第二军医大学免疫教程二基因工程Igppt课件

《第二军医大学免疫教程二基因工程Igppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第二军医大学免疫教程二基因工程Igppt课件（66页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、 免疫球蛋白基因免疫球蛋白基因 和基因工程抗体和基因工程抗体 Immunoglobulin Genes and Genetically Engineered Antibodies免疫球蛋白基因免疫球蛋白基因Immunoglobulin Genes免疫球蛋白免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)抗体抗体(antibody)分泌型分泌型Ig(secreted Ig, SIg)膜型膜型Ig(membrane Ig, mIg)德国细菌学家德国细菌学家Behring日本学者日本学者Kitasato抗毒素、免疫血清疗法抗毒素、免疫血清疗法首届生理学和医学诺贝尔奖首届生理学和医学诺贝尔奖一、根本

2、概念一、根本概念人工制备的抗体人工制备的抗体 多克隆抗体多克隆抗体 (polyclonal antibody) 单克隆抗体单克隆抗体 (monoclonal antibody) 基因工程抗体基因工程抗体 (genetic engineering antibody)Milstein、Kohler、Jerne单克隆抗体制备技术单克隆抗体制备技术1984年获诺贝尔奖年获诺贝尔奖 (一一)根根本本构构造造：Ig单单体体由由两两条条重重链链和和两条轻链经二硫键衔接而成。两条轻链经二硫键衔接而成。 二、免疫球蛋白的构造二、免疫球蛋白的构造Edelman与与Porter解析解析Ig构造构造1972年获诺贝尔

3、奖年获诺贝尔奖(k(k或或 ) )(m(m链链) )(g (g 链链) )(e(e链链) )(a(a链链) )(d(d链链) ) Ig的可变区和恒定区的可变区和恒定区 重链可变区重链可变区 (variable region of heavy chain, VH) 轻链可变区轻链可变区 (variable region of light chain, VL)可可变区区(variable region, V)重链恒定区重链恒定区(constant (constant region region of of heavy heavy chain chain , , CH)CH)功能区功能区: CH13

4、(IgG: CH13(IgG、IgAIgA、IgD)IgD) CH14(IgM CH14(IgM、IgE)IgE)轻链恒定区轻链恒定区(constant region of light chain, CL)(constant region of light chain, CL)恒定区恒定区(constant region, C)VH免疫球蛋白免疫球蛋白V区和区和C区构造表示图区构造表示图 高高变区区(hypervariable region, HVR)又称又称互互补决决议区区(complementarity-determining region, CDR) VH和和VL各有各有3个个CDR(C

5、DR13), 共同共同组成成 Ig的抗原的抗原结合部位。合部位。骨架区骨架区(framework region, FR)VH和和VL各有各有4个个FR(FR14)免疫球蛋白免疫球蛋白CDRCDR和和FRFR构造表示图构造表示图 ( (二二)Ig)Ig的水解片段的水解片段1.木瓜木瓜酶水解水解Ig 2个一个一样的抗原的抗原结合片段合片段 (fragment of antigen-binding, Fab) 1个可个可结晶片段晶片段 (fragment crystallizable, Fc)2.胃蛋白胃蛋白酶水解水解Ig 1个个F(ab)2 和和1个个pFc(三三) 功能区或构造域功能区或构造域(

6、domain) 免疫球蛋白超家族免疫球蛋白超家族 (immunoglobulin superfamily, IgSF) 胚系胚系Ig基因在基因组中以基因簇基因在基因组中以基因簇(gene clusters)的方式存在。的方式存在。重链基因簇重链基因簇(IGH)：含：含V, D, J, C基因片段基因片段 IGHV, IGHD, IGHJ, IGHCk轻链基因簇轻链基因簇(IGK)：含：含V,J,C基因片段基因片段 IGKV, IGKJ, IGKC 轻链基因簇轻链基因簇(IGL)：含：含V,J,C基因片段基因片段 IGLV, IGLJ, IGLC三、免疫球蛋白的基因三、免疫球蛋白的基因 人人Ig

