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1、DNADNA的粗提取与鉴定实验的粗提取与鉴定实验一、一、实验原理实验原理：(1)DNA与蛋白质在不同浓度的与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同溶解规律溶解规律2mol/LNaCl溶液溶液0.14mol/LNaCl溶液溶液DNA_蛋白质蛋白质NaCl溶液物质的量浓度从溶液物质的量浓度从2mol/L逐渐降低的过程中，溶逐渐降低的过程中，溶解度逐渐解度逐渐。部分发生部分发生盐析沉淀盐析沉淀_溶解溶解析出析出增大增大溶解溶解(2)DNA不溶于不溶于，但是细胞中的某些蛋白质则溶于，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理可将酒精，利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离。与
2、蛋白质进一步分离。(3)DNA二苯胺二苯胺色。色。沸水浴加沸水浴加热蓝酒精酒精二、二、操作流程操作流程：材料的选取：选用材料的选取：选用含量相对较高的生物组织含量相对较高的生物组织DNA破碎破碎细胞胞(以以鸡血血为例例)：鸡血血细胞胞加加 用玻璃棒用玻璃棒搅拌拌用用纱布布过滤收集收集滤液液蒸蒸馏水水去除杂质：利用去除杂质：利用DNA在在中中溶解度不同，通过控制溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质溶液的浓度去除杂质。不同不同浓度的度的NaCl溶液溶液DNADNA的的析析出出：将将处理理后后的的溶溶液液过滤，加加入入与与滤液液体体积相等的、冷却的体相等的、冷却的体积分数分数为95%95%
3、的的 溶液溶液DNADNA的鉴定：在溶有的鉴定：在溶有DNADNA的溶液中加入二苯胺试剂，混的溶液中加入二苯胺试剂，混合合均均匀后将试管在沸水中加热匀后将试管在沸水中加热5 min5 min，溶液变成，溶液变成_酒精酒精蓝色色DNADNA的粗提取与鉴定实验中的的粗提取与鉴定实验中的“2 2、3 3、4 4”加蒸加蒸馏水馏水2次次加到鸡血细胞液中，使血细胞吸水涨破；加到鸡血细胞液中，使血细胞吸水涨破；加到含加到含DNA的的2mol/L的的NaCl溶液中，使溶液中，使NaCl溶液溶液的物质的量浓度下降到的物质的量浓度下降到0.14mol/L，使，使DNA析出析出用纱用纱布过布过滤滤3次次过滤血细胞
4、破裂液，得到含细胞核物质的滤液；过滤血细胞破裂液，得到含细胞核物质的滤液；滤取滤取0.14mol/L的的NaCl溶液中析出的溶液中析出的DNA(黏稠物黏稠物)；过滤溶有过滤溶有DNA的的2mol/L的的NaCl溶液溶液用用NaCl溶液溶液4次次加加2mol/L的的NaCl溶液，溶解提取的细胞核物质；溶液，溶解提取的细胞核物质；用用0.14mol/L的的NaCl溶液使溶液使DNA析出；析出；用用2mol/L的的NaCl溶液，溶解滤取的溶液，溶解滤取的DNA黏稠物；黏稠物；用用2mol/L的的NaCl溶液，溶解丝状物用于鉴定溶液，溶解丝状物用于鉴定DNA【例例1 1】下表是关于下表是关于DNADN
5、A粗提取与鉴定实验中所使用的材料、粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用，表述正确的是操作及其作用，表述正确的是( () )试剂试剂操作操作作用作用A A柠檬酸钠溶柠檬酸钠溶液液与鸡血混合与鸡血混合防止防止DNADNA凝固凝固B B蒸馏水蒸馏水与鸡血细胞混合与鸡血细胞混合保持细胞形状保持细胞形状C C蒸馏水蒸馏水加加入入溶溶解解有有DNADNA的的NaClNaCl中中析出析出DNADNA丝状物丝状物D D 冷却的酒精冷却的酒精 过滤后的过滤后的DNADNA加入其中加入其中产产生生特特定定的的颜颜色色反应反应C【例例2 2】下列操作中，对下列操作中，对DNADNA的提取量影响较大的是的提取量影响较大的是( () )使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，释放出使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，释放出DNADNA等核物等核物质质搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动在析出在析出DNADNA黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增多稠物不再增多在用酒精沉淀在用酒精沉淀DNADNA时，要使用冷酒精，时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却甚至再将混合液放入冰箱中冷却在在DNADNA的溶解和再的溶解和再溶解时，要充分搅拌溶解时，要充分搅拌A. A. B.B.C. C. D.D.C
