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1、实验项目目蛋白蛋白质变性与沉淀性与沉淀1 1一、一、实验目的目的 1.1.掌握蛋白掌握蛋白质变性与沉性与沉淀的原理及各种沉淀方法；淀的原理及各种沉淀方法； 2.2.熟悉刻度吸量管的正熟悉刻度吸量管的正确使用；确使用； 3.3.了解蛋白了解蛋白质变性与沉性与沉淀两者的关系。淀两者的关系。2 2二、二、实验原理原理（一）（一） 蛋白蛋白质沉淀原理沉淀原理蛋白蛋白质溶于水形成溶于水形成稳定定的胶体溶的胶体溶液，液，维持持蛋白蛋白质胶体溶液胶体溶液稳定因素：定因素：1.1.蛋白蛋白质颗粒表面的粒表面的水化膜；水化膜；2.2.蛋白蛋白质颗粒表面的粒表面的电荷。荷。去除上述去除上述稳定因素可使蛋白定因素可
2、使蛋白质沉沉淀析出淀析出。3 3蛋白蛋白质沉淀析出常用的方法有沉淀析出常用的方法有等等电点法、点法、盐析法、重金属离子析法、重金属离子沉淀法、有机酸沉淀法、有机酸试剂沉淀法、有沉淀法、有机溶机溶剂沉淀法等。沉淀法等。4 4（二）蛋白（二）蛋白质变性原理性原理蛋白蛋白质受某些物理或化学受某些物理或化学因素的影响，空因素的影响，空间结构构发生改生改变，生物活性，生物活性丧失。称失。称为蛋白蛋白质变性。性。蛋白蛋白质变性，分可逆；不可逆。性，分可逆；不可逆。5 5三、三、实验仪器与器与试剂1.仪器试管、刻度吸量管、洗耳球等。2.试剂 5蛋白蛋白质溶液、溶液、 2.5蛋白蛋白质溶液、溶液、10ZnSO
3、4溶液、溶液、 o.1mol/LNaOH、 1三氯醋酸、无水乙醇、NaCl（固体）6 6四、四、实验内容及内容及操作步操作步骤1.1.重金属重金属盐及有机酸及有机酸类沉淀蛋白沉淀蛋白质2.2.乙醇沉淀蛋白乙醇沉淀蛋白质（一）（一）实验内容内容（二）（二）操作步操作步骤7 71.1.重金属重金属盐及有机酸及有机酸类沉淀蛋白沉淀蛋白质1 1）实验原理原理COO-NH3+POH-H+重金属离子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-PpH pIpH pI pI两性离子两性离子负电荷荷正正电荷荷盐盐8 82）操作步操作步骤试剂（滴）试剂（滴）试管试管1 1
4、试管试管2 2试管试管3 35%蛋白质溶蛋白质溶液液2D2D2D0.1mol/L NaOH2D10% ZnSO420D20D1%三氯醋酸三氯醋酸20D现象现象3 3）观察、察、记录实验现象，并解象，并解释之。之。9 92.2.乙醇沉淀蛋白乙醇沉淀蛋白质1 1）实验原理原理乙醇溶解于水，破坏蛋白乙醇溶解于水，破坏蛋白质分子的水化膜，加入少量中分子的水化膜，加入少量中性性盐抑制蛋白抑制蛋白质的解离，使的解离，使电荷减少，沉淀更完全。荷减少，沉淀更完全。12122）操作步操作步骤试剂（试剂（mL）试管试管1 1试管试管2 22.5%蛋白质蛋白质溶液溶液0.5 mL0.5 mL结晶结晶NaCl数粒（适
5、量）数粒（适量）无水无水乙醇乙醇1mL1mL现象现象3）观察、察、记录实验现象，并解象，并解释之。之。1313 五、注意事五、注意事项 1.1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否瓶滴管不能交叉使用，否则污染染试剂。2.2.刻度吸量管不能交叉使用，否刻度吸量管不能交叉使用，否则污染染试剂，影响反，影响反应现象。象。3.3.做完做完实验把把把把试剂按原按原样摆放，放，试管和管和刻度吸量管冲刻度吸量管冲洗干洗干净，桌面擦干，桌面擦干净，登，登记签名。名。4.4.值日生听老日生听老师安排，安排，认真打真打扫，经老老师批准才能离开批准才能离开实验室。室。1616 六、思考六、思考题1.1.临床床抢救重金属中毒患
6、者，救重金属中毒患者，为什么用什么用鸡蛋清或牛奶？蛋清或牛奶？2.2.蛋白液中加入适量乙醇，蛋白液中加入适量乙醇，为什么会什么会产生沉淀？生沉淀？3.3.蛋白液在碱性条件下加入蛋白液在碱性条件下加入ZnSO4 ，为什么会什么会产生沉淀？生沉淀？4.4.蛋白液中加入三蛋白液中加入三氯醋酸醋酸 ，为什么会什么会产生沉淀？生沉淀？1717 下次下次实验： P74页激活激活剂及抑制及抑制剂对酶活性的影响活性的影响实验报告明天交，告明天交，请组长负起起责任。任。谢谢同学同学们配合！配合！1818 下次下次实验： P70页酶的特异性的特异性实验报告可以下告可以下课交，交，最晚明天交，最晚明天交，请组长负起起责任。任。谢谢同学同学们配合！配合！1919