7、基因片段基因片段 基因片段基因片段Ig基因基因 V D J C IGH 95(50) 23 9(6) 11(9)IGK 90(60) 0 5 1IGL 60(30) 0 7 7(4)Tonegawa1987年获年获诺贝尔奖诺贝尔奖重排序列信号重排序列信号RSSrearrangementsingnal sequanceIg基因重排和表达基因重排和表达等位基因排斥等位基因排斥(Allelic exclusion ) 一旦一旦VH-DH-JH重重排排胜利，并且得到功能利，并且得到功能性表达，会抑制另一条性表达，会抑制另一条同源染色体上等位基因同源染色体上等位基因的重排。的重排。同型排斥同型排斥(is

8、otype exclusion) V或或V基因只需一基因只需一个能重排、表达，个能重排、表达， V基基因首先重排并抑制因首先重排并抑制V基基因的重排因的重排;只需当只需当V基因基因重排不重排不胜利利,V基因才干基因才干进展重排展重排 。转换区转换区switch region基因工程抗体基因工程抗体(genetic (genetic engineering engineering antibody) antibody) 抗体药物销售趋势图抗体药物销售趋势图一、鼠单抗人源化一、鼠单抗人源化 人源化抗体人源化抗体(humanized antibody) 免疫原性降低，对各种水解酶的免疫原性降低，对各

9、种水解酶的抵抗力加强；可根据需求使抗体衔接抵抗力加强；可根据需求使抗体衔接用于治疗或诊断的相应物质，以加强用于治疗或诊断的相应物质，以加强基因工程抗体的治疗效果或提高诊断基因工程抗体的治疗效果或提高诊断的敏感性。的敏感性。 用人抗体的恒定区取代鼠单抗的恒定区，使鼠用人抗体的恒定区取代鼠单抗的恒定区，使鼠单抗恒定区人源化，但保管鼠单抗的可变区。单抗恒定区人源化，但保管鼠单抗的可变区。( (一一) )人人- -鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体 (human-mouse chimeric (human-mouse chimeric antibody) antibody) Fab和和F(ab)2嵌合抗体：嵌合抗体

10、： 将鼠的功能性抗体将鼠的功能性抗体轻链和重和重链可可变区区基因分基因分别与人抗体的与人抗体的链和重和重链CH1恒定恒定区基因重区基因重组，克隆到表达，克隆到表达载体中。体中。 主要主要经过哺乳哺乳类细胞表达，最常用的胞表达，最常用的是小鼠骨髓瘤是小鼠骨髓瘤细胞系和胞系和CHO细胞胞 。 最大限制地减少鼠单抗的异源性，又能使人单最大限制地减少鼠单抗的异源性，又能使人单抗获得鼠单抗的特异性。抗获得鼠单抗的特异性。 ( (二二)CDR)CDR移植抗体移植抗体(CDR-grafted (CDR-grafted antibody)antibody) 人改型抗体人改型抗体(human reshaped

11、(human reshaped antibody) antibody) 二、单价小分子抗体二、单价小分子抗体优点：点：分子量小而穿透力分子量小而穿透力强；不含不含Fc段，可减少副作用；段，可减少副作用；可可以以在在大大肠杆杆菌菌等等原原核核细胞胞中中表表达达，降降 低消低消费本本钱； 在体内半衰期在体内半衰期较短，廓清快；短，廓清快；基基因因操操作作较容容易易，可可进一一步步经过改改造，造， 制制备其他其他类型的基因工程抗体。型的基因工程抗体。 由重链由重链FdFd段和完好的轻链经过一个链间二硫段和完好的轻链经过一个链间二硫键衔接构成的异二聚体，只需一个抗原结合部位。键衔接构成的异二聚体，只需

12、一个抗原结合部位。 ( (一一)Fab)FabFab( (二二)Fv)Fv和和ScFv(single-chain Fv) ScFv(single-chain Fv) Fv段段由由VH和和VL籍籍非非共共价价键键结结合合，是是抗抗体体分分子子中中保管抗原结合部位的最小功能片段，其稳定性差。保管抗原结合部位的最小功能片段，其稳定性差。 Fv ScFvScFv： VH-linker-VL或或VL-linker-VH Linker普普通通含含有有1415个个氨氨基基酸酸残残基基，运运用用最最广广的的是是含含有有反反复复出出现的的 4个个 甘甘 氨氨 酸酸 和和 一一 个个 丝 氨氨 酸酸 的的(Gly

