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1、LOGOSmad3Smad3在马兜铃酸肾病中在马兜铃酸肾病中的作用机制的作用机制 参考文献：参考文献：1.Diverse Roles of TGF-/Smads in Renal Fibrosis and Inflammation2.Mechanism of chronic aristolochic acid nephropathy:role of Smad3马兜铃酸肾病马兜铃酸肾病u马马兜兜铃铃酸酸肾肾病病 AAN ：为为一种全球性疾病，是运用中一种全球性疾病，是运用中草草药严药严重的并重的并发发症之一。然而症之一。然而导导致致AAN的的发发病机制尚病机制尚不明确，不明确，继继而妨碍了而妨碍
2、了对对AAN病人的有效治病人的有效治疗疗。uAAN的特征是的特征是进进展性展性肾损肾损害，表害，表现为肾现为肾小管坏死、萎小管坏死、萎缩缩和和肾间质纤维肾间质纤维化。化。肾肾小管小管间质纤维间质纤维化是化是终终末期末期肾肾病的病的共同特征，也是决共同特征，也是决议肾脏议肾脏疾病疾病进进展的主要要素，因此深展的主要要素，因此深化研化研讨肾纤维讨肾纤维化化发发生开展的机制尤生开展的机制尤为为重要。重要。u肾脏纤维肾脏纤维化是以胶原蛋白合成添加、降解遭到抑制化是以胶原蛋白合成添加、降解遭到抑制导导致致大量大量细细胞外基胞外基质质 ECM 不恰当堆不恰当堆积积和分布和分布为为特点。特点。TGF-TGF
3、-的生物特性的生物特性u各种各种肾病开展至病开展至肾纤维化与多种化与多种细胞因子有关，其中胞因子有关，其中转化生化生长因子因子TGF-/smad信号通路在信号通路在肾纤维化化过程中起重要作用，并且被公以程中起重要作用，并且被公以为是最主要的致是最主要的致纤维化通化通路。路。uTGF-(transforming growth factor beta,转化生化生长因子因子-beta)是一种多向性、多效性的是一种多向性、多效性的细胞因子，以自分泌或旁分泌的方式胞因子，以自分泌或旁分泌的方式经过细胞外表的受胞外表的受体信号体信号转导途径途径调理理细胞的增殖、分化、凋亡，胞的增殖、分化、凋亡，对细胞胞外
4、基外基质的合成、的合成、创伤的修复、免疫功能等有重要的的修复、免疫功能等有重要的调理理作用。作用。Smads Smads 蛋白蛋白SmadsSmads蛋白是蛋白是TGF-/ SmadTGF-/ Smad信号通路中信号通路中细细胞内信号胞内信号转导转导的中的中介分子。介分子。SMAD蛋白家族受体调理型SMAD蛋白Receptor regulate smad共同调理型smad蛋白Common mediator smad抑制型smad蛋白Inhabitory smadSmad2、smad3Smad1、smad5smad8、smad9smad4Smad6、smad7红色色标志者志者为参与参与TGF-T
5、GF-信号信号传导的的smadsmad蛋白。蛋白。TGF-/smad3信号通路的信号通路的传导传导信号通路在传导中的信号通路在传导中的3 3个主要步骤个主要步骤1 1、TGF-TGF-与与细胞外表受体胞外表受体结合，构成异源三聚体合，构成异源三聚体2 2、异源三聚体经过激活、异源三聚体经过激活R-smadR-smad蛋白，将信号传导蛋白，将信号传导至胞浆内至胞浆内3 3、R-smadR-smad与与Co-smadCo-smad结合后，转移至细胞核，与结合后，转移至细胞核，与靶基因结合，调理蛋白合成靶基因结合，调理蛋白合成TGF-/smad3信号信号转导转导表示表示图图u本研本研讨进展了一展了一
6、项假假设实验，即假，即假设转化生化生长因子因子/Smad3是是导致慢性致慢性AAN的关的关键途径。途径。u本研本研讨分分为体内体内实验和体外和体外实验两部分。两部分。体内体内实验技技术道路道路IHC、RT-PCRT-IHC、western blot 、RT-PCRIHC、RT-PCRTGF-I，P-Smad2/3-SMA 和E-cadCol.I和Col.III肾功能检测建立smad3 WT/KO CAAN模型血清肌酐试剂盒考马斯-尿蛋白结果果结果结果B：4周后，smad WT小鼠Scr含量升高显著，smad3 KO升高减弱。C：整体程度上smad3KO小鼠蛋白尿量添加不明显。阐明smad3KO
7、对肾损 伤有维护作用Smad3 WT Col1和3大量积聚，Smad3 KO未出现积聚景象。结果结果E-cad和-SMAA和B:smad3 WT腹腔注射4周 C:Smad3 KO腹腔注射4周A.B.D:-SMA肌成纤维细胞大量蓄积C.D:蓄积程度减弱。结果结果WT型-SMA表达显著添加，KO型没有出现添加显著景象。体外实验总结体外实验总结 小结一小结一u以上以上实验结果果阐明明smad3蛋白在蛋白在CAAN过程中有程中有重要作用，基因敲除重要作用，基因敲除Smad3后可明后可明显减少减少CAAN模型中模型中Scr和蛋白尿的含量，有效降低和蛋白尿的含量，有效降低Col.I、Col.III、-SM
8、A、TGF-1、P-smad2/3的的表达量，从而抑制了表达量，从而抑制了细胞外基胞外基质大量蓄大量蓄积呵斥的呵斥的纤维化以及其它更化以及其它更严重的重的肾脏疾病。疾病。体外实验体外实验细胞实验细胞实验AAAA处置处置RETCRETCAA处置导入siRNA后的RETCTGF-1、Col.I、-SMA、E-cadAA处置正常处置正常TEC以上细胞外实验阐明AA对肾小管上皮细胞有较严重的损伤作用，导致Col.I、-SMA、TGF-1大量蓄积，E-cad表达量下降。AA处置正常处置正常TECA表示smad2的siRNA不影响smad3的表达，smad3的siRNA不影响smad2的表达然后进展B实验
9、B表示添加AA和S3-siRNA的细胞中，-SMA下降，E-钙粘蛋白升高；添加AA和S3-siRNA的细胞中，-SMA和E-钙粘蛋白都有上升趋势。AA处置导入干扰处置导入干扰RNA的的TECsmad3 siRNA：本该升高的降低了，smad2 siRNA：原来升高的如今还是升高。结论结论 小结二小结二uAAAA可引起大鼠可引起大鼠肾小管上皮小管上皮细胞胞Col.ICol.I、-SMA-SMA、TGF-1TGF-1上上调，引起，引起E-E-钙粘蛋白下粘蛋白下调，且都呈，且都呈现一一定的定的时间依依赖性和性和浓度依度依赖性。参与干性。参与干扰RNARNA后后证明明smad3smad3干干扰RNARNA可以有效的抑制可以有效的抑制Col.ICol.I、-SMA-SMA、TGF-1TGF-1的上的上调及及E-E-钙粘蛋白的下粘蛋白的下调，而，而smad2smad2没没有明有明显作用。作用。总结总结uTGF-/Smad3TGF-/Smad3信号通路在信号通路在CAANCAAN有重要作用，特有重要作用，特异性地敲除异性地敲除smad3smad3基因可有效防止基因可有效防止AAAA引起引起肾功能功能损伤和和严重的重的肾脏纤维化及其它化及其它肾脏疾病，并疾病，并证明明smad3smad3在在AANAAN中能中能够具有治具有治疗潜力。潜力。请批判指正请批判指正谢谢 谢谢! !
