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1、生命科学部新产品培训分子病理诊断人体、染色体、人体、染色体、人体、染色体、人体、染色体、DNADNA关系？关系？关系？关系？每个人体细胞内有一个细胞核，每个细胞核内有46条染色体，每个染色体都蕴含着具有遗传效应的DNA片段，正是它们决定了我们每个不同的个体。现在，让我们一起揭开染色体和DNA的结构与功能之谜。PPT模板下载： 行业PPT模板： 节日PPT模板： PPT素材下载：PPT背景图片： PPT图表下载： 优秀PPT下载： PPT教程： Word教程： Excel教程： 资料下载： PPT课件下载： 范文下载： 试卷下载： 教案下载： 目目录录1.分子病理概述分子病理概述2.分子病理学实
2、验室设施与环境分子病理学实验室设施与环境3.病理科实验室质量管理标准病理科实验室质量管理标准4.分子病理学常用检测设备分子病理学常用检测设备5.推荐设备型号及预算推荐设备型号及预算6.常用试剂及价格常用试剂及价格国药集团联合医疗器械有限公司7.经济效益分析经济效益分析分子病理诊断的市场介绍分子病理诊断的市场介绍分子病理学分子病理学概述概述分子病理诊断的应用范围分子病理诊断的应用范围常用分子病理诊断技术常用分子病理诊断技术分子病理诊断的现在和未来分子病理诊断的现在和未来1503亿美亿美元元全球IVD市场2155亿美元亿美元中国IVD市 场份额35%全球分子诊断 市场份额415%全球分子诊断复合增
3、长速度55%全球IVD市场的平均增长速度620%中国分子诊断增长速度国外厂家：国外厂家：罗氏诊断（瑞士）、Gen-Probe（Hoiogic）（美国）、QIAGEN（荷兰）、BD（美国）、西门子（德国）、生物梅里埃（法国）、雅培（美国）、诺华（瑞士）、Cepheid（美国）和贝克曼库尔特（美国）国内厂家：国内厂家：深圳华大、达安基因、科华生物、上海之江、北京博奥、厦门艾德、湖南圣湘、福州泰普、广州安必平分子病理诊断的应用范围分子病理诊断的应用范围l肿瘤易感基因的检测（Rb1视网膜母细胞瘤；WT1肾母细胞瘤）l肿瘤先关病毒的检测(HPV病毒与宫颈癌发生有很大关系）l肿瘤的早期诊断：（K-ras基
4、因突变在结肠癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤中发生率高，结肠癌指导靶向用药爱必妥，肺癌指导靶向用药吉非替尼、埃罗替尼）l疑难肿瘤的诊断和分类（T细胞受体基因重排具有鉴别淋巴细胞增生和淋巴瘤，Bcr区基因重排可对慢性粒细胞性白血病和急性粒细胞性白血病进行鉴别诊断，N-myc和C-myc检测可对鉴别神经母细胞瘤和神经上皮瘤有应用价值）l肿瘤的预后监测l肿瘤个体化和预见性治疗提供依据l肿瘤的预后判断：(HER2基因阳性表达表示乳腺癌治疗预后不良需要改变治疗方案，指导靶向用药赫赛汀）常用分子病理诊断技术常用分子病理诊断技术免疫组织化学技术（免疫组织化学技术（IHC)-检测蛋白质检测蛋白质分子原位杂交分子原位杂交
5、-检测检测DNA、RNA荧光原位杂交技术（荧光原位杂交技术（FISH)-检测检测DNA、RNA多聚酶链式反应技术多聚酶链式反应技术(PCR)-检测检测DNA、RNA荧光定量荧光定量PCR技术技术-检测检测DNA、RNADNA测序技术测序技术-检测检测DNA突变突变生物芯片技术生物芯片技术-检测检测DNA、RNA、蛋白质、蛋白质DNA印迹技术印迹技术(southernblot)-检测检测DNA微卫星不稳定性检测技术（微卫星不稳定性检测技术（MSI)分子病理诊断的现在和未来分子病理诊断的现在和未来现在（弊端）现在（弊端）未来（突破）未来（突破）自动化不足（限制检测通量）自动化不足（限制检测通量）检
6、测技术难以突破，产品同质化检测技术难以突破，产品同质化严重严重仪器一体化、自动化、操作简便仪器一体化、自动化、操作简便增强研发能力，革新技术，研发增强研发能力，革新技术，研发新品新品二代测序技术突破提升，提高检二代测序技术突破提升，提高检测速度，降低检测成本测速度，降低检测成本u荧光原位杂交技术（荧光原位杂交技术（FISH)原理：原理：通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交，在荧光显微镜下能原位显示细胞核内杂交信号的分子细胞遗传学技术。步骤：步骤：FISH样本制备探针的制备探针标记杂交染色体显带荧光显微镜检测结果分析在医院中的使用：在医院中的使用：病理科、血液科、妇产科、生殖中心
