治疗药物监测汪荣军

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1、治疗药物监测治疗药物监测Therapeutic Drug Monitoring安徽省第二人民医院药学部安徽省第二人民医院药学部汪荣军汪荣军 TDM是近二、三十年来形成的新的临床医是近二、三十年来形成的新的临床医学分支，是临床药理学研究的重要内容之一。学分支，是临床药理学研究的重要内容之一。TDM通过运用各种灵敏的现代分析测试手段通过运用各种灵敏的现代分析测试手段（如如HPLC、放射免疫法和气相色谱法等）、放射免疫法和气相色谱法等）定量分析定量分析生物样品（特别是血液）中的药物及其代谢产物生物样品（特别是血液）中的药物及其代谢产物浓度，探讨患者血药浓度与疗效和毒性反应之间浓度，探讨患者血药浓度与

2、疗效和毒性反应之间的关系的关系，指导临床合理用药。，指导临床合理用药。以以临临床床药药理理学学（药药物物的的性性质质和和作作用用机机理理）、药药代代动动力力学学（药药物物的的体体内内代代谢谢）、临临床床化化学学（分分析析原原理）为基础，辅以现代分析检测技术。理）为基础，辅以现代分析检测技术。背景 （一）概述（一）概述（二）需要监测治疗浓度的主要药物（二）需要监测治疗浓度的主要药物（三）治疗药物浓度测定的标本处理（三）治疗药物浓度测定的标本处理（四）治疗药物浓度测定的常用方法（四）治疗药物浓度测定的常用方法主要内容主要内容（五）几种常见药物（五）几种常见药物TDM （一）概述（一）概述1. 治疗

3、药物浓度监测目的及意义治疗药物浓度监测目的及意义2. 药物在体内的基本过程药物在体内的基本过程3. 血药浓度与药物效应血药浓度与药物效应4. 治疗药物监测与给药方案个体化治疗药物监测与给药方案个体化受体与药物的相互作用受体与药物的相互作用 D R DR E 药物与受体的结合药物与受体的结合 结合后产生效应结合后产生效应血药浓度的区域划分 （1）两线）两线 最低有效浓度（最低有效浓度（MEC） 最高耐受浓度（最高耐受浓度（MTC）（2）三区）三区 无效区无效区 治疗窗治疗窗 中毒范围中毒范围（3）与治疗用药的关系）与治疗用药的关系无效区无效区治疗窗治疗窗中毒范围中毒范围 有效血药浓度范围有效血药

4、浓度范围治疗窗治疗窗：临床上有效血药浓度范围：临床上有效血药浓度范围是指最低有效浓度（是指最低有效浓度（minimum effect concentration , MEC）与最低中毒浓度之间的范围，该与最低中毒浓度之间的范围，该范围又称治疗窗。范围又称治疗窗。 是个体化给药的目标值是个体化给药的目标值药物安全性评价：药物安全性评价： 治疗指数治疗指数(TI)：TI = LD5050 / EDED5050安全范围：安全范围：LD5 5ED9595 或或LD1 1ED9999药物蓄积：药物蓄积： 在前次给药的药物尚未完全消在前次给药的药物尚未完全消除时即作第二次给药除时即作第二次给药药物作用蓄积

5、药物作用蓄积： 在前次给药的在前次给药的“作用残留时间作用残留时间”即即作第二次给药则可产生药物作用蓄作第二次给药则可产生药物作用蓄积积治疗药物浓度监测的目的及意义治疗药物浓度监测的目的及意义 治疗药物监测（治疗药物监测（therapeutic drug monitoring，TDM）的定义：）的定义： 在临床药理学、生物药剂学和药代动力学的基础在临床药理学、生物药剂学和药代动力学的基础上，应用药物分析技术，测定血液或其他体液中药物上，应用药物分析技术，测定血液或其他体液中药物浓度，浓度，获取有关药动学参数，使临床给药方案个体化，获取有关药动学参数，使临床给药方案个体化，以提高疗效、减少不良反

6、应以提高疗效、减少不良反应的一门应用性学科。的一门应用性学科。 TDM可为临床制定合理的给药方案，可为临床制定合理的给药方案，对单一患者确定最佳的给药方式与治疗对单一患者确定最佳的给药方式与治疗剂量，即实现给药方案个体化剂量，即实现给药方案个体化TDM的最主要用途。的最主要用途。 给药方案的调整给药方案的调整p 稳态一点法稳态一点法p 重复一点法重复一点法p Bayesian反馈法反馈法 对于出现药物过量或中毒的患者，可通过对于出现药物过量或中毒的患者，可通过TDM明确诊断，筛选出中毒药物。明确诊断，筛选出中毒药物。TDM可为可为判断中毒程度并为制定治疗方案提供依据；同判断中毒程度并为制定治疗

7、方案提供依据；同时可进行药物过量时的临床药理学毒理学研究。时可进行药物过量时的临床药理学毒理学研究。 我院我院患者余某某，男，患者余某某，男，25岁，自行服用卡岁，自行服用卡马西平数量不详，怀疑药物过量，测得其卡马马西平数量不详，怀疑药物过量，测得其卡马西平血药浓度为西平血药浓度为15.34 g/ml。卡马西平有效血卡马西平有效血药浓度的参考值为药浓度的参考值为4 12 g/ml。案例案例1 TDM还可以用于还可以用于确定患者是否按医嘱服药，确定患者是否按医嘱服药，提高患者用药的依从性。提高患者用药的依从性。 我院我院患者邢某某，女，患者邢某某，女，46岁，自称遵医嘱岁，自称遵医嘱服用抗癫痫药

8、物卡马西平与丙戊酸钠，测得其服用抗癫痫药物卡马西平与丙戊酸钠，测得其卡马西平血药浓度仅为卡马西平血药浓度仅为0.20g/ml。丙戊酸钠未丙戊酸钠未检出检出。据了解，。据了解，该患者并未按医嘱服患者并未按医嘱服药。案例案例2药物在体内的基本过程药物在体内的基本过程n吸收（血管内给药除外）吸收（血管内给药除外）n分布分布n代谢（生物转化）代谢（生物转化）n排泄排泄血血药药浓浓度度与与药药物物效效应应常见药动学参数常见药动学参数 生物半衰期（t 1/2） 速率常数：ka, ke, k10,k12,k21, kM 药时曲线下面积：AUC 0tn, AUC 0 表观分布容积：V 总清除率：Cl 达峰时间

