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1、l概述概述l细胞凋亡过程与机制细胞凋亡过程与机制l细胞凋亡与疾病细胞凋亡与疾病l细胞凋亡的检测细胞凋亡的检测 第八章第八章 细胞凋亡细胞凋亡悉尼悉尼 布雷诺尔布雷诺尔罗伯特罗伯特 霍维茨霍维茨约翰约翰 苏尔斯顿苏尔斯顿 2002 2002年诺贝尔生理与医学奖获得者年诺贝尔生理与医学奖获得者年诺贝尔生理与医学奖获得者年诺贝尔生理与医学奖获得者 概述概述 一、一、一、一、细胞死亡的模式细胞死亡的模式细胞死亡的模式细胞死亡的模式 Necrosis = Necrosis = 细胞病理性死亡细胞病理性死亡 Apoptosis = Apoptosis = 细胞自发性死亡细胞自发性死亡坏死凋亡apoptos
2、isConcept of apoptosis: 体内外生理或病理因素触发细胞内死亡程序细胞死亡细胞坏死与细胞凋亡的区别细胞坏死与细胞凋亡的区别 细胞凋亡与细胞坏死的区别细胞凋亡与细胞坏死的区别特征特征 细胞凋亡细胞凋亡 细胞坏死细胞坏死诱导因素诱导因素 生理及弱刺激生理及弱刺激 强烈刺激强烈刺激受累范围受累范围 单个细胞丢失单个细胞丢失 成群细胞死亡成群细胞死亡膜完整性膜完整性 保持到晚期保持到晚期 早期即丧失早期即丧失细胞体积细胞体积 减小、固缩减小、固缩 增大肿胀增大肿胀染色质染色质 凝聚成半月形凝聚成半月形 稀疏成网状稀疏成网状细胞器细胞器 无明显变化无明显变化 肿张破坏肿张破坏溶酶体溶
3、酶体 保持完整保持完整 破坏外溢破坏外溢细胞形状细胞形状 形成凋亡小体形成凋亡小体 破裂成碎片破裂成碎片基因组基因组DNA DNA 有控降解有控降解 随机降解随机降解大分子合成大分子合成 一般需要一般需要 不需要不需要基因调控基因调控 有有 无无后果后果 不引起炎症反应不引起炎症反应 引起炎症反应引起炎症反应意义意义 生理死亡方式生理死亡方式 病理死亡方式病理死亡方式凋亡的生理学意义凋亡的生理学意义凋亡的生理学意义凋亡的生理学意义: : : : 胚胎发育期去除某些细胞胚胎发育期去除某些细胞维持内环境稳定维持内环境稳定 增殖细胞群中细胞去除、去除潜在有害的自身反应性淋巴细胞增殖细胞群中细胞去除、
4、去除潜在有害的自身反应性淋巴细胞参与防御反应参与防御反应 细胞毒细胞毒T T细胞细胞 凋亡过多或不足疾病： 肿瘤、艾滋病、神经变性性疾病、缺血性损伤 二二 、凋亡时细胞的主要变化凋亡时细胞的主要变化 1. 形态学改变形态学改变 （The morphologic characteristics of apoptosis） 凋亡细胞（实体细胞）与周围细胞脱接触凋亡细胞（实体细胞）与周围细胞脱接触 胞膜空泡化（胞膜空泡化（BlebbingBlebbing） 细胞固缩（细胞固缩（CondensationCondensation）、核固缩和发芽）、核固缩和发芽 凋亡小体（凋亡小体（Apoptotic s
5、mall bodyApoptotic small body）细细 胞胞 凋凋 亡亡(扫描电镜)正常细胞正常细胞(扫描电镜) (透射电镜) 凋亡细胞凋亡细胞凋亡小体凋亡小体DNA片断化caspase激活灭活凋亡抑制物水解活性蛋白水解结构蛋白Ca 2+ /Mg 2+ Zn 2+ 核酸内切酶激活核酸内切酶激活2. 生化改变生化改变（The biochemical characteristics of apoptosis）钙超载钙超载钙超载钙超载 DNADNA片段化片段化片段化片段化（DNA ladding patternDNA ladding pattern） 核酸内切酶激活核酸内切酶激活核酸内切酶
6、激活核酸内切酶激活 核小体连接区核小体连接区核小体连接区核小体连接区DNADNADNADNA降解降解降解降解180180180180200bp200bp200bp200bp整数倍的整数倍的整数倍的整数倍的DNADNADNADNA片段片段片段片段 细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻凋亡的过程及机制凋亡的过程及机制凋亡诱导因素凋亡诱导因素 死亡信号死亡信号凋亡相关基因激活凋亡相关基因激活 CaspasesCaspases激活激活、 DNaseDNase激活激活凋亡的执行凋亡的执行 巨噬细胞吞噬分解凋亡细胞巨噬细胞吞噬分解凋亡细胞巨噬细胞吞噬分解
