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1、实验九实验九抗抗 酸酸 染染 色色临床病原生物学教研室临床病原生物学教研室一、实验目的：一、实验目的：1.掌握抗酸染色的原理和方法掌握抗酸染色的原理和方法2掌握结核分支杆菌痰涂片的报告方掌握结核分支杆菌痰涂片的报告方法。法。v分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色抗酸染色。v齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景
2、中的物质为兰色。二、实验原理：二、实验原理：三、实验材料：三、实验材料：细菌：结核杆菌染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液其它：接种环、酒精灯、载玻片等四、实验方法：四、实验方法：1、细菌涂片的制备、细菌涂片的制备 1）涂片：）涂片：20mm*25mm薄涂片或薄涂片或 20mm*15mm厚涂片厚涂片 2）干燥：）干燥：自然干燥自然干燥 3）固定：）固定：火焰固定火焰固定四、实验方法：四、实验方法：1、细菌涂片标本的制备、细菌涂片标本的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定2、染、染 色色3、油镜观察油镜观察1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红石
3、炭酸复红2-3滴滴，在火焰高处徐徐加热，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾切勿沸腾，出现蒸汽出现蒸汽即暂时离开即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，干涸，加热加热5-10分钟分钟，待标本冷却后用水冲洗待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：）脱色： 3%盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色301；用水冲洗。；用水冲洗。3）复染：用）复染：用碱性美兰溶液复染碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸，用水冲洗后用吸水纸吸干。水纸吸干。五、实验结果：五、实验结果：结核杆菌呈红色结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。六、注意事项：六、注意事项：1、无菌操作、无菌操作2、涂片厚度要适中、涂片厚度要适中3、固定、固定4、冲洗、冲洗5、染色时间、染色时间6、初染加热的温度，勿沸腾、初染加热的温度，勿沸腾准备v细菌：卡介苗v染液：抗酸染液（2套/室）v其它：载玻片（1张/人）、结核分枝杆菌示教片（1张/人）v痰标本 8盒