9、：Tmax 峰浓度：Cmax 稳态血药浓度 ：CSS 药动学基础传统的临床用药传统的临床用药: 将将剂量剂量与药理作用与药理作用强度强度直接相联系直接相联系实际上实际上: 药物的药理作用与剂量在一定范围内成比例药物的药理作用与剂量在一定范围内成比例 药理作用是药物与特异性受体相互作用的结果药理作用是药物与特异性受体相互作用的结果 作用部位作用部位(受体受体)组织液中的药物浓度决定药物的药组织液中的药物浓度决定药物的药理作用理作用强度强度 (受体受体)组织液中的药物浓度与血药浓度呈快速平衡组织液中的药物浓度与血药浓度呈快速平衡 药物疗效与副反应药物疗效与副反应 更多的取决于血药浓度而非剂量更多的

10、取决于血药浓度而非剂量血药浓度与临床效应的关系药物剂量与效应的关系药物剂量与效应的关系dose-effect relationship 指药物剂量与效应之间的关系，在一定范指药物剂量与效应之间的关系，在一定范围内，药物剂量增加效应也相应增加。围内，药物剂量增加效应也相应增加。n药理作用与血理作用与血药浓度的关系特例度的关系特例苯妥英苯妥英钠血血药浓度度(ug/ml)与与疗效和毒性的关系效和毒性的关系阿司匹林血阿司匹林血药浓度度(ug/ml)与与疗效和毒性的关系效和毒性的关系血药浓度血药浓度1010202020203030303040404040临床效应临床效应有效有效眼球震颤眼球震颤运动失调运

11、动失调精神异常精神异常血药浓度血药浓度50501001002502503503504004005505508508508008001100110012501250150015001600160018001800临床效应临床效应镇痛镇痛抗风湿抗风湿抗炎抗炎轻度中毒轻度中毒中度中毒中度中毒重度中毒重度中毒死亡死亡治疗药物监测与给药方案个体化治疗药物监测与给药方案个体化给药方案个体化的程序给药方案个体化的程序1. 患者经检查已明确诊断，并确定所用的药物后，临床医患者经检查已明确诊断，并确定所用的药物后，临床医生与实验室人员一起制定药物的试验剂量和给药时间间生与实验室人员一起制定药物的试验剂量和给药时

12、间间隔，即隔，即确定给药方案确定给药方案。2. 根据所用的药代动力学参数计算程序要求，给药后按一根据所用的药代动力学参数计算程序要求，给药后按一定时间采集适当次数的血标本，测定血药浓度，求出有定时间采集适当次数的血标本，测定血药浓度，求出有关的关的药代动力学参数药代动力学参数，同时观察临床的疗效。，同时观察临床的疗效。3. 根据求得的个体药代动力学参数与临床观察情况进行用根据求得的个体药代动力学参数与临床观察情况进行用药剂量的调整，药剂量的调整，得到适合个体的用药剂量得到适合个体的用药剂量。 给药个体化程序示意图给药个体化程序示意图 （二）需要监测治疗浓度的主要情形（二）需要监测治疗浓度的主要

13、情形一般认为可考虑一般认为可考虑TDM的药物有：的药物有：1治疗指数低、安全范围窄，毒性反应强的药物治疗指数低、安全范围窄，毒性反应强的药物2药代动力学的个体差异大的药物药代动力学的个体差异大的药物 3具有非线性动力学特性的药物具有非线性动力学特性的药物 4患心、肝、肾和胃肠道等脏器疾病时使用的药物患心、肝、肾和胃肠道等脏器疾病时使用的药物 5为预防慢性病发作需长期使用的药物为预防慢性病发作需长期使用的药物 6治疗浓度与中毒浓度很接近的药物治疗浓度与中毒浓度很接近的药物 7产生不良相互作用、影响药物疗效的合并用药产生不良相互作用、影响药物疗效的合并用药8常规剂量下出现毒性反应的药物常规剂量下出

14、现毒性反应的药物 TDM 测定什么测定什么1. 原形药物浓度：血清与血浆原形药物浓度：血清与血浆2. 游离药物的监测：苯妥英游离药物的监测：苯妥英3. 活性代谢物：普鲁卡因胺活性代谢物：普鲁卡因胺4. 对映体的监测：氯胺酮对映体的监测：氯胺酮需进行监测的常见药物呋塞米（速尿）塞米（速尿）利尿药环孢素、素、FK506FK506、MPAMPA、雷帕、雷帕酶酶素素免疫抑制剂甲氨蝶呤、甲氨蝶呤、环磷磷酰胺、阿霉素等胺、阿霉素等抗恶性肿瘤药氨基糖苷氨基糖苷类、万古霉素、万古霉素、氯霉素等霉素等抗生素阿司匹林、阿司匹林、对乙乙酰氨基酚氨基酚解热镇痛药碳酸碳酸锂抗躁狂症药丙咪丙咪嗪、阿米替林、去甲替林等、阿

15、米替林、去甲替林等抗抑郁药氨茶碱氨茶碱平喘药普普萘洛洛尔尔、美托洛、美托洛尔尔、阿替洛、阿替洛尔尔受体阻断剂苯妥因苯妥因铵、苯巴比妥、乙琥胺、卡、苯巴比妥、乙琥胺、卡马西平、西平、丙戊酸丙戊酸钠抗癫痫药利多卡因、普利多卡因、普鲁卡因胺、奎尼丁、乙胺碘卡因胺、奎尼丁、乙胺碘呋酮、因卡胺、异丙吡胺等、因卡胺、异丙吡胺等抗心律失常药地高辛、洋地黄毒苷地高辛、洋地黄毒苷强心甙药品分 类 不必进行不必进行TDM的药物：的药物：1有客观而简便的观察其作用指标的药物有客观而简便的观察其作用指标的药物2有效血药浓度范围大、毒性小的药物有效血药浓度范围大、毒性小的药物3短期服用、局部使用或不易吸收进入体内的药物

16、短期服用、局部使用或不易吸收进入体内的药物（三）治疗药物浓度测定的标本处理（三）治疗药物浓度测定的标本处理 在在TDM工作中可检测的标本有：工作中可检测的标本有：血浆血浆血清血清唾液唾液尿液尿液脑脊液脑脊液取样时间取样时间 一般原则：达到稳态血药浓度后取样一般原则：达到稳态血药浓度后取样n恒速静脉滴注时达稳态后，任何时间取样。恒速静脉滴注时达稳态后，任何时间取样。n多剂量间隔用药时，根据实际需要确定取样。多剂量间隔用药时，根据实际需要确定取样。n长期用药时，在给药前（谷浓度）取样。长期用药时，在给药前（谷浓度）取样。n观察药物是否达中毒浓度，在峰值时取样。观察药物是否达中毒浓度，在峰值时取样。

