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1、实验七 酵母菌形态观察与死活细胞的鉴定酵母菌形态观察与死活细胞的鉴定 实验目的 ? 1、了解自然界的酵母菌及其形态结构； ? 2、掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法； ? 3、学会计算成活率。 实验器材 ?1、菌种：酵母菌 ?2、仪器或其它用具： 0.05美蓝染液和0.1%美蓝染液， 载玻片，盖玻片，显微镜。 酵母菌的形状观察 ? 1、不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。因此用高倍镜观察即可。 ? 2、酵母细胞一般呈卵圆形。 ? 3、其繁殖方式比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，有些酵母可形成假菌丝；有性繁殖通过接合形成子囊及子囊孢子。 ? 二、死、活细胞鉴定原理 美蓝是一种弱
2、氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。 三、美蓝染色步骤 ? 1、在载玻片中央加一滴01和0.05吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后取酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。 ? 2、用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能
3、将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 ? 3、将制好的片子放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酵母菌的形态，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 ? 4、30分钟后再观察，注意死细胞数量是否增加。 ? 四、成活率的测定 ?在一个视野里记死细胞和活细胞数，共记数 5-6个视野。 ?成活率=活细胞总数（死+活细胞总数） 100 注意事项 ?染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察； ?盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡，影响观察。 实验报告 ?(1)绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特
4、征； ?(2)计算不同时间内酵母菌的死亡率； ?（3）不同浓度的美兰染液对酵母菌的死活有何影响？ 实验八 酵母菌的大小测定 一、目的要求一、目的要求 ?1、学习并掌握用测微尺测定微生物 大小的方法。 ?2、了解目镜测微尺和镜台测微尺的原理 ?3、增强对微生物细胞大小的感性认识。 ?1、菌种 酵母菌 ?2、仪器或其它用具 目镜测微尺，镜台测微尺，显微镜。 二、实验器材及用品二、实验器材及用品 三、基本原理三、基本原理 ?微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 ?镜台测微尺是中央部分刻
5、有精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格，每格长度等于001mm（即10m）。是专用于校正目镜测微尺每格长度的。 ?目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。 四、操作步骤 1、装目镜测微尺 2、校正目镜测微尺 （1）放镜台测微尺 将镜台测
6、微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。 （2）先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰的看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占格数。用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和油镜下，两重合线之间两尺分别所占格数。 显微测微尺显微测微尺 ?（3）计算 由于已知镜台测微尺每格长10um，根据公式 目镜测微尺每格长度（um）=两条重合线间镜台测 微尺的格数10/两重合线间目镜测微尺的格数 即可分别计算出在不同放大倍数下
7、，目镜测微尺 每格所代表的长度。 ?低倍镜下-倍目镜测微尺每格长度为 - ?高倍镜下-倍目镜测微尺每格长度为 - ?油镜下-倍目镜测微尺每格长度为 - 注意事项 ?1、镜台测微尺的玻片很薄，在标定油镜时，要格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头； ?2、标定目镜测微尺时，一定要准确对正目镜测微尺与镜台测微尺的重合线。 ?3、酵母菌大小的测定 先制备水晶片，再用低倍镜找到标本后，换高倍镜测定酵母菌的长和宽。测定时，通过转动目镜测微尺和移动载玻片，测出酵母菌细胞的宽和长所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘以目镜测微尺（用高倍镜时）每格所代表的长度，即为该菌的实际大小；选择3-5个细胞进行测量，求平均值。 大小范围表示为：酵母菌：宽um*长um 五、实验报告 ?(1)当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变接物镜，目镜测微尺每格所量的镜台上物体的实际长度是否相同？为什么？ ?(2)为什么更换不同放大倍数的目镜和物镜时必须重新用镜台测微尺对目镜测微尺进行标定? ?(3)将校正与测定结果填入表格中。
