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1、 菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物, ,是我国的传统名花和世界四大切花( (月季、康乃馨、菊花、唐菖蒲) )之一。 长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖方法进行繁殖 但是传统的繁殖方法易受环境影响, ,繁殖周期长, ,随着市场需 求的急剧增加, ,已经不能满足市场日益发展的需要。 植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度快的特点, ,可以用较短的时间和较少的空间生产出大量的试管苗课题课题1 菊花的组织培养菊花的组织培养课题课题2 月季的花药培养月季的花药培养课题课题1 菊花的组织培养菊花的组织培养一、植物组织培养概念关键词：关键词： 外植体、脱分化、再分化、愈伤组织外植体、脱分化、再分化、愈伤组
2、织 在在无菌无菌和和人工控制人工控制条件下，将离体的植条件下，将离体的植物物器官、组织、细胞器官、组织、细胞，培养在人工配置的，培养在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植完整的植株株。脱分化：让已经分化的细胞，经过诱导后，脱分化：让已经分化的细胞，经过诱导后， 失去其特有的结构和功能而转变成未分失去其特有的结构和功能而转变成未分 化细胞的过程。化细胞的过程。再分化：脱分化的细胞，在一定的条件下，再分化：脱分化的细胞，在一定的条件下， 又重新分化成各种特异性的组织细胞又重新分化成各种特异
3、性的组织细胞 的过程。的过程。外植体：离体的植物器官、组织或细胞。外植体：离体的植物器官、组织或细胞。愈伤组织：细胞排列疏松、无规则、高度愈伤组织：细胞排列疏松、无规则、高度 液泡化的无定形的薄壁细胞。液泡化的无定形的薄壁细胞。二、植物组织培养的理论基础细胞全能性概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。表达条件：离体条件 无菌操作 适宜物质的诱导和调节（植物激素） 适宜的营养物质 温度、酸碱度、光照等条件 的控制 全能性的比较: : 受精卵受精卵 生殖细胞生殖细胞 体细胞体细胞三、三、植物组织培养过程植物组织培养过程:
4、 :离离离离体体体体组组组组织织织织或或或或细细细细胞胞胞胞植植植植物物物物体体体体脱分化脱分化脱分化脱分化细胞分细胞分细胞分细胞分裂素裂素裂素裂素生长素生长素生长素生长素愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织芽芽芽芽根根根根细胞分裂细胞分裂细胞分裂细胞分裂素素素素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂细胞分裂细胞分裂细胞分裂素素素素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素有利于根的分化有利于根的分化有利于根的分化有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化有
5、利于芽的分化，抑制根的分化促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长4pH、温度、光照pH控制在5.8左右温度控制在1822每日用日光灯照射12h六六菊花的组织培养菊花的组织培养（一）制备一）制备一）制备一）制备MSMSMSMS固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基（二）外植体消毒（二）外植体消毒（三）接种（三）接种（四）培养（四）培养（五）移栽（五）移栽（六）栽培（六）栽培（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基MSMSMSMS培养基包括培养基包括培养基包括培养基包括20202020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一
6、般使用多种营养成分，实验室一般使用4 4 4 4保存配制好的培养基保存配制好的培养基保存配制好的培养基保存配制好的培养基母液母液母液母液来制备来制备来制备来制备1 1、配制各种母液、配制各种母液无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩10101010倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩100100100100倍，常温保存倍，常温保存倍，常温保存倍，常温保存激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可
7、按1mg/ml1mg/ml1mg/ml1mg/ml的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量倍数，计算用量倍数，计算用量倍数，计算用量2 2、配制培养基、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml 配制培养液配制培养液 调调PHPH培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，由于菊花的茎段的
8、组织培养比较容易，因此不必添加植物激素因此不必添加植物激素3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌压蒸汽灭菌Page 251 1 1 1、选材：、选材：、选材：、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒（二）外植体消毒2 2 2 2、消毒、消毒、消毒、消毒流水冲洗流水冲洗流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷
9、轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min20min20min20min左右左右左右左右 酒精处理酒精处理酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为分数为分数为分数为70707070的酒精中摇动的酒精中摇动的酒精中摇动的酒精中摇动2 2 2 23 3 3 3次，持续次，持续次，持续次，持续6 6 6 67s7s7s7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗立即将外植体取出，在无菌
10、水中清洗立即将外植体取出，在无菌水中清洗立即将外植体取出，在无菌水中清洗 消毒液处理消毒液处理消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为入质量分数为入质量分数为入质量分数为0.10.10.10.1的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中1 1 1 12min2min2min2min，取出后在无菌水中至少清洗取出后在无菌水中至少清洗取出后在无菌水中至少清洗取出后在无菌水中至少清洗3 3 3 3次，漂净次，漂净次，漂净次，漂净
11、消毒液消毒液消毒液消毒液（三）接种（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用消毒是至关重要的。用消毒是至关重要的。用消毒是至关重要的。用70707070的酒精喷雾使空气消的酒精喷雾使空气消的酒精喷雾使空气消的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20202020分钟分钟分钟分钟1 1、接种室消毒、
12、接种室消毒2 2、无菌操作要求、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种4 4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子
13、需放入体积分数为75757575的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种一遍，冷却后再接种一遍，冷却后再接种一遍，冷却后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 3 3 34 4 4 4块，
14、菊的茎块，菊的茎块，菊的茎块，菊的茎或叶或叶或叶或叶6 6 6 68 8 8 8块，也不要太少，以充分利用培养基中的块，也不要太少，以充分利用培养基中的块，也不要太少，以充分利用培养基中的块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件营养成分和光照条件营养成分和光照条件营养成分和光照条件插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分入培养基利于吸收水分和养分入培养基利于吸收水分和养分入培养基利于吸收水分和养分正常苗正常苗污染苗污染苗
15、1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径思考：你打算做几组重复？你打算思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染有被杂菌污染。（四）培养（四）培
16、养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒间应定期消毒培养温度控制在培养温度控制在18-2218-22每日用日光灯光照每日用日光灯光照12h12h（五）移栽（五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间3 3、移栽、移栽幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中（六）栽培（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，情况，适时浇水、施肥，直至开花适时浇水、施肥，直至开花三、课题延伸三、课题延伸1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养也容易进行组织培养2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