13、4Ser)3优点：点： 比比Fv稳定；定； 坚持持单价价结合抗原的合抗原的亲和力；和力； 分子量小，分子量小，组织穿透性穿透性较强。( (三三) )单区抗体单区抗体(single domain antibody)(single domain antibody)及及 最小识别单位最小识别单位(minimal recognition unit(minimal recognition unit，MRU) MRU) 单区抗体是抗体分子中单独具有结合抗原才干单区抗体是抗体分子中单独具有结合抗原才干的重链可变区的重链可变区(VH)， MRU是来自是来自CDR的短肽，可的短肽，可模拟亲本抗体的抗原结合活性模

14、拟亲本抗体的抗原结合活性 Fv ScFv 单区抗体单区抗体单区抗体的区抗体的优越性：越性：穿透力穿透力强，有利于，有利于实践运用；践运用；不不需需将将VH和和VL基基因因分分别克克隆隆和和进展展正确正确 配配对，制，制备时操作操作简便；便；只只需需VH而而不不需需与与VL相相互互作作用用，稳定定性性较 Fv和和ScFv更好；更好；其其抗抗原原结合合部部位位的的构构象象较为特特殊殊，VH抗抗 体体CDR襻襻插插入入抗抗原原外外表表的的凹凹陷陷中中，这对 于制于制备酶抑制性抗体有重要意抑制性抗体有重要意义。 MRU的优越性：的优越性： 穿穿透透才才干干强强，半半寿寿期期短短，显显像像时时本底低，适

15、用于临床显像诊断。本底低，适用于临床显像诊断。三、双价和多价小分子抗体三、双价和多价小分子抗体( (一一) )化学交联法化学交联法 DTNBDTNB、O-PDMO-PDM使使2 2个个ScFvScFv在在体外相衔接，构成双价小分子抗体。体外相衔接，构成双价小分子抗体。 易易引引起起抗抗体体分分子子的的抗抗原原结结合合部部位位的的构构造造改改动动，降降低低抗抗体体的的活活性。性。 ( (二二) )二聚化构造域交融法二聚化构造域交融法 在在单价价小小分分子子抗抗体体的的33端端衔接接具有二聚具有二聚化化倾向的构造域向的构造域(dimerization domain)(dimerization do

16、main) 亮氨酸拉亮氨酸拉链 (leucine zipper) (leucine zipper) a a螺旋束螺旋束 (helix bundle) (helix bundle) Ig Ig的的CH3CH3区区 链亲和素和素( (三三) )接头长度控制法接头长度控制法 双链抗体双链抗体(diabody) 将将ScFv的的接接头头缩缩短短，使使两两个个ScFv分分子子间间的的VH和和VL配配对对，发发生生非非共共价价键键结结合合，构构成成双双价价小小分分子子抗抗体体。 构构建建时时操操作作简简单单，具具有良好的性能和运用前景。有良好的性能和运用前景。 三链抗体三链抗体(triabody) 四链抗

17、体四链抗体(tetrabody)双链抗体双链抗体 三链抗体三链抗体 四链抗体四链抗体 四、双特异性抗体四、双特异性抗体 (bispecific antibody, BsAb) ( (一一) )化学偶联方法化学偶联方法 SPDPSPDP、DTNBDTNB、O-PDMO-PDM等等化化学学交交联联剂剂可可将将两两个个不不同同抗抗原原特特异异性性的的全全抗抗体体分子或其功能性片段衔接成分子或其功能性片段衔接成BsAbBsAb。 化学偶化学偶联方法：方法： 简便快速，便快速，产物容易物容易纯化化 易易呵呵斥斥抗抗体体分分子子的的抗抗原原结合合部部位位发生生改改动，从而降低其活性，从而降低其活性 交交联

18、剂的致畸和致癌作用的致畸和致癌作用 主要用于体外的主要用于体外的 实验研研讨。( (二二) )杂交杂交- -杂交瘤方法杂交瘤方法 (hybrid-hybridoma) (hybrid-hybridoma)四源杂交瘤四源杂交瘤(quadroma)： 使两株各自分泌不同特异性单抗的使两株各自分泌不同特异性单抗的 杂交瘤细胞再交融杂交瘤细胞再交融三源杂交瘤三源杂交瘤(trioma)： 用一株杂交瘤细胞与用一株杂交瘤细胞与 免疫后的脾细胞交融免疫后的脾细胞交融由于两套重由于两套重链和和轻链之之间可重新随机可重新随机组合，而目合，而目的的BsAb仅占占20左右，所以必需从大量左右，所以必需从大量类似的似

