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1、实验四实验四 血凝和血凝抑制试验血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HIHemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）徐徐徐徐晓晓晓晓娟娟娟娟一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验材料三、实验材料四、实验步骤四、实验步骤五、结果判定五、结果判定n了解血凝和血凝抑制试验的原理。了解血凝和血凝抑制试验的原理。n了解血凝价和血凝单位的概念。了解血凝价和血凝单位的概念。n掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判掌握
2、血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。定的方法。 一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理（一）血凝试验（一）血凝试验（HA）n一一些些病病毒毒能能够够促促使使动动物物如如鸡鸡、鹅鹅、豚豚鼠鼠和和人人的的红红细胞发生凝集，叫做细胞发生凝集，叫做血凝试验血凝试验。n病病毒毒凝凝集集红红细细胞胞是是一一种种较较为为普普遍遍的的现现象象，可可以以作作为鉴定病毒的一个指标。为鉴定病毒的一个指标。HA试验的原理图试验的原理图一层一层RBC均匀铺在孔底者为均匀铺在孔底者为+；基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为+；RBC在孔底形成一个环状，四周有小凝
3、集块者为在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为+；RBC在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为+;RBC在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为;红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为- -。+ + + + -血凝试验结果判定血凝试验结果判定1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C n血凝价：血凝价：能使红细胞产生能使红细胞产生50%50%凝集的病毒
4、最高稀凝集的病毒最高稀释度。释度。 （二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）当当病病毒毒悬悬液液中中加加入入特特异异性性抗抗体体时时，这这种种红红细细胞胞凝凝集集的的现现象象就就被被抑抑制制，称称红红细细胞胞凝凝集集抑抑制制试试验验，即即血凝抑制试验血凝抑制试验。因因此此，可可以以用用已已知知病病毒毒来来检检测测被被检检血血清清中中的的相相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。HA试验的原理图试验的原理图HI试验的原理图试验的原理图三、实验材料三、实验材料1.鸡鸡新新城城疫疫病病毒毒：鸡鸡新新城城疫疫弱弱毒毒株株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液
5、制备。接种鸡胚、收获尿囊液制备。2.鸡鸡红红细细胞胞：采采集集健健康康鸡鸡血血液液，以以阿阿氏氏液液抗抗凝凝，以以生生理理盐盐水水洗洗涤涤35次次，将将血血浆浆、白白细细胞胞等等充充分分洗洗去去，用用生生理理盐盐水水配配置置成成1%红红细细胞胞悬悬液液使使用。用。3.0.85%生理盐水。生理盐水。4.被检血清，采自被检鸡的健康血清被检血清，采自被检鸡的健康血清。四、实验步骤四、实验步骤（一）血凝试验（一）血凝试验（HA）1.在血凝板第一排的在血凝板第一排的112孔加入孔加入50l生理盐水。生理盐水。2.在在第第1孔孔中中加加入入50l病病毒毒抗抗原原，反反复复吸吸取取混混匀匀后后吸吸50l到到
6、第第2孔孔，如如此此倍倍比比稀稀释释直直到到第第10孔孔，混混匀匀后后弃弃50l；最最后后两两孔孔（11、12）为为红红细细胞胞对照。对照。3.将将1%的的红红细细胞胞轻轻轻轻摇摇动动混混匀匀，在在112孔孔中中每每孔加入孔加入50l。4.手工震荡，手工震荡，37静置静置2530min后观察结果。后观察结果。5.病毒液的血凝价是病毒液的血凝价是1:2？。n血凝价：血凝价：能使红细胞产生能使红细胞产生50%50%凝集的病毒最高稀凝集的病毒最高稀释度。释度。 （二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）1.在血凝板的在血凝板的111孔加入孔加入25l生理盐水，最后一孔（生理盐水，最后一孔（12孔）
7、加孔）加50l。2.第第1孔加待检血清孔加待检血清25l，混匀后吸混匀后吸25l至第至第2孔，倍比孔，倍比稀释直至第稀释直至第10孔，混匀后弃孔，混匀后弃25l。3.从从111孔，每空加稀释好的孔，每空加稀释好的25l 4 4个血凝单位个血凝单位的病毒的病毒悬液悬液。37 静置静置2530min如果血凝价为如果血凝价为1:21:28 8，那么，那么4 4个血凝单位就是个血凝单位就是1:21:26 6第第11、12孔不加孔不加第第12孔不加孔不加n血凝价：血凝价：能使红细胞产生能使红细胞产生50%50%凝集的病毒最高稀释凝集的病毒最高稀释度。度。 n1 1个血凝单位：个血凝单位：能使能使50%5
8、0%的红细胞发生凝集的病毒的红细胞发生凝集的病毒悬液。悬液。病毒浓度病毒浓度1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C 4.将将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔中每孔加入孔加入50l。5.手工震荡，在手工震荡，在37静置静置2530min后观察结果。后观察结果。6.结果判定：以红细胞凝集结果判定：以红细胞凝集100%的抑制作为结的抑制作为结果判定的终点。果判定的终点。7.血凝抑制价是血凝抑制价是1:2？，被检血清为阴，被检血清为阴/阳性。阳性。1:24为阳性为阳性1:22为阴性为阴性1:23为可疑为可疑血凝抑制价血凝抑制价 第第1111孔孔为为病病毒毒对对照照，应应该该完完全全凝凝集集，第第1212孔孔为为细细胞胞对对照照，应该完全沉积到孔底。应该完全沉积到孔底。HAHI细胞对照五、结果判定五、结果判定n血凝价是血凝价是1：？；：？；n血凝抑制价是血凝抑制价是1：？；：？；n被检血清为阴性还是阳性被检血清为阴性还是阳性?
