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1、消毒灭菌与病原微生物消毒灭菌与病原微生物实验室生物实验室生物安全安全第一节 消毒灭菌的常用术语n消毒(disinfection) 利用理化因素杀死物体或环境中病原微利用理化因素杀死物体或环境中病原微生物的措施。并生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物细菌或非病原微生物n灭菌(sterilization) 利用理化因素杀死物体上利用理化因素杀死物体上所有微生物所有微生物的的过程，包括芽胞。过程，包括芽胞。n防腐(antisepsis)：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法n n清洁（清洁（清洁（清洁（cleaningcleaning）：是指通过除去尘埃和一切污是指通
2、过除去尘埃和一切污是指通过除去尘埃和一切污是指通过除去尘埃和一切污 秽以减少微生物数量的过程。秽以减少微生物数量的过程。秽以减少微生物数量的过程。秽以减少微生物数量的过程。n无菌(asepsis) 不存在任何活菌不存在任何活菌n无菌操作（aseptic technique)：防止细菌进入人体或其他物：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术品的操作技术第一节第一节 消毒灭菌的方法消毒灭菌的方法一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法常用的有:热力、紫外线、辐射、超声波、滤过干燥低温最重要的是热力二、化学消毒灭菌法 热力灭菌法（一）干热灭菌（一）干热灭菌焚烧、烧灼、焚烧、烧灼、 红外线红外线干烤（干烤（
3、160170160170/2h/2h）（二）湿热灭菌（二）湿热灭菌巴氏消毒法巴氏消毒法pasteurizationpasteurization煮沸法煮沸法 30 30分钟分钟流动蒸气灭菌法流动蒸气灭菌法间歇蒸气灭菌法间歇蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法 121121,15,15个大气压个大气压,20,20分钟分钟同一温度下,湿热比干热效果好用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。6230min 或72 30sec2.影响湿热灭菌的因素(了解)n(1)微生物因素:n(2)温度与作用时间:n(3)pH值的影响:n
4、(4)介质的性质:n辐射杀菌法 1、电离辐射 X、射线 原理:通过产生OH-、O2等活性游离基进行杀菌；通过破坏DNA的结构导致菌体死亡 2、非电离辐射 （1）紫外线 200300nm 杀菌原理：导致DNA分子构型改变，导致DNA复制出现差错n用途与缺陷 只用于空气和物品表面的消毒，用时注意防护（2）日光 能杀死大部分的微生物（3）微波 常用于对非金属器械的消毒滤过除菌法n1、贝克菲滤器 n2、蔡氏滤器 n3、玻璃滤器 n4、膜滤器 孔径 0.22um-0.45um除菌25-100nm可去除病毒空气过滤器:无菌棉花、活性炭及细玻璃纤维等可对空气进行过滤除菌2007-5-26 9 n超声波消毒法
5、原理：空穴效应 干燥与低温抑菌法n抑菌和灭菌n常用冷冻法贮藏菌种要注意:迅速冷冻加入冷冻保护剂一般-20-70度冷冻真空干燥保存菌种冷冻真空干燥保存菌种滤器和层流室滤器和层流室化学消毒灭菌法(外用)n常用消毒剂的杀菌机制n使菌体蛋白变性或凝固n干扰微生物酶系统和影响其代谢n损伤细胞壁、细胞膜二、化学消毒灭菌法二、化学消毒灭菌法（一）（一）高效消毒剂高效消毒剂 （high-level disinfectants） 1 1. .含氯消毒剂含氯消毒剂；2 2. .过氧化物消毒剂过氧化物消毒剂； 3 3. .醛类消毒剂醛类消毒剂；4 4. .环氧乙烷环氧乙烷（二）（二）中效消毒剂中效消毒剂 （inte
6、rmediate-level disinfectants） 1 1. .含碘消毒剂含碘消毒剂；2 2. .醇类消毒剂醇类消毒剂（三）（三）低效消毒剂低效消毒剂 （low-level disinfectants） 1 1. .季铵盐类季铵盐类；2 2. .氯已定氯已定；3 3. .高锰酸钾高锰酸钾 固体二氧化氯消毒剂固体二氧化氯消毒剂消毒剂的主要类型及应用n重金属盐类 1%硝酸银n氧化剂 0.1% 高锰酸钾、3%过氧化氢n酚 石炭酸n醇类 70-75%的乙醇n醛类 37%-40%福尔马林 n卤素类 0.2ppm-0.5ppm氯,2.0%-2.5%碘酒n酸碱类 15%-25%生石灰、50%醋酸蒸发
