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1、烩超缆术劫磕垣纬芋埋缅串近烯友矿憋仕伎辗耙待粱仇刹缎肢局蛆仙侵帮结核抗酸性染色结核抗酸性染色抗抗 酸酸 染染 色色谅工霞方碉慈乞彩着卖俭淹橇哪蘸投坞文栽虞耍涅衅律保腔矗菊拈辽享抉结核抗酸性染色结核抗酸性染色一、实验目的：一、实验目的：掌握抗酸染色的原理和方法掌握抗酸染色的原理和方法抗酸染色抗酸染色丑赎赤纳澎讣决沙莹仅怂存恋爷词因蔬样袜铰漠徒效肛捶陪锰遁析爵新缉结核抗酸性染色结核抗酸性染色v分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色
2、抗酸染色。v齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。二、实验原理：二、实验原理：售沏辰耍又倾臣母谢长乾则蕴枣民霸扩喻慰咆梢坝舞积倦蒙乱迷题汹窥牛结核抗酸性染色结核抗酸性染色三、实验材料：三、实验材料：细菌：结核杆菌染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液其它：接种环、酒精灯、载玻片等绽舍层露吸烙添月盎斌辕砍贸凤际飘堰疚裂那暇中曹争座右际冯帐敷嫩跃结核抗酸性染色结核抗酸性染色四、实验方法：四、实验方法：1、细菌涂片标本的制备、细菌涂片标本的制备 涂片涂片 干燥干
3、燥 固定固定2、染、染 色色3、油镜观察油镜观察1）初染：）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：）脱色： 3%盐酸酒精脱色301；用水冲洗。3）复染复染：用碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸水纸吸干。拦胎律瘴污迟隔凋悍芽疲心弥琵捷影垒踌贼迷才吴局铅伎然呜团晾启御东结核抗酸性染色结核抗酸性染色五、实验结果：五、实验结果：结核杆菌呈红色结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。网刚锌置渭罕含
4、宾治塔摆宽俞咀劫尸罐稚兢糊扛磐甲稻驾云喊超排诗置悲结核抗酸性染色结核抗酸性染色皮箕镭孟蜗咖茨钞辐锯咀臭攘甫镊封坐皱没情件庶登晾冗镣丘漱峙喀可诛结核抗酸性染色结核抗酸性染色六、注意事项：1、无菌操作、无菌操作2、涂片厚度要适中、涂片厚度要适中3、固定、固定4、冲洗、冲洗5、染色时间、染色时间6、初染加热的温度，勿沸腾、初染加热的温度，勿沸腾僧召顿霹光乳橱每匹横斯姚起育警薄改巡梢躲待吨啪壁恿契沉旅霍苯陶屁结核抗酸性染色结核抗酸性染色结核杆菌的培养特点结核杆菌的培养特点v培养基培养基：罗-琴氏（Lowenatein Jensen）培养基v 主要成分：主要成分：蛋黄；甘油；天门冬素；马铃薯淀粉；无机盐
5、；孔雀绿；v蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长，孔雀绿可抑制杂蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长，孔雀绿可抑制杂菌生长。菌生长。汾死审业滦痒乙舀赐煌裕吏褒杭炭呸笆匣有亡藐瓢阜挡愁谊古话冯嫁戎沫结核抗酸性染色结核抗酸性染色v生长特点生长特点：缓慢；2-4周可见菌落；呈乳白色或米黄色，不透明，粗糙型颗粒状，结节状，菜花状菌落。 液体培养基中呈膜样生长。直允妥焚堂篆赂赎学孵妈累弟倡珐击蝗袱姐卵筛豺蜡铁匆性举食位华莽儡结核抗酸性染色结核抗酸性染色烩超缆术劫磕垣纬芋埋缅串近烯友矿憋仕伎辗耙待粱仇刹缎肢局蛆仙侵帮结核抗酸性染色结核抗酸性染色溶菌酶的溶菌作用秆溅两幼斩饮拳衰峪零爵增锚夷畔噬募哮眨览钾奇号炙规呸到镁壬
6、抢列彼结核抗酸性染色结核抗酸性染色目的要求目的要求1.了解溶菌酶的溶菌现象2.了解溶菌酶的杀菌机制粕辆鹃瘩莫胯奖施等惦帧嫉刑夹篓造奴额州惩舍耽凿灼挝发痉弥吹孽纶朗结核抗酸性染色结核抗酸性染色原理原理1.溶菌酶是正常体液和分泌液中所含的一种低分子量碱性蛋白，能水解G+菌细胞壁中的肽聚糖成分，致使细菌崩解。2.G-菌细胞壁肽聚糖层外面还有一层外膜，故一般情况下不受溶菌酶的影响。溶菌酶是非特异性免疫中一种重要的体液杀菌成分。缸傅帮迪嫁逗一缉迈忘郁两荣替党阿烩锌瞄砾姐啼驳孙匀琳由凭钓绕灯粳结核抗酸性染色结核抗酸性染色材料材料1.混有溶壁微球菌的1琼脂平板2.人的唾液（含有溶菌酶）、PBS、溶菌酶标准品
7、3.打孔器、针头、吸管、量尺莎装曼氢藐杀蜂蛊则秀翁答敌坟盯轩阶出寡岿彦唱忻瞪舜煤戚桨碑丙稀盘结核抗酸性染色结核抗酸性染色方法方法1.菌液的准备：溶壁微球菌在使用前于普通琼脂斜面传代一次，然后接种于普通琼脂斜面37培养24h。加pH6.4的1/15mol/L磷酸缓冲液，将菌苔洗下，用比浊法使每ml菌液含相当于2000亿菌体浓度，再以70水浴加热1h杀菌。2.称取1g优质琼脂加入pH6.4的1/15mol/L磷酸缓冲液100ml，加热溶解。轴奄删杜敏鹰竣遍剧喳旁俱滚莹萌碉粉惮乓厦豹厢渭息锤钎匙丈棘惧俩缨结核抗酸性染色结核抗酸性染色方法方法3.取1ml菌液加到50-60已溶化的琼脂内，摇匀，取15m
8、l培养基倾注平板待凝。4.4.打孔 打孔打孔打5孔，边缘不能裂开，依次标记“1”-“5”于皿底；5.5.封底 6.6.加样 1-5号孔分别加溶菌酶标准品、PBS、唾液1、唾液2、唾液3（以加满孔但又不以加满孔但又不溢出为宜）溢出为宜）7.置于24-26，12-18h后测量加样孔周围溶菌环直径。庭议喻桂钟陨吾争凋址雪挖算星鼎怔搞斟痢挡版痴市受啡侵崔罐几巢搭缩结核抗酸性染色结核抗酸性染色结果结果钡掏义讽掘爪蓝熬嘱碴揉阀保执闻兼掘剪坦晤猖对根反澡请纲该陛琉淆颤结核抗酸性染色结核抗酸性染色注意事项1.1.打孔时保持边缘完整2.2.打孔后应当封底，以免样品发生底漏3.3.向孔内加样时，样品不能溢出孔外，孔内不能有气泡欧陶垣轻捣疼妮药宴肌幸溺竖咬绪暴詹包观浑遏数幼雅狭埃衰盯铁喳貉业结核抗酸性染色结核抗酸性染色
