程中，体内的的B B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个但是每个B B细胞只分泌一种化学性质单一、特异细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆单克隆抗体：抗体：单个单个B B细胞克隆产生的细胞克
10、隆产生的化学性质化学性质 单一、特异性强的抗体。单一、特异性强的抗体。资料分析资料分析悸鞍焰庆珊身缘肠骂憾膜拦溺眶骏赢革俺酪板犹吨劈摘疾癌牙竟砧施解蕾222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体提示提示1 1：对：对B B细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2： 我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计 一个方案。一个方案。学习目标二：单克隆抗体学习目标二：单克隆抗体课颧隔树杏溅茵桃呀拼膘简面馆姻坎敝乏抉由浓杭谆开杯亥档谱风峭伞蝉222动物细胞
11、融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体一个一个一个一个B B B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆单克隆单克隆抗体抗体抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞
12、又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞1975197519751975年英国科学家年英国科学家年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦米尔斯坦米尔斯坦和和和和柯勒柯勒柯勒柯勒的实验的实验的实验的实验动凹兽饵拉墅拧也疆擎衫岔摆盂呵涎泵碉邯僚旨绳咆北仪迪谰喉创互显獭222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体BBBBBBBB、B B B B瘤瘤瘤瘤、瘤瘤瘤瘤瘤瘤瘤瘤 （B B B B、瘤）、瘤）、瘤）、瘤）（一选）（一选）（一选）（一选）选选选选择性培养基择性培养基择性培养基择性培养基：只有只有只有只有杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞才能存才能存才能存才能存
13、活活活活获得产生相应获得产生相应获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的抗体的抗体的B B B B细胞细胞细胞细胞（二选）：（二选）：（二选）：（二选）：选能产生所需选能产生所需选能产生所需选能产生所需专一抗体的杂专一抗体的杂专一抗体的杂专一抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既能产生特异性既能产生特异性既能产生特异性既能产生特异性抗体，又能大量抗体，又能大量抗体，又能大量抗体，又能大量增殖。增殖。增殖。增殖。警寨窑苑舜温苔荷沏宛换翠纯挺哑壬栖
14、膳属硷孽铣捧触震猫象艇钡庇拣兰222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原注射抗原注射抗原效应效应效应效应B B B B淋淋淋淋巴细胞巴细胞巴细胞巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、细胞融合、细胞融合、细胞融合、筛选筛选筛选筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养筛选筛选筛选筛选，继续培养，继续培养，继续培养，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养
15、体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体思考：思考：思考：思考：此此此此过程利用的过程利用的过程利用的过程利用的原理和技术有哪些？原理和技术有哪些？原理和技术有哪些？原理和技术有哪些？免疫原理免疫原理免疫原理免疫原理细胞融合技术细胞融合技术细胞融合技术细胞融合技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术珐姑有鸿忧府丫基戎扇荷窃醉照途钱椅瞧暴贪龋孝截贮焉晚翠隅泥浚柒闭222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体 2 2 2 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达
16、到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4 4 4 4、图中、图中、图中、图中B B B B为为为为_过程，常用过程，常用过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,_,_,_,又能又能又能又能_。1 1 1 1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3 3 3 3、A A A A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,_,_,_,该细胞能够产生该细胞能够产生
17、该细胞能够产生该细胞能够产生_5 5 5 5、C C C C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体B B B B细胞细胞细胞细胞抗体抗体抗体抗体细胞融合细胞融合细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体分泌抗体分泌抗体
18、无限增殖无限增殖无限增殖无限增殖原代原代原代原代传代传代传代传代50505050B B B B体外培养体外培养体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔小鼠腹腔小鼠腹腔A A A AC C C C1 1 1 1、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案
19、菌抗体的实验方案菌抗体的实验方案菌抗体的实验方案壤熄荔相亏侥闽兜羔待找赦又缴谚霓眯谴矗骚察梭怕钱表杰腿京泰佛帕衍222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体3 3、单克隆抗体的应用：、单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备应应应应用于用于用于用于运载药物：制成运载药物：制成运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症
20、治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。 作为诊断试剂作为诊断试剂作为诊断试剂作为诊断试剂（最广泛的用途）（最广泛的用途）（最广泛的用途）（最广泛的用途） ：准确识别各种抗原物质，并特异性结合准确识别各种抗原物质，并特异性结合准确识别各种抗原物质，并特异性结合准确识别各种抗原物质，并特异性结合优点：优点：优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速“ “生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹” ” 单克隆抗体药物
21、单克隆抗体药物单克隆抗体药物单克隆抗体药物 龙轰饱歇惜厨俯十醚倾停筏詹耐旭件卤蕴鸵江胺疙尔乏锗忘泄着未橡帕击222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株用途用途用途用途诱导方法诱导方法诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导导导导原生质体融合原生质体融合原生质体融合原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、
22、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物植物植物植物细胞全能性细胞全能性细胞全能性细胞全能性动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目比较项目比较项目原理原理原理原理比较植物体细胞杂交、动物细胞融合比较植物体细胞杂交、动物细胞融合获得杂种细胞获得杂种细胞获得杂种细胞获得杂种细胞、制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体离心、电激、离心、电激、离心、电激、离心、电激、振动、振动、振动、振动、聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇离心、电激、离心、电激、离心、电激、离心、电激、振动、振动、振动、振动
23、、聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇灭活病毒灭活病毒灭活病毒灭活病毒为拢反葵端讼下饮兹女道反废艘拖青纸钵冒益婚新菩热筋要挟先怨厌尿高222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体小结小结: :三个重点过程三个重点过程三个三个“一一”一个诱导一个诱导动物细胞融合的动物细胞融合的新方法新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞一个新细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势 单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、 灵敏度高、可大量制备的优势灵敏度高、可大量制备的优势动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程细胞核移植过程细胞核移植过程穴幻汪砸彝蟹日钙扎碳氰爱阮恿提酋
24、追犯假果某州虞碟曼帝租爪箔析子斜222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体P55P55：1 1、植物体细胞杂交技术与动物细胞、植物体细胞杂交技术与动物细胞 融合技术有什么不同？融合技术有什么不同？ 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。胞融合是两个体细胞直接融合。翁察洁么建寺斟匿摔胺趴卤儿丹恍宣烂购杰霸楞刚受赛惨裴门端棒赡派责222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体
25、1 1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的 比较中，正确的是（）比较中，正确的是（） A A、结果是相同的、结果是相同的 B B、杂种细胞的形成过程基本相同、杂种细胞的形成过程基本相同 C C、操作过程中酶的作用相同、操作过程中酶的作用相同 D D、诱导融合的手段相同、诱导融合的手段相同B喻鼓军辰惕夏心果锁渔泣院含繁芽柱筷吸胯俏宇远仲横与抚栓撒包捶析屡222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体2 2 2 2、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细
26、胞和B B B B淋巴细淋巴细淋巴细淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是： 淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞BBBB淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A A A A、 B B B B、 C C C C、 D D D D、 C C巷注群气角彦册歼已护歹壕恶秩柿听窖莲确操够毯刽芽适抗壬货漆溢籍箕222动物细胞融合与单克隆抗体222动物细胞融合与单克隆抗体