19、的Ig中中费时费力地挑力地挑选出目的出目的BsAb；多倍体多倍体杂交瘤的交瘤的稳定性差，必需定性差，必需经常常对杂交瘤交瘤进展克隆；展克隆；分泌抗体的量少，且活性低，添加分泌抗体的量少，且活性低，添加纯化化难度；度；人源人源杂交瘤技交瘤技术存在存在诸多多问题，鼠源性，鼠源性BsAb用于用于人人领会出会出现HAMA，故运用遭到限制。，故运用遭到限制。杂交杂交- -杂交瘤方法的主要缺陷：杂交瘤方法的主要缺陷：( (三三) )基因工程方法基因工程方法 主主要要是是以以Fab、Fv和和ScFv等等抗抗体体分分子子片片断断为为根根本本构构件件，用用基基因因工工程程方方法法制制备备BsAb。 1.末端半胱

20、氨酸残基末端半胱氨酸残基(Cys)共价交联共价交联 在在两两种种不不同同ScFv或或带带铰铰链链区区的的Fab段段的的羧羧基基端端分分别别接接上上半半胱胱氨氨酸酸残残基基(SerCys或或Gly4Cys)2.链间衔接肽相连链间衔接肽相连 单链双特异性抗体单链双特异性抗体 (single-chain bispecific antibody, scBsAb) 在在DNA程度用一个柔性较强、长度合程度用一个柔性较强、长度合适的肽段将两个适的肽段将两个ScFv首尾相接，常用的是首尾相接，常用的是Gly4Ser，而长肽链可用，而长肽链可用(Gly4Ser)3，构成双，构成双ScFv的单肽链，经过的单肽链

21、，经过正确折叠成为正确折叠成为BsAb。3.二聚化构造域交融法二聚化构造域交融法4.构建双特异性双链抗体构建双特异性双链抗体 (bispecific diabody) 将抗体将抗体A的的VH和抗体和抗体B的的VL用一短的接头用一短的接头衔接成一条杂合衔接成一条杂合ScFv，同理将抗体，同理将抗体A的的VL和抗体和抗体B的的VH衔接成另一条杂衔接成另一条杂 合合ScFv，构建含有这两条链，构建含有这两条链 的双顺反子表达载体，当两的双顺反子表达载体，当两 者同时表达时，由于短接头者同时表达时，由于短接头 的限制，使两个不同特异性的限制，使两个不同特异性 抗体的轻链可变区和重链可抗体的轻链可变区和

22、重链可 变区交叉组合。变区交叉组合。BAAB五、抗体交融蛋白五、抗体交融蛋白( (一一) )含含FvFv段的抗体交融蛋白段的抗体交融蛋白 1. 1.免疫靶向性抗体交融蛋白免疫靶向性抗体交融蛋白 将毒素、酶、细胞因子等生物将毒素、酶、细胞因子等生物活性蛋白与含活性蛋白与含FvFv段的针对肿瘤的抗体段的针对肿瘤的抗体片段交融，运用于靶向治疗恶性肿瘤。片段交融，运用于靶向治疗恶性肿瘤。 重重组免疫毒素免疫毒素 (immunotoxin) 抗体分子与毒性蛋白的偶抗体分子与毒性蛋白的偶联物物 常用毒素：常用毒素： 细菌来源的毒素菌来源的毒素 假假单胞菌外毒素和白喉毒素胞菌外毒素和白喉毒素 植物来源的毒素

23、植物来源的毒素 蓖麻毒素、肥皂草素及商蓖麻毒素、肥皂草素及商陆抗病毒蛋白抗病毒蛋白 毒毒素素的的细细胞胞毒毒性性作作用用使使得得所所构构建建的的免免疫疫毒毒素素不不能能在在真真核核细细胞胞表表达达，而而用用大大肠肠杆杆菌进展表达制备。菌进展表达制备。 植植物物毒毒素素难难于于在在原原核核细细胞胞中中表表达达，故故很很少少用用来来构构建建抗抗体体交交融融蛋蛋白白，而而多多采采用用化化学交联的方法制备抗体与毒素的偶联物。学交联的方法制备抗体与毒素的偶联物。 毒毒素素都都是是异异源源蛋蛋白白，具具有有免免疫疫原原性性，进进入入人人体体后后可可诱诱导导产产生生人人抗抗异异源源毒毒素素的的抗抗体体(hu