7、（产前诊断，植入前诊断）产品种类及厂家品牌：产品种类及厂家品牌：细胞类探针-白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、产前诊断和产后筛查类实体肿瘤类探针-乳腺癌、子宫颈癌、膀胱癌、肺癌、软组织肉瘤、前列腺瘤、甲状腺癌等方面实验室基本要求：实验室基本要求：环境-样本准备区、暗室（10-15平米左右）设备-荧光显微镜以及荧光成像分析系统、水浴锅、原位杂交仪、冰箱、离心机、恒温箱办公设备-电脑、打印机实验耗材-FISH探针、普通实验耗材技术人员：技术人员：1人u实时荧光定量实时荧光定量PCR技术技术原理：原理：在PCR反应体系中加入荧光基团，通过探针与扩增产物的结合释放出荧光信号，再通过专门的仪器对信号进行实时检测，
8、经过软件分析可以准确计算出目的基因的初始数量，实现定量检测。步骤：步骤：提取样本核酸反转录成CDNA设计引物和探针制备探针标记RT-PCR反应进行分析荧光实验图应用范围：应用范围：临床疾病诊断、动物疾病检测、食品安全、科学研究、应用行业检测肿瘤的项目：检测肿瘤的项目：CEA(mRNA）、AFP(mRNA）、UPA(mRNA）、CK19(mRNA）、CK20(mRNA）、MDRI(mRNA）优点：优点：特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化，可以在一个试管内将目的基因数小时内扩增至百万倍，可从一根毛发、一滴血、一个细胞内扩增出足量的DNA进行研究和检测鉴定。实验室基本要求：实验室基本
9、要求：需要避光的暗室；有荧光显微镜观察室技术人员：技术人员：1人uDNA一代测序技术一代测序技术原理原理：（：（sanger双脱氧核苷酸末端终止法）双脱氧核苷酸末端终止法）利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立四种相互独立的测序反应体系，在体系中加入不同的ddNTP作为链延伸终止剂。在测序引物指导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过凝胶电泳后，可以读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。步骤：步骤：测序模板的纯化与定量、测序反应、测序反应产物纯化与变性、上样电泳、分析结果应用范围：应用范围：寻找与疾病相关的突变信息、指导靶向用药
10、、寻找致病基因、各种基因作用的破解，提高农产品质量、明白个人基因信息，选择投保临床检测项目：临床检测项目：K-RAS基因突变检测（结直肠癌、胃癌、头颈部癌及肺癌，爱必妥类靶向治疗）EGFR基因突变检测（肺癌，易瑞沙和特罗凯靶向治疗）Bcr-Ab1融合基因和C-KIT、PDGFR基因突变检测（白血病、胃肠道间质瘤，格列卫靶向治疗）乳腺癌化疗、结直肠腺癌化疗的个体化治疗方案技术人员：技术人员：1-2人uDNA二代测序技术二代测序技术原理原理：（大规模平行测序法）单链DNA文库被固定在芯片上并带有合成引物，用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP，逐一加入DNA芯片上，当聚合酶合成互补链时，每添加一种
11、dNTP就会释放不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测DNA的序列信息。步骤：步骤：文库制备DNA芯片创建进行测序数据分析公司公司平台名称平台名称测序方法测序方法检测方法检测方法大约读长大约读长优点优点局限性局限性第一代ABI3130XL-3730XLSanger法荧光/光学600-1000bp高读长，准确性高通量低，样品制备成本高第二代罗氏基因组测序仪焦磷酸法光学230-400bp通量大读长短，样品制备难，准确性差三代三代DNA测测序方法的序方法的区别区别第一代第一代测序技术测序技术第二代第二代测序技术测序技术第三代第三代测序技术测序技术Sanger双脱双脱氧
