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1、牛结核防控技术及研究进展牛结核防控技术及研究进展内容提要结核病流行现状牛结核病诊断方法及研究进展牛结核病预防与治疗牛尾静脉采血介绍记录一、结核病流行现状结核病概述结核病概述结核分枝杆菌引起慢性消耗性人畜共患病OIE：强制报告疫病结核性肉芽肿（结节）干酪样坏死或钙化牛结核病危害牛结核病危害奶牛牛奶-人结核病传染源产奶量下降、牛奶品质降低肉牛-时间短饲料报酬低役牛劳动力减弱人型菌人型菌牛型菌牛型菌禽型菌禽型菌人人 犬犬 猫猫 牛牛 马马 羊羊 猪猪 鸡鸡病原病原-致病性结核分枝杆菌属致病性结核分枝杆菌属 人型菌人型菌 & 牛型菌牛型菌基因水平上基因水平上99.95%同源同源感染谱相互交叉感染谱相互
2、交叉10%结核病人感染牛型菌结核病人感染牛型菌人型菌可感染牛人型菌可感染牛 (Chen, 2009)结核病防治的新挑战？人结核病防治的新挑战？人 -牛牛人型与牛型结核菌结核菌在人与牛之间的传播除非扑灭牛结核病，否则人类结核病的控制是不会成功的。 世界卫生组织第七次专家委员会报告二、牛结核病诊断方法及研究进展结核菌的细胞免疫与体液免疫规律病程发展病程发展免疫反应免疫反应细胞免疫细胞免疫体液体液免疫免疫90%结核菌感染者不发病细胞免疫和体液免疫分离早期发生细胞免疫病程后期体液免疫增加症状症状潜伏期潜伏期活动期活动期16-45d16-45d长者达数月，甚至数年、终生长者达数月，甚至数年、终生无明显症
3、状无明显症状不发病不发病肺结核肺结核肺外结核肺外结核症状症状咳嗽咳嗽虚弱虚弱消瘦消瘦呼吸困难呼吸困难咳嗽加重咳嗽加重鼻孔干酪样鼻汁鼻孔干酪样鼻汁鼻孔干酪样鼻汁鼻孔干酪样鼻汁胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音体表淋巴结肿大体表淋巴结肿大体表淋巴结肿大体表淋巴结肿大结核病诊断结核病诊断胶体金胶体金-干扰素干扰素ELISAELISAPPDPPD皮试皮试免疫学诊断免疫学诊断分子生物学分子生物学体液免疫体液免疫细菌学诊断细菌学诊断细胞免疫细胞免疫PPDPPD皮试操作流程皮试操作流程剃毛颈侧中部上三分之一测量皮皱厚,记录
4、,标记皮内注射结核菌素PPD稀释成2万单位/ml,注射2000单位/0.1ml测量皮皱厚,记录,标记72小时l75%酒精消毒术部;l左手捏起皮肤，右手持针管;l将针头与皮肤成30-45角刺入表皮与真皮之间，缓慢注入药液;l以局部形成丘疹状隆起为准。 皮试工具皮试工具判定标准判定标准中国中国GB/T18645-2002OIE皮内注射0.1ml(2000IU)牛结核菌素,72h后观察皮厚,96与120h再观察一次牛结核菌素单用,或牛与禽结核菌素联用,不少于2000 IU,72h后观察阳性:皮厚差大于4mm阴性:皮厚差小于2mm可疑:皮厚差2-4mm疑似牛立即在另一侧用同一批PPD第二次皮试,72h
5、后观察阳性:皮厚差大于4mm阴性:皮厚差小于2mm 可疑牛42天后重作皮试牛与禽结核菌素联用时,牛结核菌素皮厚差大于禽结核菌素皮厚差4mm为阳性,1-4mm为可疑,小于或等于禽结核菌素皮厚差为阴性结核菌素皮内变态反应的特点结核菌素皮内变态反应的特点世界动物卫生组织世界动物卫生组织OIEOIE迄今为止唯一推荐的牛迄今为止唯一推荐的牛结核病的诊断方法结核病的诊断方法非非特异性反应特异性反应重症牛敏感性低重症牛敏感性低操作复杂烦琐操作复杂烦琐结果判断主观性大结果判断主观性大IFN-IFN- 检测方法检测方法检测检测OD值并确定值并确定IFN- 水平水平抽取全血抽取全血 ESAT-6CFP-10有丝分