17、n诊断急性药物中毒，应立即取样。诊断急性药物中毒，应立即取样。样品预处理样品预处理（一）去蛋白（一）去蛋白1液液-固提取固提取2液液-液提取液提取（二）提取（二）提取1. 沉淀离心法沉淀离心法2. 层析法层析法3. 超滤法超滤法4. 超速离心法超速离心法 治疗药物监测与给药方案个体化n给药方案个体化的实施（四）治疗药物浓度测定的常用方法（四）治疗药物浓度测定的常用方法 n光谱法光谱法n色谱法色谱法n免疫化学法免疫化学法 在在TDM中常用的分析方法主要有中常用的分析方法主要有光谱法光谱法n紫外紫外/ /可见分光光度法可见分光光度法n荧光分光光度法荧光分光光度法n快速快速n方法简便方法简便优点：优

18、点：灵敏度较低灵敏度较低特异性差特异性差易受内源性物质、代谢产物、易受内源性物质、代谢产物、 联合使用药物的干扰联合使用药物的干扰 缺点：缺点：色谱法色谱法n高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC） 卡马西平、丙戊酸钠卡马西平、丙戊酸钠n气相色谱法气相色谱法n液相色谱液相色谱-质谱联用（质谱联用（HPLC-MC）卡马西平卡马西平 本品为抗惊厥药和抗癫痫药。口服吸收缓慢、本品为抗惊厥药和抗癫痫药。口服吸收缓慢、不规则。口服不规则。口服400mg后后45小时血药浓度达峰值，小时血药浓度达峰值，血药峰值为血药峰值为812g/ml，但个体差异很大。卡马西，但个体差异很大。卡马西平有效血药浓度的参考值

19、为平有效血药浓度的参考值为4 12 g/ml。丙戊酸钠丙戊酸钠 本品主要用于单纯或复杂失神发作、肌阵本品主要用于单纯或复杂失神发作、肌阵挛发作，大发作的单药或合并用药治疗，有时挛发作，大发作的单药或合并用药治疗，有时对复杂部分性发作也有一定疗效。口服胃肠吸对复杂部分性发作也有一定疗效。口服胃肠吸收迅速而完全，约收迅速而完全，约1 4小时血药浓度达峰值，小时血药浓度达峰值，生物利用度近生物利用度近100%。丙戊酸钠有效血药浓度的。丙戊酸钠有效血药浓度的参考值为参考值为50 100 g/ml。免疫化学法免疫化学法n 酶免疫法酶免疫法n 荧光免疫法：地高辛荧光免疫法：地高辛n 放射免疫法放射免疫法很

20、少使用很少使用 地高辛地高辛 本品属强心药，是由毛花洋地黄提纯制得的强本品属强心药，是由毛花洋地黄提纯制得的强心苷，其特点是排泄较快而蓄积性较小。地高辛心苷，其特点是排泄较快而蓄积性较小。地高辛有效血药浓度的参考值为有效血药浓度的参考值为0.8 2.0 ng/ml。若地高若地高辛血药浓度辛血药浓度2.02.5 ng/ml，应警惕药物过量或，应警惕药物过量或毒性反应。毒性反应。 治疗药物监测的临床意义治疗药物监测的临床意义血药浓度与药物效应 与药物效应相一致的血药浓度是指靶器官、组织、细胞上的浓度，但由于靶器官、组织、细胞上的浓度直接测定有一定的困难，则用与靶器官、组织、细胞上的药物浓度有恒定关

21、系的血浆或血清浓度来替代。药代动力学基础及有关参数的应用药代动力学基础及有关参数的应用多房室模型图：药代动力学基础及有关参数的应用药代动力学基础及有关参数的应用单室模型一级消除动力学药代动力学基础及有关参数的应用药代动力学基础及有关参数的应用二、单室模型一级消除动力学（四）多次用药药代动力学基础及有关参数的应用药代动力学基础及有关参数的应用三、二室模型一级消除动力学 多室模型存在着包括血液在内的中央室向周边室分布达到平衡的过程，影响血药浓度的因素更为复杂。它是以单室模型为基础的消除动力学，在临床实际运用中较少应用。药代动力学基础及有关参数的应用药代动力学基础及有关参数的应用四、非线性动力学 任

22、何药物当其在体内量较少，未达到机体最大消除能力时，都将按一级动力学方式消除；而当其量超过机体最大消除能力时，将只能按最大消除能力这一恒量进行消除，变为零级消除动力学方式，即出现消除动力学模型转换。药物的消除不能用一种统一简单的线性过程描述，故称非线性动力学。药代动力学基础及有关参数的应用药代动力学基础及有关参数的应用四、AUC 指以血浆药物浓度为纵坐标，时间为横坐标，绘出的曲线所围成的面积，与治疗效果明显相关。测定血药浓度的时间选择的主要目的之一就是使单个时间获得的浓度与AUC间有高度相关关系。可分梯形法和积分法计算两种。药代动力学基础及有关参数的应用药代动力学基础及有关参数的应用四、AUC

23、治疗药物检测的临床应用一、获取个体药动力学参数二、制定用药方案三、指导调整剂量（临床应用的最主要目的）四、肝肾功能损伤时剂量的调整五、其他原因治疗药物检测常用标本及预处理一、常见标本及收集（一）血清/血浆nTDM中通常以血清为监测标本，但表观分布容积远远大于0.6L/kg0.6L/kg的药物应检测全血。n要考虑血清中蛋白对游离药物浓度的影响n采血时要远离用药部位治疗药物检测常用标本及预处理一、常见标本及收集（二）唾液n已知唾液药物浓度与血浆药物浓度比值较恒定的药物n在唾液与血浆间能较快达到分布平衡的药物n本身或同时用药不能有抑制唾液分泌的情况发生治疗药物检测常用标本及预处理一、常见标本及收集（

24、三）尿n饮食、尿液PH值应严格控制n可适用于泌尿道感染治疗或肾毒性较大药物的监测（四）其它体液 能正确反应血浆药物浓度，或与血浆药物浓度有明确比率关系的体液均可作为检测标本治疗药物检测常用标本及预处理二、取样时间按目的可分三种（一）供计算个体药动力学模型及参数n在有关血药浓度随时间变化的指数方程中，每一指数项取样不得少于3点，有关相转折点附近至少有两个点n消除相取样时间尽量长，时间跨度至少超过两个半衰期。治疗药物检测常用标本及预处理二、取样时间按目的可分三种（二）监测、调整用药方案n了解是否达到有效浓度水平（谷值）为服药前采集标本。n确定是否会致慢性中毒（峰值）为服药后数小时后采集标本。（三）

25、急性药物中毒的诊断及处理 必要时随时检测治疗药物检测常用标本及预处理三、样品预处理 测得浓度为以游离药物浓度形式存在的总浓度。n去蛋白n提取（最好同时能浓缩富集）n化学衍生化反应（五）（五）几种常见药物几种常见药物TDM 1. 抗心率失常药：普萘洛尔，胺碘酮抗心率失常药：普萘洛尔，胺碘酮实例：血浆中胺碘酮浓度测定实例：血浆中胺碘酮浓度测定 - 血样采集: 稳态谷浓度时点 - 分析对象：血浆 - 血样处理：乙腈直接沉淀蛋白 - 分析检测：HPLC-MS/ESI+ - 治疗浓度范围：治疗浓度范围：500-1500ng ml-12. 抗肿瘤药：甲氨喋呤（抗肿瘤药：甲氨喋呤（MTX）实例：化疗时血浆中