12、链终止法氧链终止法循环芯片技术循环芯片技术实现了高通量、实现了高通量、高效率、高准高效率、高准确度的测序大确度的测序大大降低了测序大降低了测序的成本的成本单分子测序单分子测序试剂用量少，试剂用量少，成本更低成本更低第一代测序技术凭借其长的序列片段和高的准确率，适合对新物种进行基因组长距框架的搭建以及后期GAP填补，但是成本昂贵，而且难以胜任微量DNA样品的测序工作。第二代测序技术中：u454序列片段最长，比较适合对未知基因组从头测序，搭建主体结构，但是在判断连续单碱基重复区时准确度不高。uSolexa较454具有通量高、片段短、价位低的特点，可以用于大基因组和小基因组的测序和重测序。uSOLi
13、D基于双碱基编码系统的纠错能力以及较高的测序通量，适合转录本研究以及比较基因组学特别是SNP检测等，但是测序的片段短限制了该技术在基因组拼接中的广泛应用。u（可以完成一个人整体遗传组的测序）第三代测序技术目前正在发展中，在未来会成为主导。？哪种检测技术才是现在临床使用最广的？哪种检测技术才是现在临床使用最广的技术成熟、定量准确特异性、敏感性高；成本低廉、仪器价格适中产品种类能够满足相关疾病检测以及科研研究使用PCR技术技术尚未克服技术缺陷、无法做到准确定量检测特异性、敏感性低；成本高昂、仪器价格昂贵产品种类少，只用于科研和药物筛选等用途，无法满足疾病检测基因芯片基因芯片荧光定量PCR技术是临床
14、疾病基因诊断的主要手段，有广阔的市场容量和良好的发展前景总结总结分子病理学实验室设施与环境分子病理学实验室设施与环境1.布局合理，实验室各区域的正确划分3.消防设施安全消防通道畅通4.石蜡组织、DNA样本的存放2.水电、照明、通风符合实验室基本要求5.实验室记录、操作手册等文件存放7.安装生物安全防护措施8.实验室的清洁日常消毒、有相关记录6.实验室耗材试剂的存放废弃物的处理病理科实验室质量管理标准病理科实验室质量管理标准l卫生部【2009】31号文件（病理科建设与管理指南）l2006年6月1日实施的（医疗机构临床实验室管理办法）l全国各省市的关于临床病理专业质量检查及评价标准l美国CAP认可
15、标准l欧洲NordiQC认证标准l国际标准化组织制定并与2003年正式发布医学实验室的管理标准，ISO15189：2003(医学实验室质量和能力的专用要求）IHCISH分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备免疫组化染色所需试剂：l机用缓冲液l机用清洗液l机用抗原修复液l一抗试剂l机用二抗检测系统分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备原位杂交所需试剂：l原位杂交试剂盒l二甲苯l无水乙醇lPBS清洗液分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备荧光原位杂交（FISH)HyChrome是一个创新产品，用于完成高温原位变性和退火杂交探针过程。HyChrome由一个单独的平板加热
16、模块和一个湿度箱组成：平板加热模块的温度是由一个数字微处理器来控制，湿度箱为了减少脱水，最终实现高信号和低背景杂交。在一个模块中完成标本变性和杂交的温度控制技术以及可能性已被验证了，该技术以及可能性保证了片子之间温度的可变性和一个好的再现性所需试剂：l一抗探针l二抗试剂l蛋白酶l变性液l二甲苯l无水乙醇lPBS清洗液分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备DM2500l荧光显微镜部分l数码成像系统部分l细胞染色体核型分析软件l荧光原位杂交分析软件荧光定量PCR仪显示器核酸电泳仪椅子空气流向扩增和分析区金属浴水槽离心机生物安全柜冰箱椅子空气流向样本制备区废液缸振荡器天平离心机椅子试剂准备
