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1、颗粒体病毒颗粒体病毒(GV)冯建 马俊锋颗粒体病毒颗粒体病毒(GV)v颗粒体病毒颗粒体病毒（granulosis virus，简称，简称GV）在分类上属杆状病毒科在分类上属杆状病毒科B亚组，是亚组，是有包涵体有包涵体的的昆虫病毒。昆虫病毒。v目前为止国内外发现目前为止国内外发现GV约约130株，中国发现株，中国发现约约42株，其中株，其中26株为首次发现。株为首次发现。GV的一般形态特征的一般形态特征v包涵体称包涵体称颗粒体颗粒体(granule) 或或荚膜荚膜(capsule)。v先在被感染细胞的核内形成，但当核膜破裂后可溢先在被感染细胞的核内形成，但当核膜破裂后可溢出到细胞质内。出到细胞质
2、内。v包涵体很小包涵体很小。在电子显微镜下观察，颗粒体的形状。在电子显微镜下观察，颗粒体的形状有卵形、椭圆形、长卵形等，通常直径为有卵形、椭圆形、长卵形等，通常直径为0.10.3m，长，长0.31.0m。每个包涵体内。每个包涵体内一般只有一一般只有一个病毒粒子个病毒粒子。有时也出现不正常的形状。有时也出现不正常的形状。左图：霜天蛾左图：霜天蛾GV的形态的形态右图：小菜蛾右图：小菜蛾GV经碱处理后经碱处理后的病毒粒子的病毒粒子GV的理化性状的理化性状v不溶于水和一般的有机溶剂如乙醚、乙醇、不溶于水和一般的有机溶剂如乙醚、乙醇、丙酮、二甲苯等。丙酮、二甲苯等。v遇强酸或强碱，包涵体能迅速溶解，并可
3、使遇强酸或强碱，包涵体能迅速溶解，并可使病毒粒子变性而失去侵染力。病毒粒子变性而失去侵染力。GV的理化性状的理化性状v可在室温下保存可在室温下保存5年以上而不失侵染力。年以上而不失侵染力。v高温可使其失活。高温可使其失活。v冰冻无多大危害。较低的温度有可能延长贮冰冻无多大危害。较低的温度有可能延长贮存的时期。存的时期。v紫外线或其他辐射线能使完整的病毒失活。紫外线或其他辐射线能使完整的病毒失活。v用稀碱处理后可获得完整和具侵染性的病毒用稀碱处理后可获得完整和具侵染性的病毒粒子。粒子。GV对昆虫的侵染对昆虫的侵染v感病特征：感病特征： 感染初期无明显病征感染初期无明显病征 之后出现反应迟钝和停止
4、取食之后出现反应迟钝和停止取食 随后虫体颜色发生改变，血液渐变乳白随后虫体颜色发生改变，血液渐变乳白 感病虫体可能膨大或收缩感病虫体可能膨大或收缩 已死幼虫体壁脆弱，破后流出大量颗粒体。已死幼虫体壁脆弱，破后流出大量颗粒体。 染病幼虫可存活较长时间。染病幼虫可存活较长时间。 病死虫体有时用腹足倒挂枝叶上，呈病死虫体有时用腹足倒挂枝叶上，呈“”形。形。GV的感病特征的感病特征v染病幼虫常于染病幼虫常于幼虫期幼虫期即死，有时也可活至蛹即死，有时也可活至蛹期或成虫期。从染病到死亡所经时间因虫而期或成虫期。从染病到死亡所经时间因虫而异。一般异。一般45天，可长至天，可长至34天，如粘虫。幼天，如粘虫。
5、幼虫龄期、侵染剂量、温度等因素也能影响这虫龄期、侵染剂量、温度等因素也能影响这段时期的长短。段时期的长短。GV的感染途径的感染途径v通过通过口服口服进入易感虫体，颗粒体在中肠中溶进入易感虫体，颗粒体在中肠中溶解，游离的病毒粒子通过肠道柱形细胞的微解，游离的病毒粒子通过肠道柱形细胞的微绒毛而侵入，在这些细胞核中增殖，新形成绒毛而侵入，在这些细胞核中增殖，新形成的颗粒体病毒释放于血淋巴中而导致对其他的颗粒体病毒释放于血淋巴中而导致对其他组织的继发感染。组织的继发感染。v虫体外伤和寄生天敌产卵可引起虫体外伤和寄生天敌产卵可引起GV对皮下感对皮下感染，也可经卵垂直传播。染，也可经卵垂直传播。GV的专化