6、裂原对照有丝分裂原对照将全血转移至培养孔中将全血转移至培养孔中,加入抗原加入抗原培养过夜培养过夜吸取上层血浆吸取上层血浆进行夹心进行夹心ELISA检测检测,温育温育 60分钟分钟洗涤洗涤, 加底物加底物,作用作用30分钟后终止反应分钟后终止反应 TMBTMB显色显色IFN-g IU/mlOD 450nm标准曲线标准曲线步骤步骤 1 全血培养全血培养步骤步骤 2 IFN-gamma ELISA阴性对照阴性对照IFN-IFN- 释放检测特点释放检测特点 诊断诊断潜伏潜伏感染及感染及活动性活动性结核病结核病 高特异性，高敏感性高特异性，高敏感性 外周血，外周血，24h24h出结果出结果 比比TSTT
7、ST更贵，采血后在更贵，采血后在1212小时内检测小时内检测 Bovi Bovi TB IFN-gamma kitTB IFN-gamma kit 目前发达国家均以该方法辅助进行结核目前发达国家均以该方法辅助进行结核病根除计划病根除计划牛结核病特异抗体检测方法ELISA方法胶体金方法Rv3872CFP10ESAT6MPB70MPB83牛结核特异抗体检测牛结核特异抗体检测检测针对特异抗原（单个或多个）的抗体检测针对特异抗原（单个或多个）的抗体抗体消长规律复杂！抗体消长规律复杂！总体而言抗体水平与病程发展成正比总体而言抗体水平与病程发展成正比抗体针对的抗原，抗体类型，抗体水平因个体而抗体针对的抗原
8、，抗体类型，抗体水平因个体而异，因时而异异，因时而异方法敏感性低方法敏感性低多抗原多抗原联合使用联合使用及与及与TSTTST联合使用可显著提高联合使用可显著提高检出率检出率三、牛结核病预防和治疗预防预防检疫检疫分群隔离分群隔离培育健康牛犊培育健康牛犊消毒消毒5%5%来苏儿或来苏儿或3%3%氢氧化钠或氢氧化钠或0.1%-0.5%0.1%-0.5%过氧过氧乙酸消毒畜舍、饲养用具和运动场乙酸消毒畜舍、饲养用具和运动场牛奶消毒后出场牛奶消毒后出场治疗治疗早期氨基水杨酸钠、异烟肼难以根除价值不大控制根除计划控制根除计划扑杀扑杀四、牛尾静脉采血介绍尾静脉采血优点尾静脉采血优点l方便快速l 一般不需要保定l
9、减小应激尾静脉采血方法尾静脉采血方法l牛尾静脉位于尾椎腹侧正中的尾椎腹侧正中的脉管沟内脉管沟内l左手抓住尾巴垂直上举,右手用镊子取5%碘酒棉球在尾根1 /21 /3处(离尾根处7-15cm)进行消毒l手持手持9号号采血器,顺血管斜角刺斜角刺入入,见有血液回流,即可外拉针芯使血液流入采血器l采血完毕,局部消毒适当按压采血工具采血工具血液处理血液处理l抗凝血l真空采血管或其它容器内抗凝剂。采集的血液立即与抗凝剂充分混合，防止凝固l肝素：1%肝素毫升可抗凝5-10毫升血lEDTA：每毫升血加入20mgl枸缘酸钠：每毫升血加入3-5mgl血清l标记，室温静置l凝固后吸取自然析出的血清或经离心分离l分装，再贴上标签冷藏保存备检五、记录畜主时间皮厚增加(mm)牛号皮皱厚(mm) 操作者 皮皱厚(mm)备注记录卡记录卡健康养殖健康养殖奶业腾达奶业腾达