17、区空气流向专用走廊专用走廊普通PCR仪凝胶成像系统核酸提取仪DNA测序仪分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备核酸提纯仪博日博日GenePure核酸提纯仪核酸提纯仪l采用磁珠分离技术，提取过程自动化l多选择性试剂盒可以从多种样品材料中分离纯化高纯度的核酸l省时、省力、高效、准确分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备PCR扩增仪博日博日GeneMax所需试剂：lPCRMIXl引物l双蒸水分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备生物安全柜l高效循环空气过滤器l自适应压力调整功能l微机控制l大屏幕液晶显示l配重前窗l环境安全l配备有紫外灯l照明系统分子病理学实验室检测设备
18、分子病理学实验室检测设备离心机产品特征：l适应于DNA的分离、提纯及后处理清洁工作l最大转速达15000rpml无需手动，自动关门l运行安静，无碳刷感应电机l温度范围：从-20度到40度，保证样品的生物活性l适用于到500ml的样品l运行时间：9h59min，连续离心贝克曼Allegra25R台式高速冷冻离心机分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备荧光定量PCR仪l采用荧光实时检测方式，实现在同一管内同时进行扩增和检测，无须后处理l先进的热电制冷技术，保证了超高速的热循环系统加热，制冷迅速、稳定l稳定、准确的136梯度功能，确保PCR条件更优化，SOAK的恒温功能，实现了PCR试剂的
19、低温保存ll对PCR扩增全过程进行实时动态监测l线型范围大，可达到10个数量级的起始DNA拷贝数无需梯度稀释l无需开启PCR反应管，可避免在PCR期间及PCR之后产物污染，确保结果准确l多色荧光检测，在单一反应中取得更多信息l自动化的热盖技术，无需手动开/闭，保证热盖在不同高度试管使用时的压力l可打印多个或单个样本l先进的模块底部荧光检测技术，受发明专利保护ll支持RS232、USB、Bluetooth接口博日LineGene9600所需试剂：l待测样本核酸提取试剂盒l待测样本浓度测定l逆转录试剂盒l荧光定量PCR试剂盒l其他试剂分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备ABIStepO
20、nepPlus荧光定量PCR仪l性价比极高的三色/48孔(StepOne)或四色/96孔(StepOnePlus)系统l基于使用寿命长的LED的光学系统，可以检测多种荧光染料，用于基因表达分析、病原体定量检测、SNP(单核苷酸多态性)基因分型、以及阴性/阳性分析等多种实验l可以进行标准模式和快速模式PCR反应，快速模式可以在40分钟内完成PCR反应lLCD触摸屏和支持USB存储，使得系统配置更灵活，并且可以实现无PC操作l具有独特的VeriFlexTM加热块，极大地提高了系统的功能和温控的精度分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备核酸电泳仪l外形尺寸（LWH）：242132105mm
21、l凝胶板规格(LW)：8580mml试样格：12、15齿，、厚l重量：约1Kgl缓冲液总容量：约500m适用于鉴定、分离、制备DNA以及测定其分子量。有冷却装置，可做双排胶。此型号适用PCR电泳或RNA电泳。北京六一电泳仪分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备核酸凝胶成像系统l暗箱式，无需暗室，可全天候使用l抽屉式灯箱互换，使用方便，防止污染l具有实时预览、自动对焦功能l紫外滤光镜：EB专用超多层镀膜滤光镜（）l*兼容tif、jpg、bmp、gif等诸多图像格式l高清晰度130万像素摄像头，高品质成像质量，遥控电动变焦，智能化控制l专用拍摄软件与分析软件一体操作，使“观察、拍摄、分析
22、一气呵成l通过USB接口与计算机连接，不触动计算机内部硬件，便于维护和保修l紫外/白光转换屏。用途：用途：主要用于核酸、蛋白质电泳观察、照像和实验结果科学分析。分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备DNA一代测序仪ABI3730XLsanger法法毛细管电泳分离毛细管电泳分离电脑荧光检测电脑荧光检测数据分析可得到数据分析可得到DNA碱基序列碱基序列性能特点：性能特点：u毛细管规格毛细管规格:96道毛细管道毛细管u毛细管长度毛细管长度:50cmu凝胶的规格凝胶的规格:POP-7液体分离胶液体分离胶u配套的试剂配套的试剂:基因测序基因测序和和5Sequencebuffer)基因分型基因分