6、性的专化性v颗粒体病毒的专化性较强，交叉感染的情况甚为少颗粒体病毒的专化性较强，交叉感染的情况甚为少见，一般认为颗粒体病毒是包涵体病毒含见，一般认为颗粒体病毒是包涵体病毒含DNA的各的各类中专化性最强的一类。类中专化性最强的一类。v以往尚无颗粒体病毒能在植物或其他动物细胞中增以往尚无颗粒体病毒能在植物或其他动物细胞中增殖的报道。近年我国用小菜蛾细胞系殖的报道。近年我国用小菜蛾细胞系BCIRL-Px2-HNU3复制小菜粉蝶复制小菜粉蝶GV和用家蚕细胞系和用家蚕细胞系Bm-21E-HNU5复制小菜蛾复制小菜蛾GV成功。成功。GV的交叉感染现象的交叉感染现象v鳞翅目幼虫可合并感染鳞翅目幼虫可合并感染
7、NPV和和GV两种病毒。两种病毒。如黄地老虎、菜粉蝶、粘虫等可同时感染颗如黄地老虎、菜粉蝶、粘虫等可同时感染颗粒体病毒和粒体病毒和NPV。粘虫的六龄幼虫如单感染。粘虫的六龄幼虫如单感染NPV，死亡率，死亡率3.4，单感染颗粒体病毒，死，单感染颗粒体病毒，死亡率亡率20%，如二种合并感染，则死亡率为，如二种合并感染，则死亡率为80，死体为，死体为NPV病征，体内主要是核型多角病征，体内主要是核型多角体，也有些同时存在颗粒体。体，也有些同时存在颗粒体。昆虫病毒的生产昆虫病毒的生产v 病毒为专性寄生病原，至今尚未研究出能在病毒为专性寄生病原，至今尚未研究出能在人工培养基上生长，只能在活细胞中增殖。人
8、工培养基上生长，只能在活细胞中增殖。因此，目前国内外应用于害虫防治的昆虫病因此，目前国内外应用于害虫防治的昆虫病毒制剂主要是通过活虫体增殖和细胞培养法毒制剂主要是通过活虫体增殖和细胞培养法繁殖。繁殖。 在昆虫活体中大量增殖昆虫病毒在昆虫活体中大量增殖昆虫病毒 3种途径：种途径：v直接在自然种群中繁殖直接在自然种群中繁殖 v从野外采回大量活虫接种繁殖从野外采回大量活虫接种繁殖 v在室内条件下饲育大量害虫接种繁殖在室内条件下饲育大量害虫接种繁殖 可采用自然饲料或人工饲料。可采用自然饲料或人工饲料。在细胞系中大量增殖昆虫病毒在细胞系中大量增殖昆虫病毒 用组织培养增殖的病毒在致病性、专化性及其用组织培
9、养增殖的病毒在致病性、专化性及其他特性方面有无变异，尚待进一步研究。同他特性方面有无变异，尚待进一步研究。同时，因组织培养法要求条件较严格，大量增时，因组织培养法要求条件较严格，大量增殖病毒还存在不少问题，目前尚未达到实用殖病毒还存在不少问题，目前尚未达到实用阶段。阶段。 颗粒体病毒杀虫剂颗粒体病毒杀虫剂v我国在基础和应用方面研究较详细的颗粒体我国在基础和应用方面研究较详细的颗粒体病毒有菜粉蝶病毒有菜粉蝶GV，小菜蛾，小菜蛾GV，黄地老虎，黄地老虎GV，茶小卷叶蛾，茶小卷叶蛾GV等，其中菜粉蝶等，其中菜粉蝶GV列入国列入国家家“七五七五”攻关项目进行研究，并完成了中试攻关项目进行研究，并完成了