7、n表面活性剂 0.1%新洁尔灭n染料菌 2%-4%龙胆紫n烷化剂 50mg/L环氧乙烷n医学上常用消毒剂类型作用机制及种类类别类别作用机制作用机制常用种类常用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤 石炭酸醇类蛋白变性乙醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸钾、过氧乙酸、碘酒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤 新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫酸碱类破坏膜、壁，蛋白凝固 醋酸、生石灰烷化剂醛类蛋白质、核酸烷基化与氨基结合,蛋白变性环氧乙烷甲醛、戊二醛p40第三节第三节 消毒灭菌的运用消毒灭菌的运用（一）（一）高危器械物品高危器械物品 用时需进入无菌组织用时需进入无菌组织用时需进入无
8、菌组织用时需进入无菌组织 的物品。所有这些物品都应该灭菌。的物品。所有这些物品都应该灭菌。的物品。所有这些物品都应该灭菌。的物品。所有这些物品都应该灭菌。 （二）（二）中危器械物品中危器械物品 用时不进入无菌组织用时不进入无菌组织用时不进入无菌组织用时不进入无菌组织 但接触黏膜的器械。采用消毒即可。但接触黏膜的器械。采用消毒即可。但接触黏膜的器械。采用消毒即可。但接触黏膜的器械。采用消毒即可。（三）（三）低危器械物品低危器械物品 只接触未损伤皮肤只接触未损伤皮肤只接触未损伤皮肤只接触未损伤皮肤但但但但 不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。不进入无菌组织和不接触黏
9、膜的物品。不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。 一般用后清洗、消毒即可。一般用后清洗、消毒即可。一般用后清洗、消毒即可。一般用后清洗、消毒即可。（四）（四）快速周转的医疗器械快速周转的医疗器械 一一、医疗器械物品的消毒灭菌医疗器械物品的消毒灭菌（二）室内空气消毒灭菌（二）室内空气消毒灭菌 1 1 1 1. . . .物物物物理理理理消消消消毒毒毒毒法法法法 紫紫紫紫外外外外线线线线照照照照射射射射（1.51.5WW/m/m3 3，1h1h）最最最最常常常常用用用用；滤滤滤滤过过过过除除除除菌菌菌菌：空空空空气气气气通通通通过过过过孔孔孔孔径径径径小小小小于于于于0.2 0.2 mm的高效过滤装置
10、以除去细菌和带菌尘埃的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃 2 2 2 2化化化化学学学学消消消消毒毒毒毒法法法法 包包包包括括括括化化化化学学学学消消消消毒毒毒毒剂剂剂剂喷喷喷喷雾雾雾雾和和和和熏熏熏熏蒸蒸蒸蒸：过过过过氧氧氧氧乙乙乙乙酸酸酸酸喷喷喷喷雾雾雾雾、熏熏熏熏蒸蒸蒸蒸；过过过过氧氧氧氧化化化化氢氢氢氢喷喷喷喷雾雾雾雾；二二二二氧氧氧氧化氯溶液化氯溶液化氯溶液化氯溶液喷洒；喷洒；喷洒；喷洒；中草药点燃烟熏中草药点燃烟熏中草药点燃烟熏中草药点燃烟熏（三）手和皮肤的消毒（三）手和皮肤的消毒 用肥皂和流动水经常并正确洗手用肥皂
11、和流动水经常并正确洗手用肥皂和流动水经常并正确洗手用肥皂和流动水经常并正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。病原微生物污染时应用消毒剂消毒。病原微生物污染时应用消毒剂消毒。病原微生物污染时应用消毒剂消毒。 （四）（四）黏膜黏膜的消毒的消毒 （五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌（五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌 （六）病人污染物品的消毒（六）病人污染物品的消毒 （七）饮水的消毒（七）饮水的消毒 （八）环境的消毒（八）环境的消毒 影响消毒灭菌效果的因素n消毒剂的性质、浓度与作用时间n微生物的种类与数量n温度n酸碱度n有机物第四节第四节 影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素一一、微生物的种
12、类微生物的种类 二二、微生物的物理状态微生物的物理状态 三三、微生物的数量微生物的数量 四四、消毒剂性质、浓度与作用时间消毒剂性质、浓度与作用时间 五五、温度温度 六六、酸碱度酸碱度 七七、有机物有机物第四节第四节 病病原微生物实验室生物安全原微生物实验室生物安全 生生物物安安全全（biosafety）是是生生物物技技术术安安全全（safety of biotechnology）的简称的简称 狭狭义义地地指指现现代代生生物物技技术术的的研研究究、开开发发、应应用用及及转转基基因因生生物物可可能能对对生生物物多多样样性性、生生态态环境和人类健康产生潜在的危害。环境和人类健康产生潜在的危害。 广广