7、凋亡细胞巨噬细胞吞噬分解凋亡细胞凋亡细胞清除凋亡细胞清除 凋亡的机制凋亡的机制细胞凋亡的两条通路：死亡受体途径、线粒体途径细胞凋亡的两条通路：死亡受体途径、线粒体途径（1）死亡受体途径死亡受体途径 （death receptor pathwaydeath receptor pathway）l死亡受体死亡受体（death receptor, DR） 肿瘤坏死因子受体超家族成员，跨膜蛋白，与相应配体结合传递细胞信号 Fas(CD95), TNFR1, RAIL-R2/DR5 参与死亡受体信号转导的接头蛋白： 死亡结构域蛋白死亡结构域蛋白（ death domain protein, DD）lTRA
8、DD：TNF受体相关死亡结构域蛋白 TNF + TNFR1（死亡结构域）+ TRADD 细胞凋亡lFADD：Fas相关死亡结构域蛋白 FasL + Fas （死亡结构域） +FADD 细胞凋亡 FasL + Fas 凋亡诱导复合物（DISC） FADD（C端DD结构域与Fas胞内段结合 N端DED结构域与无活性caspase8酶原交联）l caspase8酶原聚集到复合物上l 一系列caspase激活l 细胞凋亡 FADDFADD（Fas-associated death domainFas-associated death domain）DDDD（death domaindeath doma
9、in）DED DED （death effector domaindeath effector domain）FSAL FADD FADDPro-caspase-8Pro-caspase-8Caspase-8Caspase-8Caspase-3Caspase-3Pro-caspase-3Pro-caspase-3细细胞胞凋凋亡亡FasDEDDEDDEDDEDDDDD（2）线粒体途径l线粒体释放细胞色素C 细胞凋亡 PT孔开放线粒体跨膜电位，细胞色素C释放 促凋亡蛋白Bax促PT孔开放 抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl抑制PT孔开放l细胞色素C + Apaf-1 + caspase9前体凋亡体
10、凋亡体 召集并激活caspase3 细胞凋亡 Apaf-1：凋亡蛋白酶活化因子膜通透性膜通透性膜通透性膜通透性 、线粒体肿胀、线粒体肿胀、线粒体肿胀、线粒体肿胀、 mmApaf-1Apaf-1活化活化Cyt.cCyt.c 线粒体途径线粒体途径 （ mitochondrial pathwaymitochondrial pathway） CaCa2+2+NONO缺氧缺氧缺氧缺氧活性氧活性氧活性氧活性氧应激应激应激应激PTPT开放开放开放开放Cyt.cCyt.c+Pro-caspase-9Pro-caspase-9Caspase-9Caspase-9ATPATPApaf-1Apaf-1+ +Apaf
11、-1Apaf-1活化活化Cyt.cCyt.cCARDCARDApoptosomeApoptosome AIF AIFcaspase-independent apoptosisPro-Caspase-3Pro-Caspase-3凋凋亡亡Caspase-3Caspase-3BidCaspase-8Caspase-8 Caspase依赖的细胞凋亡（Caspase-dependent apoptosis）lCaspase特点： -以酶原的形式存在 -酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性 -水解天冬氨酸C端肽键 故称 Caspases (Cysteine，aspartic acid，protease) Ca
12、spase家族的分类l凋亡启动亚类凋亡启动亚类Caspase蛋白酶蛋白酶： Caspase8， Caspase 9，Caspase10l凋亡效应亚类凋亡效应亚类Caspase蛋白酶蛋白酶： Caspase3， Caspase6， Caspase7lICE(interlukin-1converting enzyme)亚类Caspase蛋白酶：参与炎症反应 Caspase1，Caspase4， Caspase5， Caspase11, Caspase12， Caspase13， Caspase14 CaspaseCaspase通路分类通路分类通路分类通路分类 启动亚类（启动亚类（Caspase -