24、man anti-toxin antibody, HATA)。免疫免疫细胞因子胞因子(immunocytokine) 用用含含Fv的的针对肿瘤瘤的的抗抗体体片片段段与与细胞胞因因子子交交融融，靶靶向向治治疗肿瘤瘤，降降低低毒毒副副作作用用。较常常见的的有有抗抗体体-IL-2、抗抗体体-IL-12、抗抗体体-GM-CSF、抗体、抗体-TNF-a等。等。 抗体抗体-酶交融蛋白交融蛋白 抗体抗体导向的向的酶-前前药治治疗(antibody- directed enzyme prodrug therapy, ADEPT) 抗体抗体-核酸核酸酶交融蛋白交融蛋白 抗体抗体-溶栓溶栓剂交融蛋白交融蛋白 2.

25、免疫桥连性抗体交融蛋白免疫桥连性抗体交融蛋白 由一个抗体分子与另一个具有特异由一个抗体分子与另一个具有特异靶向作用的分子构建成交融蛋白，可同靶向作用的分子构建成交融蛋白，可同时结合效应细胞与靶细胞，使两种不同时结合效应细胞与靶细胞，使两种不同细胞发生桥连。细胞发生桥连。 抗抗CD3-EGF ( (二二) )含含FcFc段的抗体交融蛋白段的抗体交融蛋白 免疫粘附素免疫粘附素(immunoadhesin)： 用抗体用抗体Fc段与段与细胞外表某些具有特异胞外表某些具有特异识别及及结合功能的蛋白分子构建的交融蛋白。合功能的蛋白分子构建的交融蛋白。 经过受体与配体受体与配体间相互作用相互作用产生效生效应

26、 发扬Fc段的免疫功能：段的免疫功能： 调理吞噬作用理吞噬作用 ADCC效效应 激活激活补体体 与蛋白与蛋白A或抗或抗Ig结合，利于合，利于纯化和化和检测 延伸交融蛋白的半寿期延伸交融蛋白的半寿期(如如CD4-Fc交融蛋白交融蛋白)六、抗原化抗体六、抗原化抗体 将特定抗原分子表位的将特定抗原分子表位的编码基因序列基因序列插入抗体重插入抗体重链可可变区的区的CDR3部位，表达部位，表达出具有出具有该抗原表位的氨基酸抗原表位的氨基酸组成和构象以成和构象以及免疫原性的重及免疫原性的重组抗体。抗体。 运用：运用： 干干扰或阻断作用或阻断作用 制制备新型疫苗新型疫苗七、细胞内抗体七、细胞内抗体(intr

27、abody)将将携携带小小分分子子抗抗体体基基因因的的表表达达载体体导入入细胞胞内内，在在细胞胞内内特特定定部部位位表表达的抗体分子，达的抗体分子，结合合细胞内的靶抗原后能影响靶抗原的生物学活性。胞内的靶抗原后能影响靶抗原的生物学活性。为了了到到达达不不同同的的目目的的效效应，可可以以对小小分分子子抗抗体体基基因因进展展修修饰，使使其其表表达达于于细胞胞的的不不同同部部位位，当当抗抗体体与与不不同同部部位位中中的的靶靶分分子子结合合后后，可可以以产生不同的效生不同的效应。 运用前景：运用前景：分子功能的研分子功能的研讨 IL-2Ra ， erbB2 基因治基因治疗 抗抗肿瘤基因治瘤基因治疗 抗

28、艾滋病的基因治抗艾滋病的基因治疗 针对HIV外壳蛋白外壳蛋白gpl20、调理理蛋白蛋白Tat 和和Rev、逆、逆转录酶、整合、整合酶 存在的存在的问题 依赖于依赖于PCR技术、抗体分子在大肠技术、抗体分子在大肠杆菌的功能性表达以及噬菌体展现技术杆菌的功能性表达以及噬菌体展现技术(phage display technology)而开展起而开展起来的抗体工程技术。来的抗体工程技术。 抗体库技术：抗体库技术：一、噬菌体抗体库技术一、噬菌体抗体库技术( (一一) )丝状噬菌体状噬菌体(Filamentous phage) (Filamentous phage) 纤丝状病毒状病毒颗粒粒 基因基因组是是