13、义义地地指指与与生生物物有有关关的的各各种种因因素素对对社社会会、经经济济、人人类类健健康康及及生生态态环环境境所所产产生生的的危危害害或或潜在风险。潜在风险。 病病原原微微生生物物所所致致的的安安全全问问题题，如如病病原原微微生生物物实实验验室室的的安安全全隐隐患患、生生物物武武器器、生生物物恐恐怖怖、重重大大传传染染病病的的暴暴发发流流行行等等，也也是是人类社会所面临的最现实的生物安全问题人类社会所面临的最现实的生物安全问题 病病原原微微生生物物实实验验室室生生物物安安全全的的核核心心是是防扩散防扩散和和防感染防感染 关关于于病病原原微微生生物物实实验验室室生生物物安安全全，我我国国法法令
14、令包包括括对对病病原原微微生生物物的的分分类类管管理理，对对实实验验室室的的分分级级管管理理，实实验验室室感感染染的的控控制制以以及监督和法律责任等及监督和法律责任等 一、病原微生物的分类一、病原微生物的分类 根根据据传传染染性性、感感染染后后对对个个体体或或者者群群体体的的危危害程度，病原微生物分为四类：害程度，病原微生物分为四类： 第第一一类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物非非常常严严重重疾疾病病的的微微生生物物，以以及及我我国国尚尚未未发发现现或或者者已已经经宣布消灭的微生物。宣布消灭的微生物。 第第二二类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物严严重重疾疾病
15、病，比比较较容容易易直直接接或或者者间间接接在在人人与与人人、动动物物与与人、动物与动物间传播的微生物。人、动物与动物间传播的微生物。 第第三三类类是是指指能能够够引引起起人人或或动动物物疾疾病病，但但一一般般情情况况下下对对人人、动动物物或或环环境境不不构构成成严严重重危危害害，传传播播风风险险有有限限，实实验验室室感感染染后后很很少少引引起起严严重重疾疾病病，并并且且具具备有效治疗和预防措施的微生物。备有效治疗和预防措施的微生物。 第第四四类类是是指指在在通通常常情情况况下下不不会会引引起起人人或或动动物物疾疾病病的微生物。如小鼠白血病病毒等。的微生物。如小鼠白血病病毒等。 第一类、第二类
16、统称为高致病性病原微生物。第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。 二、病原微生物实验室的分级二、病原微生物实验室的分级级别级别处理对象处理对象一级一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子人、动植物致病的致病因子。二级二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，成严重危害，具具有有效的预防和治疗措施有有效的预防和治疗措施。三级三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过
17、对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施预防治疗措施。四级四级 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施子。没有预防治疗措施。 一一、二二级级实实验验室室不不得得从从事事高高致致病病性性病病原原微微生生物物实实验验活活动动。三三级级、四四级级实实验验室
18、室从从事事高高致病性病原微生物实验活动。致病性病原微生物实验活动。 从从事事高高致致病病性性病病原原微微生生物物相相关关实实验验活活动动应应当当有有名名以以上上的的工工作作人人员员共共同同进进行行。在在同同一一个个实实验验室室的的同同一一个个独独立立安安全全区区域域内内，只只能能同同时时从从事事一一种种高高致致病病性性病病原原微微生生物物的的相相关关实实验活动。应有健全安全保卫制度验活动。应有健全安全保卫制度 。 实实实实验验验验室室室室工工工工作作作作人人人人员员员员应应应应掌掌掌掌握握握握实实实实验验验验室室室室技技技技术术术术规规规规范范范范、操操操操作作作作规规规规程程程程、生生生生物
19、物物物安安安安全全全全防防防防护护护护知知知知识识识识和和和和实实实实际际际际操操操操作作作作技技技技能能能能。应应应应有有有有符符符符合合合合要要要要求求求求的的的的防防防防护用品，应建立健康档案；进行预防接种。护用品，应建立健康档案；进行预防接种。护用品，应建立健康档案；进行预防接种。护用品，应建立健康档案；进行预防接种。 实实实实验验验验室室室室应应应应有有有有科科科科学学学学、严严严严格格格格的的的的管管管管理理理理制制制制度度度度，定定定定期期期期对对对对实实实实验验验验室室室室设设设设施施施施设设设设备备备备、材材材材料料料料等等等等进进进进行行行行检检检检查查查查、维维维维护护护