13、8 , -9, -10Caspase -8 , -9, -10）效应亚类（效应亚类（Caspase -3, -6, -7Caspase -3, -6, -7） Caspase Caspase 死亡受体途径死亡受体途径线粒体途径线粒体途径大小亚基结合（二聚体） caspase激激活（四聚体） CaspaseCaspase激活形式激活形式激活形式激活形式 Pro-caspase： NH2末端结构域 、20KD亚基、 10KD亚基 剪切lCaspaseCaspase可激活可激活CADCAD (caspase-activated DNase)核酸酶核酸酶，该酶在核小体的连接区将DNA切断，形成约200
14、bp整倍数的核酸片段l正常情况下， CAD与抑制物ICAD-DFF-45结合，存在于胞质中，无活性lCaspase活化后降解抑制物ICAD， CAD激活并入核降解DNA使其片段化Pro-caspase-2Pro-caspase-2caspase-2caspase-2Pro-caspase-6Pro-caspase-6Caspase-6Caspase-6Pro-caspase-7Pro-caspase-7caspase-7caspase-7Pro-caspase-9Pro-caspase-9ICADICAD（抑制性（抑制性 CADCAD）CADCAD（ caspasecaspase活化活化DNA
15、DNA酶）酶）CDACDA进入细胞核内降解进入细胞核内降解DNADNA细胞凋亡细胞凋亡细胞凋亡细胞凋亡剪切细胞内结构蛋白剪切细胞内结构蛋白剪切细胞内结构蛋白剪切细胞内结构蛋白caspase-9caspase-9Effector caspaseEffector caspaseCaspase-3Caspase-3Pro-caspase-3Pro-caspase-3CaspaseCaspase的作用的作用 CaspaseCaspase非依赖的细胞凋亡非依赖的细胞凋亡（Caspase-independent apoptosis） 凋亡诱导因子（凋亡诱导因子（AIFAIF） 线粒体蛋白线粒体蛋白AIFA
16、IF释放到胞质内与抑制凋亡的因释放到胞质内与抑制凋亡的因 子结合，从而促发凋亡子结合，从而促发凋亡 钙超载钙超载钙超载引起凋亡机制钙超载引起凋亡机制钙超载引起凋亡机制钙超载引起凋亡机制胞浆胞浆CaCa2+2+ 激活核转录因子，加速凋亡相关基因的转录激活核转录因子，加速凋亡相关基因的转录 激活激活CaCa2+2+/Mg/Mg2+2+依赖的核酸内切酶，降解依赖的核酸内切酶，降解DNADNA链链 激活谷氨酰胺转移酶，使细胞骨架分解激活谷氨酰胺转移酶，使细胞骨架分解凋亡小体凋亡小体细胞凋亡细胞凋亡细胞凋亡的调控细胞凋亡的调控l凋亡相关因素凋亡相关因素l凋亡信号的转导凋亡信号的转导l凋亡相关基因凋亡相关
17、基因 （The mainly induced factors of apoptosisThe mainly induced factors of apoptosis） TableTable：Influence factors of apoptosisInfluence factors of apoptosis 诱导性因素（诱导性因素（InducersInducers） 抑制性因素（抑制性因素（InhibitorsInhibitors）理化因素理化因素 射线、高温、强酸、射线、高温、强酸、 细胞因子细胞因子 IL-2IL-2、NGFNGF等等 强碱、应激、抗癌药强碱、应激、抗癌药 激素激素 AC
18、THACTH、睾丸酮、雌激素、睾丸酮、雌激素激素和因子激素和因子 糖皮质激素、糖皮质激素、TNF TNF 其它其它 ZnZn2+2+、苯巴比妥、半胱氨、苯巴比妥、半胱氨免疫性因素免疫性因素 CTLCTL分泌的粒酶分泌的粒酶 酸蛋白酶抑制剂、酸蛋白酶抑制剂、EBVEBV、病原体因素病原体因素 HIVHIV、HCV HCV 牛痘、牛痘、病毒、中性氨基酸病毒、中性氨基酸 1、影响细胞凋亡的因素2、凋亡信号转导的特点、凋亡信号转导的特点多样性：多样性：不同种类细胞有不同的信号转导系统不同种类细胞有不同的信号转导系统偶联性：偶联性：死亡信号转导系统与细胞增殖、分化过程死亡信号转导系统与细胞增殖、分化过程