26、氨甲喋呤浓度测定实例：化疗时血浆中氨甲喋呤浓度测定- 血样采集: 大剂量冲击化疗后按需采第24h，58h，72h血点- 分析对象：血浆- 血样处理：直接沉淀蛋白，挥干后有机溶剂反提- 分析检测：HPLC-UV- 治疗浓度范围：有效血浓度为110-4molL-1，不产生毒副反应的最佳血药浓度为24h 410-5molL-13. 全血中环胞霉素全血中环胞霉素A（CsA）浓度测定）浓度测定- 血样采集：稳态谷浓度时点或峰浓度时点- 分析对象：全血- 血样处理：按免疫分析的试剂盒要求- 分析检测：荧光偏振免疫分析法-治疗浓度范围：100-400 ngml-1 - 血样采集血样采集: 稳态谷浓度时点稳态

27、谷浓度时点 - 分析对象：血浆分析对象：血浆 - 血样处理：乙醚液血样处理：乙醚液-液萃取液萃取 - 分析检测：分析检测：HPLC-UV - 治疗浓度：治疗浓度：苯巴比妥苯巴比妥101025 25 g ml-1 苯妥英苯妥英 101020 20 g ml-1 卡马西平卡马西平 4 412 12 g ml-1 4. 抗癫痫药物苯巴比妥、苯妥英、卡马西平5.地高辛治疗浓度范围 治疗浓度：0.8-2ng/ml；中毒浓度：2ng/ml 。 不良反应：1、胃肠道反应；2、中枢神经系统反应；3、视觉障碍；4、心脏反应。1）放射免疫测定法（RIA）；2）酶免疫测定法（EIA）；3）气相色谱法；4）高压液相色

28、谱法及薄层层析法等。测定方法：6.氨茶碱血药浓度： 治疗浓度： 成人：10-20ug/ml； 新生儿：510ug/ml。 最小中毒浓度： 成人：20ug/ml； 新生儿：15ug/ml。不良反应：直接兴奋中枢系统增加心肌收缩力和速率躁动、抽搐心律失常测定方法（1）免疫化学法（2）HPLC（3）紫外光度法（双波长法）7.氨基糖甙类（庆大霉素） （1）药理作用 阻断细菌蛋白质合成细菌死亡（2）药动学吸收转运分布生物转化排泄肌注030%蛋白结合率体内不代谢原型7. 庆大霉素血药浓度： 治疗浓度：0.510ug/ml；最小中毒浓度： 12ug/ml。庆大霉素不良反应：1）耳毒性2）肾毒性测定方法（1）

29、微生物法（2）HPLC（3）免疫化学法50-20050-20018-4418-4414-2214-2293-9693-9646-5646-56去甲替林去甲替林30-15030-150* *150-250150-250* *150-300150-300150-300150-300* *治疗血清浓度治疗血清浓度（g/Lg/L）11-2311-2310-2010-2013-2313-2310-1610-16原型药半寿期原型药半寿期（h h）12-2812-286-106-1026-4226-429-219-21表观分布容积表观分布容积（L/kgL/kg）909082-9682-9690-9390-9

30、389-9489-94血浆蛋白结合率血浆蛋白结合率（）（）17-3717-3756-7056-7033-6833-6826-6826-68生物利用度（）生物利用度（）多虑平多虑平阿米替林阿米替林去甲丙咪嗪去甲丙咪嗪丙咪嗪丙咪嗪8.治疗情感性精神障碍药三环类（丙咪嗪） （1）药理作用 1）中枢神经系统 2）植物神经系统消除抑郁，提高情绪。（2）药动学吸收转运分布生物转化排泄口服7396%蛋白结合率90%肝脏部分在肠道（4）不良反应（正常人）：疲乏、嗜睡注意力不集中；思维能力下降。连续用药（3）治疗浓度： 150250ng/ml。（5）测定方法（1）GC法（2）HPLC（3）高效薄层色谱法（6）影

31、响血药浓度的因素1）病理2）遗传 代谢速率差异。3）年龄4）吸烟吸烟者血药浓度为不吸烟者的两倍。低蛋白血症蛋白结合率降低儿童成人老年人升高降低升高血药浓度升高6、抗癫痫药（苯妥英钠） （1）药理作用 1）癫痫大发作 2）神经运动性发作（2）药动学吸收转运分布生物转化排泄口服8892%蛋白结合率7080%肝脏（3）血药浓度： 治疗浓度： 1020ug/ml； 最小中毒浓度： 25 ug/ml。（4）不良反应：1）局部刺激2）齿龈增生 3）神经系统4）血液系统5）骨骼系统（5）测定方法（1）GC法（2）HPLC（3）免疫化学法进行治疗药物监测时的注意点：n不要只根据一次监测资料作临床解释n病人血浆

32、蛋白水平、肝肾功能对结果的影响n应结合临床情况和药理学知识对监测资料进行适当应用n不能单纯依赖经验给病人咨询 谢谢 谢！谢！实验室篇实验室篇药物监测的常用方法一、定性检测n斑点试验特点：灵敏度低（mg/l）、特异性差、不需特殊仪器n薄层色谱法特点：重复性差、快速、不需特殊仪器药物监测的常用方法二、定量检测（一）分光光度法（二）免疫学方法n标记免疫法nEMIT常用分析方法的检测限常用分析方法的检测限0.1ng/mL 1ng/mL 10ng/mL 100ng/mL 1ug/mL 10ug/mLGC-MS 、HPLC-MS HPLC-UVD or FLD GC-ECD GC-NPD GC-FID T

33、LC HPCE IR or UV IA（RIA EIA PIA FPIA） 待测物质浓度与检测手段 临床化学分析临床化学分析10-1210-910-610-310-0pg/mLng/mLm mg/mLmg/mLg/L免疫分析免疫分析Therapeutic DrugsThyroid HormoneFertility HormoneAllergyCancer MarkersInfectious DiseaseVitaminsSerum Proteins HAPATITISCANCERFERTILITYPROTEINSTDMs/DRUGSTYROID, ANEMIAHBVHCVM1071010-15

34、10-4 g/L AFP FERCEA CA199 PRLHCG LH FSHGH MyoglobinRHF IgGC3 ASO CERTRF AAGQUI GEN AMI PHYFT3 FT4 Dig T3 T4TSH ProgImmunoassay Analyte MapEnzyme Multiplied Immunoassay Technique+=SampleReagentAReagentBResultEnzyme Multiplied Immunoassay TechniqueG6PNADAntibodytodrugReagentADrugLabelledG6P-DHEReagent