10、中试生产生产。颗粒病毒杀虫剂的生产实例颗粒病毒杀虫剂的生产实例菜粉蝶菜粉蝶GV杀虫剂的生产杀虫剂的生产v 菜粉蝶为世界性重要害虫。其幼虫又名菜青菜粉蝶为世界性重要害虫。其幼虫又名菜青虫，是我国分布最普遍，为害最严重，经常虫，是我国分布最普遍，为害最严重，经常成灾的害虫，幼虫偏嗜十字花科蔬菜，幼虫成灾的害虫，幼虫偏嗜十字花科蔬菜，幼虫将叶片咬成孔洞和缺刻，严重发生时可将叶将叶片咬成孔洞和缺刻，严重发生时可将叶片全部吃光。片全部吃光。菜粉蝶菜粉蝶GV的生产工艺的生产工艺v1 人工饲料饲养菜青虫人工饲料饲养菜青虫 将菜粉蝶卵于人工模拟产卵卡上孵化后，人工饲料将菜粉蝶卵于人工模拟产卵卡上孵化后，人工饲
11、料饲养至饲养至3龄，大部分用来增殖病毒，小部分继续饲龄，大部分用来增殖病毒，小部分继续饲养传代，每代养传代，每代2128天。天。v2 感染回收感染回收 将饲养的将饲养的3龄菜青虫防于特制的塑料篮子中饥饿龄菜青虫防于特制的塑料篮子中饥饿34小时，将病毒用电动喷雾器均匀喷在菜叶上，喂小时，将病毒用电动喷雾器均匀喷在菜叶上，喂食菜青虫。一般经过食菜青虫。一般经过67天后，菜青虫开始感病死天后，菜青虫开始感病死亡，及时收集病虫。亡，及时收集病虫。菜粉蝶菜粉蝶GV的生产工艺的生产工艺v3 颗粒体的提取颗粒体的提取 经感染的病虫用经感染的病虫用0.7NaCl浸泡，投入电动匀浆机。浸泡，投入电动匀浆机。将虫
12、浆加入将虫浆加入510倍的盐水，电动搅拌机搅拌，用倍的盐水，电动搅拌机搅拌，用3080目尼龙过滤目尼龙过滤3次。滤液次。滤液2000r/min离心离心30min，收集沉淀。，收集沉淀。v5 拌和、分装拌和、分装 将标定含量的病毒原粉中加入展着剂，粘着剂，保将标定含量的病毒原粉中加入展着剂，粘着剂，保护剂等拌和均匀，定量分装。护剂等拌和均匀，定量分装。v6 产品质量检验产品质量检验GV在害虫防治上的应用在害虫防治上的应用加拿大研究菜青虫的黄绒茧蜂能在寄主种群中加拿大研究菜青虫的黄绒茧蜂能在寄主种群中传播传播GV。利用病毒防治害虫一方面可以起到微生物杀虫利用病毒防治害虫一方面可以起到微生物杀虫剂的
13、短期防治作用，另一方面使用后有可能剂的短期防治作用，另一方面使用后有可能使病毒长期存在于农林生态系中，作为一类使病毒长期存在于农林生态系中，作为一类被引入的生态因子而起调节害虫种群密度的被引入的生态因子而起调节害虫种群密度的作用。作用。 常规方法施用或释放带毒昆虫散布一常规方法施用或释放带毒昆虫散布一定限量的病毒后，病原可在昆虫种群间自行定限量的病毒后，病原可在昆虫种群间自行传播。毒饵剂和散布带毒虫体具有较高的经传播。毒饵剂和散布带毒虫体具有较高的经卵巢传播的潜力，其他昆虫或寄生物和捕食卵巢传播的潜力，其他昆虫或寄生物和捕食者有机械传播病毒的潜能。者有机械传播病毒的潜能。局限性局限性v昆虫病毒对害虫的防治也有其局限性，如感昆虫病毒对害虫的防治也有其局限性，如感染的潜伏期较长，一般从感染到致死需染的潜伏期较长，一般从感染到致死需714天或更长时间，由于专化性较强，杀虫谱性天或更长时间，由于专化性较强，杀虫谱性较窄。如仅用于短期速效性防治，在经济上较窄。如仅用于短期速效性防治，在经济上和当前所获效果上不如高效低毒的化学农药，和当前所获效果上不如高效低毒的化学农药，如从害虫综合治理要求考虑，利用病毒防治如从害虫综合治理要求考虑，利用病毒防治害虫具有重要的意义和前途。害虫具有重要的意义和前途。谢谢!Thankyou!