23、型(Liz120,Liz500,ROX500)u基因测序及分型的运行时间基因测序及分型的运行时间时间：96样本2h通量：（94-96）/384*12优点：优点：方法可靠、准确度高方法可靠、准确度高,且已形成规模化且已形成规模化缺点：缺点：测定通量低，成本高测定通量低，成本高u读长：700-900bp分子病理学实验室检测设备分子病理学实验室检测设备DNA二代测序仪IlluminaGA循环芯片技术循环芯片技术技术特点：技术特点：u测序通量高：每个测序反应能达到3G以上的数据通量；u准确率高：98.5%，同时也有效地解决了多聚重复序列的读取问题；u低成本：比传统毛细管测序技术成本的1%还低；uDNA
24、序列的读取长度不断增加，当前达到200bp；u可以进行Pair-End双向测序，目前Pair-End文库插入片段u大小范围可由200bp到10kb；u每张芯片有8个通道，每个通道可单独测序一个样品，也可以把多个样品混合在一起测序。优势：优势：u可扩展的超高通量u需要样品量少（低至100ng)u简单、快速、自动化u单个或配对末端支持推荐设备型号及预算推荐设备型号及预算初级配置方案（适合二级医院，标本量少，常规检测）初级配置方案（适合二级医院，标本量少，常规检测）序号设备名称品牌型号单价数量金额备注1荧光显微镜成像分析系统徕卡DM250035万135万中端显微镜，徕卡进口CCD,徕卡进口分析软件2
25、恒温加热平台常州菲普DB-3A型650016500高温变性及烤片用3电热恒温水槽常州菲普SHA-CA型11000111000洗涤用4电热恒温培养箱上海精宏DNP-9052460014600杂交用5生物安全柜上海力康HFsafe-900A2268001268006PCR扩增仪Hema9600基因扩增仪47000147000总计445900推荐设备型号及预算推荐设备型号及预算专业性配置方案（适合三甲医院，样本量多）专业性配置方案（适合三甲医院，样本量多）序号设备名称品牌型号单价数量金额备注1荧光显微镜成像分析系统徕卡DM25003500001350000中端显微镜，徕卡进口CCD,徕卡进口分析软件
26、2原位杂交仪Thermobrite890001890003台式高速离心机贝克曼Allegra25R600001600004实时荧光定量PCR仪凯杰66000016600005生物安全柜上海力康HFsafe-1200TE380001380006DNA测序仪ABI37301总计科研性配置方案（适合综合医院，承担科研任务）科研性配置方案（适合综合医院，承担科研任务）序号设备名称品牌型号单价数量金额备注1荧光显微镜成像分析系统徕卡DM400050万150万中端显微镜，徕卡进口CCD,徕卡进口分析软件2原位杂交仪Thermobrite890001890003台式高速离心机贝克曼Allegra25R600
27、001600004实时荧光定量PCR仪罗氏LightCyler48068000016800005生物安全柜上海力康HFsafe-1200TE380001380006DNA测序仪IlluminaGA1总计推荐设备型号及预算推荐设备型号及预算分子病理常用试剂及价格分子病理常用试剂及价格荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISH)的经济价值的经济价值直接效益直接效益间接效益间接效益有证试有证试剂剂无证试无证试剂剂国外厂家：国外厂家：2000元元/人份；国内厂家：人份；国内厂家：1100元元/人份人份医院收费医院收费2500元元/人份人份利润率：利润率：20%-56%国外厂家国外厂家1500元元/人份；国内厂家：人份；国内厂家：700元元/人份人份医院收费医院收费2400元元/人份人份利润率：利润率：37.5%-70.8%用于增强科研研究、发表文章、提升科室或医用于增强科研研究、发表文章、提升科室或医院学术地位，获得巨大的潜在价值院学术地位，获得巨大的潜在价值目前目前FISH的发表文章指数增长，说明此技术应的发表文章指数增长，说明此技术应用迅速扩大，有较多医学病例的地区将是效益用迅速扩大，有较多医学病例的地区将是效益增长最快速的区域增长最快速的区域
