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1、实验动物遗传质量监测广东省实验动物监测所 实验动物遗传质量控制的主要内容n对生产过程进行控制,科学引种,繁殖和生产.n建立定期遗传监测制度, 检查是否发生遗传污染或遗传突变,监控各品系应具有的遗传特性. 名词解释n遗传概貌：一套标记基因的组合，可以将不同品系动物之间在遗传上明显区分开来。n近交系：经至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成 ，品系内所有的个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。 近交系动物的遗传特征1. 纯合性 mozygosity 检测中不应发现杂合体2. 同基因性 isogenicity 检测中同一近交系内不同个体间基因型一致。3. 品系独特性 individu
2、ality 每一个近交系品系的基因组成是独一无二的，不同于别的近交系。遗传检测常用方法遗传性状 常用方法质量性状 毛色基因测试法 生化标记检测法 免疫标记检测法, 皮肤移植法等 染色体带型 DNA fingerprinting ,RAPD,SNP数量性状态 下颌骨测定法,生物学特性监测法其他性状 我国近交系大小鼠遗传检测主要项目 GB规定近交系小鼠选择位于10条染色体上的13个生化位点,近交系大鼠选择位于3条染色体的9个生化作为遗传检测的生化标记.3.下颌骨测定法近交系大小鼠遗传检测的实施1.抽 样对基础群，凡在子代留有种鼠的双亲动物都应进行检测。对生产群，按表1要求从每个近交系中随机抽取成年
3、动物，雌雄各半。生产群中雌性种鼠数量抽样数目100只以下6只100只以上6% 新建立、新引进品系需全面检测新建立、新引进品系需全面检测生产群至少每年检测一次。生产群至少每年检测一次。 生化标记基因检测：常规方法皮肤移植 根据需要与可能，可选用其它方法：毛色基因测试、免疫标记基因检测、不颌骨测量法、染色体标记检测、DAN多态性检测等。 检测结果判断处理与标准遗传概貌完全一致 未发现遗传变异，遗传质量合格 有一个位点的标记基因与标准遗传概貌不一致 可疑增加检测位点数目和增加检测方法后重检，确实只有一个标记基因改变可命名为同源突变系两个或以上位点的标记基因与标准遗传概貌不一致 不合格 淘汰，重新引种
4、 生化标记基因检测方法n内容：以蛋白质及同工酶的电泳技术近交系动物进行遗传监测。n原理：蛋白质即酶由多个基因位点编码决定，每个遗传基因决定同工酶亚单位。因此一定酶的亚单位多肽链，就成为编码它的生化基因的标记。通过电泳技术分离不同蛋白质，再结合同功酶催化反应显色系统，从而得不同蛋白质的电泳图谱，达到检测不同品系动物遗传生化标记基因的目的。准备试剂准备试剂样品处理样品处理电泳检测电泳检测出出具具原原始始记记录录及及检测报告检测报告样品无害化处理样品无害化处理遗传检测操作流程图遗传检测操作流程图具体操作n样品：大小鼠血清、溶血素及肝肾匀浆n实验方法：醋酸纤维膜(板)电泳法n染色方法：异构蛋白用直接染
5、色法，同工酶用底物反应显色法。n用干净镊子从封口袋中夹出醋酸纤维硬膜（1）醋酸纤维膜的取用n将膜的光面向下，使膜浮在缓冲液面上。n缓冲液就会自膜的边缘逐渐渗透。n直至膜全部均匀润湿(2)醋酸纤维膜的浸润n用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。n将醋纤膜膜面向上，固定在加样板上，用微量加样器沾取样品均匀点样一到两次。将电泳液倒入电泳槽中，用滤纸在电泳槽的调节杆上搭好盐桥，将加好样的膜片架在盐桥上，正面朝下，加样端按电泳要求放置于正或负极。 醋酸纤维膜的电泳n接通电源，以恒定电压进行电泳。 5.醋酸纤维膜的染色、脱色n电泳完毕，将纤维膜按照显色液配方进行显色反应。n反应结束，参照GB规定标准遗传概貌进行判定。小鼠小鼠Es1生化位点检测生化位点检测小鼠Car2生化位点检测小鼠小鼠Hbb电泳结果电泳结果 大鼠Es4生化位点大鼠大鼠Es6,8,9生化位点生化位点