29、单链环状状DNA DNA 复制型复制型DNADNA是病毒基因是病毒基因组DNADNA增殖增殖的中的中 间体，可被用作基因克隆的体，可被用作基因克隆的载体体 基因基因组共共编码1010种蛋白种蛋白 外源蛋白的基因与基因外源蛋白的基因与基因或基因或基因交融交融 表达在噬菌体外表表达在噬菌体外表 ( (二二) )噬菌体展噬菌体展现技技术 将将蛋蛋白白分分子子或或肽段段的的基基因因克克隆隆到到丝状状噬噬菌菌体体的的基基因因组DNADNA中中，与与噬噬菌菌体体的的外外壳壳蛋蛋白白构构成成交交融融蛋蛋白白，在在噬噬菌菌体体的的外外表表表表达达，使使特特定定分分子子的的基基因因型型和和表表型型一一致致在在同

30、同一一病病毒毒颗粒粒内内，经过挑挑选噬噬菌菌体体外外表表的的能能结合合特特定定配配体的蛋白，即可体的蛋白，即可获得相得相应的的编码基因。基因。 噬菌体展噬菌体展现技技术“吸附一洗脱一吸附一洗脱一扩增增 的的过程程优越性：越性：简便易行，省便易行，省时省力；省力；挑挑选才干才干强，经过多多轮挑挑选，可从目，可从目前技前技术所能所能产生的生的库容中容中选择出稀有出稀有克隆；克隆；可直接得到特异克隆可直接得到特异克隆编码DNA，便于，便于进一步的基因操作和表达。一步的基因操作和表达。( (三三) )噬菌体抗体库噬菌体抗体库噬菌体抗体噬菌体抗体 抗抗体体分分子子片片段段与与噬噬菌菌体体外外壳壳蛋蛋白白

31、交交融融，并在噬菌体并在噬菌体颗粒外表表达。粒外表表达。 Fab ScFv diabody噬菌体抗体库噬菌体抗体库(phage antibody library)是将抗体分子多样性可变区基因组装到是将抗体分子多样性可变区基因组装到表达载体内，使之在噬菌体外表表达多表达载体内，使之在噬菌体外表表达多样性噬菌体抗体的集合。样性噬菌体抗体的集合。 二、其它展现抗体库技术二、其它展现抗体库技术 ( (一一) )细菌外表展现技术细菌外表展现技术 ( (二二) )酵母外表展现技术酵母外表展现技术 ( (三三) )哺乳动物细胞外表展现技术哺乳动物细胞外表展现技术 ( (四四) )核糖体展现技术核糖体展现技术

32、转基因基因动物表达抗体物表达抗体 运用运用转基因基因动物作物作为生物反响器来消生物反响器来消费重重组抗体。需思索目的基因的定位表达。抗体。需思索目的基因的定位表达。优点：点：动物物反反响响器器为高高级生生命命体体，能能加加工工消消费 复复杂蛋蛋白白，产生生的的蛋蛋白白近近乎乎天天然然，生生物物活活性高；性高；动物物反反响响器器一一旦旦胜利利，其其易易于于中中试放放大大，工工艺简单，本本钱较低低，易易于于纯化化，适适宜宜商商业开开发。 利用转基因技术将人全套利用转基因技术将人全套IgIg基因座基因座转入转入IgIg基因已被敲除的小鼠，再用抗原基因已被敲除的小鼠，再用抗原免疫小鼠，可产生相应的特异性人源抗免疫小鼠，可产生相应的特异性人源抗体，并且可结合杂交瘤技术进一步制备体，并且可结合杂交瘤技术进一步制备出单克隆抗体。出单克隆抗体。 转人人Ig基因小鼠制基因小鼠制备抗体抗体存在的缺陷：存在的缺陷：假假设抗原免疫后不能抗原免疫后不能产生有效的免疫生有效的免疫应对，就不能得到所需的人源抗体；，就不能得到所需的人源抗体；转基因通常有体基因通常有体细胞突胞突变和其它独特和其它独特的序列，的序列，导致不非常完全的人源抗体致不非常完全的人源抗体序列；序列；产生的抗体具有鼠糖基化方式；生的抗体具有鼠糖基化方式；转基因小鼠表达的人基因小鼠表达的人Ig多多样性性较少。少。