35、BBufferTrisBufferatpH7.2Emit componentsn (Glucose-6-Phosphate)(NAD)(NADH)(Gluconate)SubstrateProductCofactor(Glucose6Phosphatede-hydrogenase)EnzymeProductBasic enzymatic reactionEE+SampleReagentAReagentBReactionPRESENTA sample containing drugE+H+EFormationofNADHReactionmechanismABSENTEE+SampleReagen

36、tAReagentBReactionA sample containing no drugEEThe enzyme active site is blocked due to steric hinderance from the antibody. Oxidation of G-6-P can not occurReactionmechanismVisibleIRUV400nm700nmNADH(340nm)WavelengthThe electromagnetic spectrumLow Absorbance ReadingHigh Absorbance ReadingNo Drug Pre

37、sentDrug Present010100ReactionMixtureNADNADH340nmFilterAbsorbanceNADHProductionRead TimeAbsorbanceTimeFirstreadingFinalreading0A0AfRate = Af - A0n Photometry药物监测的常用方法三、色谱法色谱法n气相色谱法n高效液相色谱法n高效毛细管电泳法1 1、竞争法原理、竞争法原理, ,检测检测抗原抗原.2 2、与荧光标记抗原竞、与荧光标记抗原竞争结合抗体争结合抗体.3 3、大小分子的不同旋、大小分子的不同旋转速度改变偏振光方转速度改变偏振光方向向.4

38、4、偏振光的改变与被、偏振光的改变与被检测药物检测药物浓度有关浓度有关.微粒子荧光免疫分析法(MEIA)原理ELISA原理：血浆中苯巴比妥、苯妥英、卡马西平分析色谱图血浆中苯巴比妥、苯妥英、卡马西平分析色谱图血浆中血浆中MTX分析色谱图分析色谱图建立体内药物分析方法流程准备建立色谱条件选择内标建立预处理方法灵敏度、线性考察回收率，精密度考察回收率，精密度考察稳定性、专属性考察应用 1. 游离药物-平衡透析法：半透膜-超滤法：离心+过滤-凝胶过滤法：凝胶层析-超速离心法：超高速离心分层二、几类特殊药物分析2. 活性代谢物 -指导合理用药 -解释血药浓度与药物效应间的矛盾 -解释和预防某些不良反应

39、 -分析方法在分析母药的基础上改进 3. 手性药物 -一些药物的立体异构性与其吸收、分布、转运、生物转化、排泄有密切关系 -与其药效学有密切关系 4. 生物技术药物 -种类多 -化学性质各异 -存在生物活性问题 -浓度低、生物体液本底干扰严重 -分子量一般大，分离分析难度大 -对分析仪器要求高 -生物质谱的应用二、影响血药浓度的因素药物的体内过程药物的体内过程用药部位用药部位入血达到体循环入血达到体循环分布、代谢分布、代谢排泄排泄 决决定定血血药药浓浓度度的的根根本本因因素素：药药物物本本身身的的理理化化性性质质、用用药药剂剂量量和和机体的处置能力。机体的处置能力。影影响响血血药药浓浓度度的的

40、因因素素：影影响响药药物物生生物物药药剂剂学学过过程程和和药药代代动动力力学学过程的任何因素。总结起来，不外乎药物和机体两大方面过程的任何因素。总结起来，不外乎药物和机体两大方面1.药剂方面的因素 药剂方面影响药物的生物利用度，主要影响因素有：药剂方面影响药物的生物利用度，主要影响因素有：吸收前在胃肠内的崩解程度吸收前在胃肠内的崩解程度吸收后在胃肠黏膜和肝脏的首过代谢吸收后在胃肠黏膜和肝脏的首过代谢剂型、处方中的辅料和制剂的工艺过程剂型、处方中的辅料和制剂的工艺过程影响血药浓度的因素影响血药浓度的因素影响血药浓度的因素影响血药浓度的因素2. 机体方面的因素（1）机体内部因素）机体内部因素 1）

41、生理）生理: 性别、年龄、生理周期性别、年龄、生理周期 2）病理：胃肠道疾病、肝、肾疾病、中枢感染性疾病）病理：胃肠道疾病、肝、肾疾病、中枢感染性疾病 3）遗传：个体差异、种族差异）遗传：个体差异、种族差异 4）时间节律：药物的吸收和代谢都存在一定的昼夜节律）时间节律：药物的吸收和代谢都存在一定的昼夜节律（2）环境外部因素）环境外部因素（影响机体内部因素而起作用）（影响机体内部因素而起作用） 1）物理因素：气候）物理因素：气候 2）化学因素）化学因素 ：葡萄柚汁（：葡萄柚汁（ CYP3A4 ）茶叶、咖啡（）茶叶、咖啡（ CYP1A2 ）影响血药浓度的因素影响血药浓度的因素影响血药浓度的因素影响

42、血药浓度的因素适用治疗药物监测的药物v治治疗疗指指数数低低、安安全全范范围围窄窄、毒毒副副作作用用强强的的药药物物。如如：地地高高辛辛，CSACSA。v具有非线性药动学代谢特征，具有非线性药动学代谢特征，KeKe与剂量有依赖关系的药物。如：与剂量有依赖关系的药物。如：茶碱，苯妥英。茶碱，苯妥英。v某些长期使用的药物。如氯氮平，某些长期使用的药物。如氯氮平，CSACSA。v部分药物合并使用时。如茶碱与两性霉素部分药物合并使用时。如茶碱与两性霉素B B 或强的松合用均引或强的松合用均引起茶碱血药浓度降低。起茶碱血药浓度降低。v特殊病理或生理条件下用药。如：肝、肾、胃肠疾病，孕妇、特殊病理或生理条件

43、下用药。如：肝、肾、胃肠疾病，孕妇、婴儿。婴儿。v药物的毒副作用表现与某些疾病本身症状相似。如地高辛引起药物的毒副作用表现与某些疾病本身症状相似。如地高辛引起房颤，房颤，CSACSA的肾毒性与肾移植的排异反应相似。的肾毒性与肾移植的排异反应相似。v特殊治疗。如：特殊治疗。如：MTXMTXv治治疗疗窗窗不不明明确确的的药药物物，即即使使获获得得了了相相关关的的血血药药浓浓度度数数据据，也无从正确解释和指导临床用药；也无从正确解释和指导临床用药；v有有切切实实可可行行的的临临床床指指标标用用于于判判断断疗疗效效和和不不良良反反应应，据据此此就就可以有效地进行用药剂量的调整；可以有效地进行用药剂量的