19、 中的信号转导系统在一些环节上交叉、偶联中的信号转导系统在一些环节上交叉、偶联同一性：同一性：不同凋亡诱导因素可通过同一信号转导系不同凋亡诱导因素可通过同一信号转导系 统引起细胞凋亡统引起细胞凋亡多途性：多途性：同一凋亡诱导因素可经过多条信号途径触同一凋亡诱导因素可经过多条信号途径触 发细胞凋亡发细胞凋亡3、细胞凋亡的调控基因、细胞凋亡的调控基因 （Regulated mechanism of apoptosisRegulated mechanism of apoptosis）表表表表 1 1 细胞凋亡的调控基因细胞凋亡的调控基因细胞凋亡的调控基因细胞凋亡的调控基因 功能功能 基因基因抑制凋亡
20、基因抑制凋亡基因 Bcl-2 Bcl-XBcl-2 Bcl-XL L、A1/Bfl-1A1/Bfl-1、Bcl-wBcl-w、Bcl-GBcl-G和和Mcl-1Mcl-1等等促凋亡基因促凋亡基因 P53P53、BaxBax、BadBad、BakBak、BidBid、BimBim、BikBik、BokBok、 Bcl-BBcl-B、Bcl-XsBcl-Xs、KrkKrk、MtdMtd、Nip3Nip3、NixNix、NoxaNoxa等等双向调控基因双向调控基因 c-mycc-myc、BelxBelx Bcl-2Bcl-2基因基因 （B cell lymphoma/leukemia-2B cell
21、 lymphoma/leukemia-2）l广泛存在于造血细胞、上皮细胞、淋巴细胞、神经细胞及多种瘤细胞 Bcl-2家族已发现15个成员，可分为3个亚族： Bcl-2Bcl-2亚家族亚家族：抑制细胞凋亡 BaxBax亚家族：亚家族：促进细胞凋亡 BH3BH3亚家族：亚家族：促进细胞凋亡Bcl-2Bcl-2抑制凋亡机制：抑制凋亡机制： 抑制线粒体抑制线粒体PTPT孔开放，孔开放，Cyt.c Cyt.c 、AIFAIF释放释放 结合和灭活结合和灭活ApafApaf-1-1，阻断，阻断caspase-9caspase-9活化活化 特异性结合细胞色素特异性结合细胞色素C C 维持细胞钙稳态 c-myc
22、, bcl-x c-myc, bcl-x 促进增殖lc-myc(转录调节因子) 诱导凋亡 Bcl-XL 抑制凋亡lBcl-x Bcl-Xs 促进凋亡GF p53促凋亡机制：促凋亡机制： - 与与Bcl-2Bcl-2基因相互作用，下调基因相互作用，下调 Bcl-2Bcl-2的表达的表达 - - 诱导线粒体内凋亡的相关蛋白（诱导线粒体内凋亡的相关蛋白（BaxBax等）表等）表达，并触发细胞色素达，并触发细胞色素C C释放和释放和caspasecaspase活化活化 - - 诱导死亡受体诱导死亡受体FasFas表达表达 C-mycC-myc双向调控凋亡双向调控凋亡 调控细胞周期基因，编码的蛋白是调控
23、细胞周期基因，编码的蛋白是DNADNA结合蛋白，结合蛋白，调控基因转录。调控基因转录。 GFGF充足时主要激活介导细胞增殖的基因充足时主要激活介导细胞增殖的基因 GFGF不足时激活凋亡基因不足时激活凋亡基因 凋亡与疾病凋亡与疾病（Diseases associated to apoptosisDiseases associated to apoptosis） 表：表：表：表： 与细胞凋亡异常相关的疾病与细胞凋亡异常相关的疾病与细胞凋亡异常相关的疾病与细胞凋亡异常相关的疾病 凋亡不足凋亡不足 凋亡过度凋亡过度肿瘤肿瘤 肝癌、恶性血液肿瘤、乳腺癌肝癌、恶性血液肿瘤、乳腺癌 发育异常发育异常 气管气
24、管- -食管瘘、房（室）间隙缺食管瘘、房（室）间隙缺 、膀胱癌、肺癌、胶质瘤、前、膀胱癌、肺癌、胶质瘤、前 损、唇（腭）裂、短肢畸形、损、唇（腭）裂、短肢畸形、 列腺癌等列腺癌等 尿道下裂以及多囊肾等尿道下裂以及多囊肾等发育异常发育异常 先天性消化道、胆道、肛门狭先天性消化道、胆道、肛门狭 CNS AlzheimerCNS Alzheimer病、病、Parkinson Parkinson 病、病、 窄或闭锁、动脉导管未闭、两窄或闭锁、动脉导管未闭、两 肌萎缩性侧索硬化症、色素性肌萎缩性侧索硬化症、色素性 性畸形、甲状舌骨囊肿等性畸形、甲状舌骨囊肿等 视网膜病，脊肌肉萎缩、早老视网膜病，脊肌肉萎
