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1、任务任务1 1 丙种球蛋白分离制备方案的制定丙种球蛋白分离制备方案的制定生药生药1111_11_ 1111_11_ 第七组第七组 刘行行刘行行目录u 丙种球蛋白的基本概述丙种球蛋白的基本概述u 丙种球蛋白的作用丙种球蛋白的作用u Sephadex G-50分离制备丙种球蛋分离制备丙种球蛋白白u丙种球蛋白的日常应用丙种球蛋白的日常应用u丙种球蛋白的临床实践丙种球蛋白的临床实践 丙种丙种球蛋白球蛋白预防传染预防传染性性肝炎肝炎，预防，预防麻疹麻疹等等病毒病毒性疾病感染，治性疾病感染，治疗先天性丙种球蛋白疗先天性丙种球蛋白缺乏症缺乏症 ，与抗生素，与抗生素合并使用，可提高对合并使用，可提高对某些严重
2、某些严重细菌细菌性和病性和病毒性疾病感染的疗效。毒性疾病感染的疗效。 预防传染性肝炎，如乙肝、甲肝等。预防传染性肝炎，如乙肝、甲肝等。 用于麻疹、水痘、带状疱疹等病毒感染和菌用于麻疹、水痘、带状疱疹等病毒感染和菌感染的防治。感染的防治。 用于哮喘、过敏性鼻炎等内源性过敏性疾病用于哮喘、过敏性鼻炎等内源性过敏性疾病 与抗生素合并使用，可提高对某些严重细与抗生素合并使用，可提高对某些严重细 菌性和病毒性疾病感染的疗效。菌性和病毒性疾病感染的疗效。 主要治疗先天性丙种球蛋白缺乏症和免疫缺主要治疗先天性丙种球蛋白缺乏症和免疫缺陷病。陷病。 Sephadex G-50分离制备丙种球蛋白分离制备丙种球蛋白
3、 一、简介一、简介 SephadexSephadex是由葡聚糖通是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。的三维网状凝胶颗粒。 SephadexSephadex凝胶按交联度凝胶按交联度不同，用不同，用SephadexSephadex G G加加一个数字来区别型号，一个数字来区别型号，数字越小，表示介质交数字越小，表示介质交联度越大，分级范围越联度越大，分级范围越小，反之亦然。小，反之亦然。 1、实验器材、实验器材 层析柱（玻璃柱）层析柱（玻璃柱）、铁架台、铁架台 2、实验材料、实验材料 样品液：样品液：0.05%核黄素核黄素(VitB2)与与6%丙种丙种球蛋白等量
4、混合置球蛋白等量混合置4oC保存。保存。 3、实验试剂：、实验试剂： (1) 洗脱液洗脱液(pH7.2 ;0.1mol/L磷酸盐缓冲磷酸盐缓冲液）液）:取取0.1mol/L磷酸氢二钠磷酸氢二钠720ml和和0.1mol/L磷酸二氢钠磷酸二氢钠280ml,混匀。混匀。 五、实验过程五、实验过程 1 、 取直径取直径0.81.2cm，长度为，长度为25cm的层析的层析柱，在上口箍橡皮筋，出口处装上乳胶管，柱内加柱，在上口箍橡皮筋，出口处装上乳胶管，柱内加注蒸馏水注蒸馏水23ml，排出乳胶管内的气泡，抬高乳，排出乳胶管内的气泡，抬高乳胶管防止柱内的蒸馏水排空。自顶部缓缓加入经膨胶管防止柱内的蒸馏水排
5、空。自顶部缓缓加入经膨胀的葡聚糖胀的葡聚糖G-50悬液。待底部凝胶沉积悬液。待底部凝胶沉积23cm时将乳胶管放低，仍继续加入上述悬液至凝胶层积时将乳胶管放低，仍继续加入上述悬液至凝胶层积至至18cm高度即可。操作过程中，应防止气泡与分高度即可。操作过程中，应防止气泡与分层现象的发生。让凝胶自然下沉，使表层平整。待层现象的发生。让凝胶自然下沉，使表层平整。待凝胶柱层稳定后，以洗脱液凝胶柱层稳定后，以洗脱液(蒸馏水蒸馏水)洗柱洗柱5分钟，分钟，调节流速至调节流速至4滴每分钟。滴每分钟。 2. 待蒸馏水流至柱面平时，待蒸馏水流至柱面平时，(注意，不可使柱面干注意，不可使柱面干掉掉)，马上沿层析柱内壁
6、小心加，马上沿层析柱内壁小心加4滴样品于柱床面，滴样品于柱床面，注意尽量不使床面搅动，马上加入注意尽量不使床面搅动，马上加入12倍于样晶倍于样晶体积的蒸馏水，反复两次后，可加大量蒸馏水连续体积的蒸馏水，反复两次后，可加大量蒸馏水连续洗脱，这样可以使样品稀释最小。洗脱，这样可以使样品稀释最小。 3样品一旦加入后马上用量筒或刻度离心管收集样品一旦加入后马上用量筒或刻度离心管收集流出液，柱床上不断加蒸馏水，待红色流出液，柱床上不断加蒸馏水，待红色(血红蛋白血红蛋白)流出一半时记录毫升数，此为血红蛋白流出一半时记录毫升数，此为血红蛋白Ve也为也为Vo。继续收集流出液，待黄色继续收集流出液，待黄色(核黄
7、素核黄素)流出一半时记录流出一半时记录体积，此为核黄素体积，此为核黄素Ve。 4测出柱床体积测出柱床体积(Vt)，外水体积，外水体积(Vo)内水体内水体积积(Vi)，及核黄素的洗脱体积，及核黄素的洗脱体积(Ve)。并计算。并计算出出Hb及鱼精蛋的分配系数及鱼精蛋的分配系数(Kd)。 5用蒸馏水反复加在柱床上面，洗柱用蒸馏水反复加在柱床上面，洗柱10分分钟然后将柱内凝胶回收入凝胶瓶内。钟然后将柱内凝胶回收入凝胶瓶内。 应用静注丙种球蛋白治疗小儿病毒性心肌炎静注丙种球蛋白治疗小儿病毒性心肌炎静注丙种球蛋白治疗格林一巴利综合症静注丙种球蛋白治疗格林一巴利综合症静脉注射用丙种球蛋白治疗慢性结肠炎静脉注射用丙种球蛋白治疗慢性结肠炎静脉注射丙种球蛋白防治早产儿高胆红素血静脉注射丙种球蛋白防治早产儿高胆红素血症的临床研究症的临床研究静注丙种球蛋白辅治婴幼儿肺炎的临床及免静注丙种球蛋白辅治婴幼儿肺炎的临床及免疫功能观察疫功能观察