44、调整；v治治疗疗范范围围比比较较宽宽的的药药物物，在在比比较较大大的的剂剂量量范范围围和和血血浓浓度度范范围内都有较好的疗效和安全性；围内都有较好的疗效和安全性；v应应用用不不可可逆逆的的药药物物或或作作用用于于局局部部的的药药物物，血血药药浓浓度度不不能能预预测药理作用强度时。测药理作用强度时。2. 排除治疗药物监测的范围排除治疗药物监测的范围治疗药物监测的实施实实施施过过程程五五步步骤骤：申申请请、取取样样、测测定定、数数据处理和结果解释。据处理和结果解释。实实施施的的三三类类人人员员：积积极极有有效效地地开开展展治治疗疗药药物物浓浓度度监监测测，必必须须要要有有临临床床医医生生、护护士士

45、、临床药师三方面的密切配合临床药师三方面的密切配合一、申请1.申请单的作用申请单的作用将将一一项项监监测测请请求求通通知知给给临临床床药药师师，同同时时也也通通知知护护士士具体的采样时间和方法具体的采样时间和方法将病人有关情况告诉给临床药师，以供参考将病人有关情况告诉给临床药师，以供参考2.申请单的重要性申请单的重要性护士能否准确采样护士能否准确采样临床药师能否正确地分析和判断监测结果临床药师能否正确地分析和判断监测结果因因此此临临床床医医师师必必须须认认真真、完完整整、准准确确地地填填写写治治疗疗药药物物浓度监测申请单浓度监测申请单病病人人的的基基本本情情况况：包包括括一一般般身身份份项项目

46、目、所所患患疾疾病病及及主主要要临临床症状、主要脏器（心、肝、肾）功能床症状、主要脏器（心、肝、肾）功能用用药药情情况况：包包括括申申请请监监测测的的药药物物名名称称及及其其用用药药方方法法、时时程程、合并用药等情况合并用药等情况样品情况样品情况：包括取样时间、样品性质等：包括取样时间、样品性质等特殊情况特殊情况：代谢酶的基因型等：代谢酶的基因型等3.申请单基本项目申请单基本项目4.申请目的 需要着重强调的是在提出需要着重强调的是在提出治疗药物浓度监治疗药物浓度监测时，应当明测时，应当明确其目的。确其目的。特定的目的应该在申请表中说明，以征求临床药特定的目的应该在申请表中说明，以征求临床药师的

47、意见，确定合理的采样方案。师的意见，确定合理的采样方案。 监测的目的一般有两种监测的目的一般有两种想解决或弄清楚药物治疗方案的合理性问题想解决或弄清楚药物治疗方案的合理性问题 想通过监测病人的药动学数据来建立个体化用药方案，或想想通过监测病人的药动学数据来建立个体化用药方案，或想评价和判断某一治疗方案是否合理等，这类监测事先应做详评价和判断某一治疗方案是否合理等，这类监测事先应做详细调查，并需要制定周密的监测计划，属于研究性的。细调查，并需要制定周密的监测计划，属于研究性的。常规性目的常规性目的 想通过监测来了解病人的当前血药浓度水平是否在有效范围想通过监测来了解病人的当前血药浓度水平是否在有

48、效范围内、或是否中毒，以及对需要长期用药的精神病人了解其用内、或是否中毒，以及对需要长期用药的精神病人了解其用药的依从性如何等。药的依从性如何等。二、取样1.样品性质样品性质 (1)血浆血浆(2)血清血清(3)全血全血(4) 其他：唾液、尿液或脑脊液等其他：唾液、尿液或脑脊液等2. 取样时间取样时间 取决于具体监测的药物以及监测所想获取的信息，信息取决于具体监测的药物以及监测所想获取的信息，信息类型包括药效学和药动学两大类类型包括药效学和药动学两大类（1）药效学信息）药效学信息：如病人多次服药后出现了一些可能与治：如病人多次服药后出现了一些可能与治疗或毒性有关的症状，为判断是否由药物所致，可分

49、别疗或毒性有关的症状，为判断是否由药物所致，可分别测定稳态血药测定稳态血药峰浓度和谷浓度峰浓度和谷浓度（2）药动学信息）药动学信息：了解个体的分布容积和清除率，以此来：了解个体的分布容积和清除率，以此来计算负荷剂量和维持剂量以达到有效的治疗浓度范围计算负荷剂量和维持剂量以达到有效的治疗浓度范围 在用药刚开始取血测定主要是估算分布容积在用药刚开始取血测定主要是估算分布容积 而达到稳态后采样才用于估算清除率而达到稳态后采样才用于估算清除率 对于某一具体的药物，准确的采样时间，是由药物的对于某一具体的药物，准确的采样时间，是由药物的剂量形式和半衰期决定剂量形式和半衰期决定 3. 取样量及特殊处理取样

50、量及特殊处理 （1）所需样品量：主要与分析测定的方法有关。随）所需样品量：主要与分析测定的方法有关。随着现代化分析仪器的逐渐普及和提高，所需样品着现代化分析仪器的逐渐普及和提高，所需样品量倾向于越来越少，以前需要几毫升，现在几十量倾向于越来越少，以前需要几毫升，现在几十或上百微升可能已经满足或上百微升可能已经满足（2）样品的特殊处理：由监测的药物和后续的分析）样品的特殊处理：由监测的药物和后续的分析方法决定，主要是指血液是否需要抗凝、避光或方法决定，主要是指血液是否需要抗凝、避光或添加保护剂等添加保护剂等 2. 测定方法测定方法 （1）测定方法的要求）测定方法的要求 精密度：精密度： RSD1

51、0%好，好，15%可接受，再大不可用可接受，再大不可用 准确度：一般在准确度：一般在80%120%认为可行认为可行 灵敏度：以能检出血液中的最低药物浓度为原则。灵敏度：以能检出血液中的最低药物浓度为原则。 选择性：目标药物的测定不容易受标本和试剂中的其他物质的干扰选择性：目标药物的测定不容易受标本和试剂中的其他物质的干扰（2）分析手段的选择）分析手段的选择 经典的化学分析方法经典的化学分析方法 仪器分析方法：包括色谱法、光谱法、质谱法、免疫法、以及各谱法仪器分析方法：包括色谱法、光谱法、质谱法、免疫法、以及各谱法间的联用。间的联用。 一种药物可以采用几种不同的分析手段，而同一种分析手段又可以有

52、一种药物可以采用几种不同的分析手段，而同一种分析手段又可以有不同的实验条件不同的实验条件（3）分析方法的质量控制）分析方法的质量控制四、数据处理1. 数据处理的重要性数据处理的重要性 单纯的血药浓度值所提供的信息有限，故需对所测定的血药浓单纯的血药浓度值所提供的信息有限，故需对所测定的血药浓度数值进行进一步的分析处理度数值进行进一步的分析处理2. 数据处理的办法数据处理的办法浓度是否达到治疗范围、中浓度是否达到治疗范围、中毒水平，病人的依从性毒水平，病人的依从性测定结果和参考范围测定结果和参考范围建立个体化给药方案建立个体化给药方案判断用药方案合理吗判断用药方案合理吗根据血浓度，应用药动力学原