25、缩、早老免疫系统免疫系统 系统性红斑狼疮、糖尿病、类系统性红斑狼疮、糖尿病、类 性痴呆性痴呆 风湿性关节炎、桥本甲状腺炎风湿性关节炎、桥本甲状腺炎 免疫系统免疫系统 免疫缺陷病、免疫缺陷病、AIDS AIDS 、多发性的硬化症等、多发性的硬化症等（一）细胞凋亡不足（一）细胞凋亡不足（一）细胞凋亡不足（一）细胞凋亡不足（Apoptosis inhibitionApoptosis inhibition）1. 1. 肿瘤（肿瘤（肿瘤（肿瘤（TumorTumor） bcl-2bcl-2bcl-2bcl-2基因过表达基因过表达基因过表达基因过表达85%85%滤泡状滤泡状和和20%20%弥漫性弥漫性B B
26、细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 染色体染色体 t t（14;1814;18）易位）易位 IgHIgH基因与基因与bcl-2bcl-2基因拼接基因拼接 bcl-2bcl-2基因活化基因活化 细胞凋亡速率细胞凋亡速率 肿瘤发生肿瘤发生 （乳腺癌、肝癌、膀胱癌、肺癌、胶质瘤等也存在（乳腺癌、肝癌、膀胱癌、肺癌、胶质瘤等也存在Bcl-2Bcl-2高表达）高表达） p p p p53535353基因缺失或突变基因缺失或突变基因缺失或突变基因缺失或突变 p53p53的稳定性、细胞内定位或（和）活性异常的稳定性、细胞内定位或（和）活性异常 p p5353表达或功能缺陷表达或功能缺陷 细胞凋亡率细胞凋亡率 肿瘤发生肿瘤
27、发生 病毒的癌基因病毒的癌基因HBVHBV编编码码的的HBHBX X是是Caspase-3Caspase-3的的强强效效抑抑制制物物，与与肝肝癌癌发发生生密密切相关切相关 异常融合蛋白异常融合蛋白异常融合蛋白异常融合蛋白慢性髓细胞性白血病（慢性髓细胞性白血病（CMLCML） 染色体易位染色体易位 t (9t (9；22)22) Bcr-abl Bcr-abl融合基因（融合基因（p210p210 Bcr-abl Bcr-abl蛋白质）蛋白质） NF-NF- B B活化、活化、细胞凋亡速率细胞凋亡速率 髓系祖细胞的克隆扩增髓系祖细胞的克隆扩增 肿瘤发生肿瘤发生 2 2自身免疫病（自身免疫病（自身免
28、疫病（自身免疫病（Autoimmune diseasesAutoimmune diseases） 针针对对自自身身抗抗原原的的免免疫疫细细胞胞未未被被及及时时清清除除，机机体体产产生生针针对对自自身身抗抗原原的的体体液液免免疫疫和和细细胞胞免免疫疫，导导致器官组织损伤。致器官组织损伤。（二）细胞凋亡过度（二）细胞凋亡过度（二）细胞凋亡过度（二）细胞凋亡过度（Apoptosis excessApoptosis excessApoptosis excessApoptosis excess）1.1.心肌缺血与缺血心肌缺血与缺血- -再灌注损伤再灌注损伤特点特点缺血早期以凋亡为主，晚期以细胞坏死为主。
29、缺血早期以凋亡为主，晚期以细胞坏死为主。在梗死灶的中心以坏死为主，梗死灶周边以凋亡为主；在梗死灶的中心以坏死为主，梗死灶周边以凋亡为主；轻度缺血以凋亡为主，重度缺血以坏死为主；轻度缺血以凋亡为主，重度缺血以坏死为主；机制机制氧化应激氧化应激FasFas通路通路p53p53基因转录增加基因转录增加细胞凋亡在疾病防治中的意义细胞凋亡在疾病防治中的意义 合理利用凋亡相关因素合理利用凋亡相关因素1.1.诱导靶细胞凋亡诱导靶细胞凋亡 放疗、化疗放疗、化疗 高热、高温高热、高温2.2.减少细胞凋亡减少细胞凋亡 ： NGFNGF、促生长因子、抗氧化剂、促生长因子、抗氧化剂抑制抑制Bcl-2Bcl-2抗凋亡作
30、用抗凋亡作用促进促凋亡基因作用促进促凋亡基因作用增强增强P53P53促凋亡作用促凋亡作用 干预凋亡信号转导干预凋亡信号转导 调节凋亡相关基因调节凋亡相关基因 控制凋亡相关酶学机制控制凋亡相关酶学机制 防止线粒体跨膜电位的下降防止线粒体跨膜电位的下降 细胞凋亡的检测细胞凋亡的检测 1、细胞凋亡的形态学及流式细胞术检测、细胞凋亡的形态学及流式细胞术检测 2 2、磷脂酰丝氨酸外翻分析（、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin VAnnexin V法）法） 3 3、线粒体膜势能（、线粒体膜势能（mtmt）的检测）的检测 4 4、DNADNA片断化检测片断化检测 5 5、TUNELTUNEL法法 6 6、