20、护和和和和更更更更新新新新，应应应应对对对对废废废废水水水水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染。 生物安全生物安全三、实验室感染的控制以及监督和法三、实验室感染的控制以及监督和法律责任律责任 实实实实验验验验室室室室感感感感染染染染控控控控制制制制工工工工作作作作包包包包括括括括定定定定期期期期检检检检查查查查实实实实验验验验室室室室的的的的生生生生物物物物安安安安全全全全防防防防护护护护、病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物菌菌菌菌（毒毒毒毒）种种种种和
21、和和和样样样样本本本本保保保保存存存存与与与与使使使使用用用用、安安安安全全全全操操操操作作作作、实实实实验验验验室室室室排排排排放放放放的的的的废废废废水水水水和和和和废废废废气气气气以以以以及及及及其其其其他废物处置等实施情况。他废物处置等实施情况。他废物处置等实施情况。他废物处置等实施情况。 实实实实验验验验室室室室发发发发生生生生高高高高致致致致病病病病性性性性病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物泄泄泄泄漏漏漏漏时时时时，预预预预防防防防、控控控控制制制制措措措措施施施施包包包包括括括括：封封封封闭闭闭闭被被被被病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物污污污污染染染染的的的的实实实
22、实验验验验室室室室或或或或可可可可能能能能造造造造成成成成病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物扩扩扩扩散散散散的的的的场场场场所所所所；开开开开展展展展流流流流行行行行病病病病学学学学调调调调查查查查；对对对对病病病病人人人人进进进进行行行行隔隔隔隔离离离离治治治治疗疗疗疗，对对对对相相相相关关关关人人人人员员员员进进进进行行行行医医医医学学学学检检检检查查查查；对对对对密密密密切切切切接接接接触触触触者者者者进进进进行行行行医医医医学学学学观观观观察察察察；进进进进行行行行现现现现场场场场消消消消毒毒毒毒；对对对对染染染染疫疫疫疫或或或或者者者者疑疑疑疑似似似似染染染染疫疫疫疫的的的的动
23、动动动物物物物采采采采取取取取隔隔隔隔离离离离、扑杀等措施。扑杀等措施。扑杀等措施。扑杀等措施。 监监督督的的主主要要内内容容是是监监督督病病原原微微生生物物实实验验室室执执行行国国家家有有关关法法律律、行行政政法法规规、国国家家标准和要求的记录、档案及报告的情况标准和要求的记录、档案及报告的情况 法法律律责责任任的的核核心心是是承承担担造造成成传传染染病病传传播、流行或者其他严重后果的法律责任播、流行或者其他严重后果的法律责任 习题1.杀灭芽胞最常用和最有效的方法是：_。 a.紫外线照射 b.煮沸5min c.巴氏消毒法d.流通蒸气灭菌法 e.高压蒸气灭菌法 2.灭菌方法错误的是_。a.手术
24、室空气-紫外线 c.饮水-氯气b.排泄物-漂白粉 d.含血清培养基-高压蒸气灭菌e.温度计-75%酒精3.下述不可能杀灭细菌芽胞的方法是： _。a.煮沸法 b.巴氏消毒法c.间歇灭菌法 d.干热灭菌法e.高压蒸气灭菌法4.关于紫外线，说法错误的是_。a.其杀菌作用与波长有关 c.265-266nm杀菌作用最强b.可损坏细菌的DNA构型 d.其穿透力弱，故对人体无损害 e.紫外线适用空气和物体表面的消毒5.常用于空气或物体表面的消毒_。a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法 6.常用于基础培养基灭菌_。a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法d.巴氏消毒法e.干烤法7.常用于手术器械的灭菌_。 a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法8.常用于血清的除菌_。a.高压蒸气灭菌法 b. 滤过除菌法c. 紫外线照射法 d.巴氏消毒法 e.干烤法 9.将牛奶加热6230分钟的目的是_。a.使牛奶中的蛋白质变性，易于吸收b.杀灭牛奶中的所有微生物c.杀死牛奶中的病原菌d.使牛奶不含活菌e.防止或抑制微生物在牛奶中生长和繁殖10.乙醇消毒剂常用的浓度是： _。a.100 b.95 c.75d.50e.30