53、根据血浓度，应用药动力学原理和群体药动学参数，估算个理和群体药动学参数，估算个体药动力学参数，再结合病人体药动力学参数，再结合病人的生理、病情特点，对给药方的生理、病情特点，对给药方案进行评价或合理设计案进行评价或合理设计 1. 临床资料的掌握临床资料的掌握 分类分类内容内容一般情况年龄、性别、体重、身高诊断所患疾病及主要的临床症状并发症指影响药代动力学参数的疾病肾功能血清肌酐、尿素氮肝功能转氨酶、胆红素、血清蛋白等蛋白结合血清蛋白浓度、白/球蛋白比值、脂肪酸等电解质血清Na+、K+、Ca+、Mg+等浓度，酸碱指标营养状况特别的饮食、静脉营养合并用药影响药动学参数、生化指标或测定准确度的药物疗

54、效情况治疗效果或不良反应用药情况测定药物的给药方案采样情况采样的准确时间、采样条件2. 药动学资料的掌握药动学资料的掌握 分类分类内容内容健健康康人人的的参参数数各项药动学参数各项药动学参数病病态态时时的的参参数数各各脏脏器器疾疾患患时时、烧烧伤伤或或休休克克时时、肥肥胖胖或或浮浮肿肿时时、发热时、血透时的参数发热时、血透时的参数生生理理变变化化时时的参数的参数年龄、性别、遗传、妊娠、特殊饮食下的参数年龄、性别、遗传、妊娠、特殊饮食下的参数特特殊殊环环境境下下的参数的参数物物理理或或化化学学因因素素（环环境境污污物物、烟烟、酒酒、茶茶等等）影影响下的参数响下的参数3.对血药浓度实际测量值与预期

55、值进行比较对血药浓度实际测量值与预期值进行比较比较结果比较结果可能的原因可能的原因实测值预期值实测值预期值是否按照医嘱用药是否按照医嘱用药制剂的生物利用度偏高制剂的生物利用度偏高K比预期的小比预期的小Vd比预期的小比预期的小实测值预期值实测值预期值是否按照医嘱用药是否按照医嘱用药制剂的生物利用度偏低制剂的生物利用度偏低K比预期的大比预期的大 Vd比预期的大比预期的大4. 综合上述数据及资料，解释以下问题综合上述数据及资料，解释以下问题n确定血药浓度测定值是否为稳态浓度确定血药浓度测定值是否为稳态浓度n根据患者资料及群体药动学参数预估个体药动学参数。根据患者资料及群体药动学参数预估个体药动学参数

56、。n运用适当的药动学模型及预估的药动学参数预测血药浓度。运用适当的药动学模型及预估的药动学参数预测血药浓度。n比较实测浓度与预估浓度，如果相符，则认为病人药动学比较实测浓度与预估浓度，如果相符，则认为病人药动学参数的估计是适当的，是否需要调整剂量则取决于实际血参数的估计是适当的，是否需要调整剂量则取决于实际血药浓度和其他因素，特别是疗效反应。药浓度和其他因素，特别是疗效反应。n如果实测浓度与预估浓度不相符，首先检查患者是否按医如果实测浓度与预估浓度不相符，首先检查患者是否按医嘱服药。若是则需要修改药动学参数的预估值，并分析原嘱服药。若是则需要修改药动学参数的预估值，并分析原因。同时给医师解释出

57、现这种差异的可能原因，提出调整因。同时给医师解释出现这种差异的可能原因，提出调整剂量的意见。剂量的意见。五、结果解释 结果的解释是治疗药物浓度监测整个流程的最后一步，结果的解释是治疗药物浓度监测整个流程的最后一步，是对整个监测过程和监测结果的总结和评价是对整个监测过程和监测结果的总结和评价临床药师临床药师：临床药师必须具备比较高的医学、药学素质、敏：临床药师必须具备比较高的医学、药学素质、敏锐的洞察力和比较强的逻辑思维能力。锐的洞察力和比较强的逻辑思维能力。相关的数据和资料相关的数据和资料：包括病人的生理、病理状况，详细的用：包括病人的生理、病理状况，详细的用药情况和与监测药物有关的各种信息（

58、药动学和药效学）。药情况和与监测药物有关的各种信息（药动学和药效学）。加强与加强与临床医生临床医生的合作，因为临床对病人的病情、用药和药的合作，因为临床对病人的病情、用药和药效观察比较清楚。必要时也应该访问效观察比较清楚。必要时也应该访问病人或其家属病人或其家属，从临床，从临床获得有意义的第一手资料。获得有意义的第一手资料。 5. 书面报告及主要内容书面报告及主要内容 （1）资料）资料病人姓名、年龄、性别、体重、药品名；病人姓名、年龄、性别、体重、药品名；正在执行的给药时间表；正在执行的给药时间表；本次监测准确的采血时刻；本次监测准确的采血时刻；本次血药浓度实测值；本次血药浓度实测值；监测药物

59、的参考浓度范围。监测药物的参考浓度范围。 （2）分析）分析 分析病人药代动力学参数，并与文献资料的比较；分析病人药代动力学参数，并与文献资料的比较；分分析析血血药药浓浓度度实实测测值值与与预预期期值值的的误误差差情情况况和和引引起起误误差差的的可可能能原原因因（用用药时程尚未达到稳态、采样时间安排不当等药时程尚未达到稳态、采样时间安排不当等） （3）结论）结论 治疗方案是否合适；治疗方案是否合适；采样方案是否正确；采样方案是否正确；如用药方案或采样方案需要改正，应如何改变。如用药方案或采样方案需要改正，应如何改变。个体化给药方案的制定明确诊断明确诊断选择药物及给药途径选择药物及给药途径确定给药

60、方案确定给药方案给药给药观察临床效果观察临床效果 测定血药浓度测定血药浓度处理数据，求出药动学参数。处理数据，求出药动学参数。必要时根据药动学参数调整给药方案必要时根据药动学参数调整给药方案TDM分析方法的建立和质量控制一、TDM分析方法的建立1. 建立分析方法前需要了解的事项建立分析方法前需要了解的事项- 药物的主要理化性质药物的主要理化性质- 药物在体内的状态、代谢及药动学参数药物在体内的状态、代谢及药动学参数- 分析方法应用的目的分析方法应用的目的2. 样品的种类、采集和贮存样品的种类、采集和贮存- 血样血样- 尿样尿样- 唾液唾液- 其他，如胆汁、组织样品其他，如胆汁、组织样品- 样品