31、Caspase-3Caspase-3活性的检测活性的检测 7 7、凋亡相关蛋白、凋亡相关蛋白TFAR19TFAR19的表达和细胞定位分析的表达和细胞定位分析 1、细胞凋亡的形态学检测细胞凋亡的形态学检测光学显微镜和倒置显微镜光学显微镜和倒置显微镜 未染色细胞：凋亡细胞V变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，晚期可见凋亡小体。染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色、苏木精染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，呈新月状附在核膜周围。荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有：HO ,Hoechst 3
32、3342;HO, Hoechst 33258; DAPI。 电子显微镜观察电子显微镜观察Nuclear morphological changes of HeLa cells in apoptosis process （488nm 400）电镜观察电镜观察 凋亡细胞体积变小，胞质浓缩。凋亡期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多空泡结构。IIa染色质高度凝集、边缘化。凋亡晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。 流式细胞术检测：流式细胞术检测：2 2、磷脂酰丝氨酸外翻分析（磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin VAnnexin V法）法）Phosphatidylserine(PS) Phosphat
33、idylserine(PS) 正常位于细胞膜的内侧，在凋亡早期从细胞膜的内侧翻转到膜表面Annexin-VAnnexin-V： Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、R-PE）标记后作为探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。2、磷脂酰丝氨酸外翻分析（、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）法）Apoptotic HeLa cells were stained with FITC-AnnexinV + PI3、线粒体膜势能（线粒体膜势能（mtmt）的检测）的检测 线线粒粒体体荧荧光光染染料料：
34、Rhodamine 123、DiOC6（3）、JC-1、TMRM等对线粒体膜电位非常敏感，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。4 4、DNADNA片段化分析片段化分析 细胞凋亡时染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成180200bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。5、TUNEL法法6 6、CaspaseCaspase活性检测活性检测7 7、凋亡相关蛋白、凋亡相关蛋白TFAR19TFAR19蛋白的表达蛋白的表达 和细胞定位分析和细胞定位分析 凋亡早期TFAR19表达并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时间，在凋亡小体中仍然可见。 利用荧光素（FITC）标记的TFAR19单克隆抗体为探针进行TFAR19蛋白的细胞定位分析 Double staining analysis of nuclear localization ofTFAR19 in K562 andHeLa cells treated with VP16