61、贮存的条件和贮存稳定性考察样品贮存的条件和贮存稳定性考察3. 测定前样品的处理（1） 生物样品的特点生物样品的特点- 样品基质复杂- 浓度低- 浓度变化范围大 - 可供分析的样品有限 - 样品易变化 - 往往要求快速报告分析结果（3 ）前处理需要考虑的问题）前处理需要考虑的问题- 药物的理化性质- 待测物的浓度范围- 活性代谢物- 药物测定的目的- 样品性质- 分析检测方法（4 ）前处理方法）前处理方法去除蛋白去除蛋白- 沉淀剂和变性剂- 酶消化法- 超滤法液液萃取液液萃取-萃取原理：被萃取药物在生物样品基质（水相）和萃取溶剂（有机相）之间分配系数差异。- 常用萃取溶剂：正己烷、乙醚、乙酸乙酯

62、、氯仿、苯、二氯甲烷、叔丁基甲醚- 各自特点，注意有机溶剂的毒性- 溶液pH 的调节：对于弱酸性或弱碱性药物，pH值低于或高于其pKa 2以上,药物易于萃取至有机溶剂；- 提取溶剂的选择- 提取技术- 提取溶剂的蒸发浓缩固相萃取固相萃取- 原理：原理：被萃取药物和生物样品基质在萃取柱填料（固相）和洗脱溶剂（液相）之间分配系数差异- 固相萃取柱及固相萃取装置- 流程：流程：Waters HLB 柱的基本操作步骤：中性药物：柱活化平衡上样冲洗杂质洗脱；碱性药物：柱活化平衡上样冲洗杂质碱冲洗酸洗脱；酸性药物：柱活化平衡上样冲洗杂质酸冲洗碱洗脱。-特点：特点：萃取率高、本底干净、重复性好。固固相相萃萃

63、取取柱柱示示意意图图固相萃取一般流程固相萃取一般流程固相萃取一般流程（续）0.5%0.5%n固相微萃取（SPME）技术 克服了以前传统的样品预处理技术的缺陷，它无需溶剂和复杂装置，能直接从液体或气体样品中采集挥发和非挥发性的化合物，可以直接在GC，GC/MS和HPLC上分析。n光谱法UVFLUHPLCHPCEGCTLCRIAEIAFPIAn n色谱法n n免疫法n n微生物法4. 分析方法和流程的建立发展趋势发展趋势多种分析手段仪器联用系统分析方法自动化微量分析在线分析1. 概念概念质量：是反映产品和服务满足明确和隐含需要的能力质量：是反映产品和服务满足明确和隐含需要的能力的特征和特性的总和的

64、特征和特性的总和质量保证：为满足质量要求所进行的所有活动质量保证：为满足质量要求所进行的所有活动TDM质量：准确及时的分析结果、对结果有效充分质量：准确及时的分析结果、对结果有效充分的解释。的解释。优良实验室管理（优良实验室管理（GLPGLP）是保证测定质量的关键。）是保证测定质量的关键。 （五）药物浓度监测的实施与质量控制（1 1）色谱条件的选择：）色谱条件的选择：固定相：固定相：LC- C18 C8 NHLC- C18 C8 NH2 2 CN CN2 2 Si Si GC- GC- 弱极性、中极性、强极性弱极性、中极性、强极性流动相：流动相：LC-LC-甲醇、乙腈、水、缓冲盐甲醇、乙腈、水

65、、缓冲盐 GC- He, NGC- He, N2 2 H H2 2检测器：检测器：LC-UVD FLD ECD MSD LC-UVD FLD ECD MSD GC-FID NPD ECD MSD GC-FID NPD ECD MSD建立分析方法（2）萃取回收率 （70%）药物自蒸馏水中萃取 - 初步确定合适的萃取条件 - 考察萃取过程中的试剂 - 初步了解被测组分的萃取回收率药物自血浆中萃取 - 确定合适的萃取条件和匹配的色谱条件 - 考察被测组分自血浆的萃取回收率 - 初步了解可测定的最低血浆药物浓度（3）标准曲线：线性程度：线性拟合方程 外标法:AreaConc. 内标法:SArea/IA

66、reaConc 是否需要权重 相关关系0.99线性范围：浓度涵盖所有待测定样品浓度范围 6-8个浓度梯度（4）准确度（回收率）回收试验：R=M/A100%加样回收试验： R=(M-P)/A100%要求： 代表性原则：包括低、中、高三个水平的浓度 重 复 原 则：每浓度实验多次3-5次 准 确 原 则：一般浓度 85%-115% 检测限附近 80%-120%（5）精密度：日内RSD日间RSD要求： 代表性原则：包括低、中、高三个水平的浓度 重 复 原 则：每浓度实验多次3-5次 精 密 原 则：一般浓度 RSD 15% 检测限附近RSD 20%（6） 检测限（灵敏度）：LLOD：限度检验效能指标

67、。反应方法的灵敏度从背景中获得信号，样品中药物应具有的最低浓度为S/N=3 时的样品药物浓度LLOQ：定量分析效能指标，一般指标准曲线的最低点在具有一定可靠性的前提下，样品中药物应具有的最低浓度 为RSD 20%，Recovery=80%-120%时的样品药物浓度（7）专属性：生物基质的影响药物代谢产物的影响合并用药的影响（8 8）测定实际样品）测定实际样品2. TDM质量保证体系的建立（1）室内质控-实验室内为达到质量要求的操作技术和活动-包括从收集标本到报告结果的所有活动和步骤-用统计学方法、连续地评价本实验室工作的可靠程度-目的在于监控过程，排除所有环节中不良因素室内质控准备工作室内质控

68、准备工作- 培训工作人员：良好素质，专业培训，连续性 - 建立SOP：操作规程化- 仪器的检定与校正：天平、量具、分析仪器，定期校验，专人负责- 质控品的选择：更换试剂校对- 质控品的正确使用和保存实际操作实际操作 - 设定靶值：确定总平均值 X- 设定控制限：确定误差范围R ，2SD； 3SD；- 绘制质控图和记录质控结果：中心线、2SD 警告线、3SD失控线- 质控规则的应用室内质控室内质控-多数点应在中心线附近-点的分布大致为正态分布点的排列未发现有规律和异常-连续25个点应全部在管理线内，连续35个点只允许有1个点在 管理线外-连续7个点以上，或连续11个点中有10个，或连续20个点中有16个在中心线的同侧要查原因失控情况的处理和原因分析失控情况的处理和原因分析- 失控情况的处理 填写失控报告 分析原因, 重作质控样品 确定能否发分析报告- 失控原因分析 试剂过期或污染 校准品或质量控过期 仪器不良 人员操作失误 谢谢 谢！谢！