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1、实验二球菌，杆菌化脓性球菌化脓性球菌革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌球菌革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌，革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌， 淋病奈瑟淋病奈瑟菌菌N. gonorrhoeaeN.meningitidisS. pneumoniaestaphylococcusStreptococcus菌落中等大小、不透明菌落中等大小、不透明 、表面光滑、边缘整齐、表面光滑、边缘整齐完全溶血、完全溶血、 金黄色 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 不溶血、不溶血、 白白色 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌 不溶血、不溶血、柠檬色 腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌 葡萄球菌鉴别葡萄球菌鉴别菌落小
2、、半透明、表面菌落小、半透明、表面光滑、边缘整齐光滑、边缘整齐G+ G+ 、链状、链状 完全溶血完全溶血 乙型乙型乙型乙型溶血性溶血性链球菌链球菌链球菌链球菌不溶血不溶血 丙型丙型丙型丙型溶血性溶血性链球菌链球菌链球菌链球菌草绿色不完全溶血环草绿色不完全溶血环甲型链球菌甲型链球菌甲型链球菌甲型链球菌 肺炎链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌 胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 -（混浊）（混浊） +（澄清）（澄清）链球菌鉴别链球菌鉴别脓汁或脓汁或喉拭子喉拭子 涂片、革兰染色、镜检涂片、革兰染色、镜检血琼脂平板血琼脂平板观察菌落特征观察菌落特征及溶血情况及溶血情况生化反应、致病力试验及药敏试验生化反应、致
3、病力试验及药敏试验脓汁标本病原性球菌的分离鉴定脓汁标本病原性球菌的分离鉴定由由脑脊液标本脑脊液标本中发现中性粒细胞内外有中发现中性粒细胞内外有G G- -双球菌双球菌，可初步诊，可初步诊断为断为脑膜炎球菌脑膜炎球菌由由泌尿、生殖系统来源的标本泌尿、生殖系统来源的标本中发现中性粒细胞内外有中发现中性粒细胞内外有G G- -双双球菌球菌，可初步诊断为，可初步诊断为淋球菌淋球菌 37 24h脓汁标本病原性球菌的分离鉴定脓汁标本病原性球菌的分离鉴定根据菌落特点及涂片检查作出初步判断，然后：菌落中等大小、完全溶血、不透明、金黄色、G+，葡萄状排列，可能是金黄色葡萄球菌，可进一步做血浆凝固酶试验和甘露醇发
4、酵试验，确定其致病力。菌落小、半透明、完全溶血、G+ 、链状，为乙型溶血性链球菌菌落小、半透明、绿色不完全溶血环，G+ 、短链状，为甲型溶血性链球菌或肺炎链球菌，通过胆汁溶菌和菊糖发酵试验进一步鉴别。葡萄球菌血浆凝固酶试验取一个载玻片，划分3格，标记1、2、3。在格内分别滴加：1：兔血浆一滴2：兔血浆一滴3：盐水一滴以接种环挑取细菌混悬于液滴中：1：金黄色葡萄球菌2：白色葡萄球菌3：金黄色葡萄球菌立即观察结果。粪便标本肠道杆菌的分离鉴定粪便标本肠道杆菌的分离鉴定克氏双糖铁克氏双糖铁培养基培养基尿、靛、动尿、靛、动培养基培养基分析结果分析结果SS 平板平板EMB平板平板挑取可疑菌落挑取可疑菌落玻
5、片凝集试验玻片凝集试验粪便粪便SSSS平板分离肠道病原菌的强选择培养基平板分离肠道病原菌的强选择培养基成分和作用成分和作用：1.1.基础培养基基础培养基：提供氮源和碳源：提供氮源和碳源2.2.胆盐、枸橼酸钠、煌绿胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。长，而对肠道致病菌抑制作用弱。3.3.乳糖，中性红乳糖，中性红（pH6.8-8.0pH6.8-8.0，红，红橙黄）橙黄） ：致病菌：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌
6、落呈红色病原菌病原菌: :小小, ,无色无色, ,半透明半透明非致病菌非致病菌: :大大, ,红色红色EMB（Eosin Methyl Blue)平板平板分离肠道病原菌的弱选择培养基分离肠道病原菌的弱选择培养基成分和作用成分和作用：1.1.基础培养基基础培养基：提供氮源和碳源：提供氮源和碳源2.2.伊红、美蓝：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道伊红、美蓝：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。致病菌抑制作用弱。3.3.乳糖，乳糖，伊红、美蓝：致病菌不分解乳糖伊红、美蓝：致病菌不分解乳糖菌落菌落无色半无色半透明透明；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈紫黑色紫
7、黑色病原菌病原菌:半透明半透明,无色无色 非致病菌非致病菌:紫黑色紫黑色克氏双糖铁培养基克氏双糖铁培养基接种方法接种方法如何观察如何观察上层含乳糖部分上层含乳糖部分乳糖发酵：致病菌红色，非致病乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色菌黄色H2S然后观察下层然后观察下层发酵葡萄糖（产酸产气）发酵葡萄糖（产酸产气）动力动力乳糖乳糖硫酸亚铁硫酸亚铁固体固体葡萄糖葡萄糖半固体半固体指示剂指示剂:酚红酚红 乳糖乳糖 葡萄糖葡萄糖 硫化氢硫化氢 尿素尿素 靛基质靛基质 动力动力大肠杆菌大肠杆菌 黄色黄色 + - - + + - - + +痢疾杆菌痢疾杆菌 红色红色 + - - +/- -+ - - +/- -伤
8、寒杆菌伤寒杆菌 红色红色 + +/- - - + +/- - - +副伤寒杆菌副伤寒杆菌 红色红色 + + - - + + - - +变形杆菌变形杆菌 红色红色 + + + +/- + + +/- +肥达试验肥达试验(Widal Test)原理：用已知伤寒沙门菌原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及甲型副伤寒、抗原，以及甲型副伤寒、肖氏沙门菌、希氏沙门菌肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。试验。用途：辅助诊断伤寒，副伤寒用途：辅助诊断伤寒，副伤寒方法
9、方法：取小试管32支，分成4排，每排8支，依次标号。于小试管内各加入0.5ml生理盐水。在每一排第1管中各加患者血清0.5ml，吸打混匀，吸取0.5ml 加入第2管作对倍稀释依次稀释至第7管弃去0.5ml ，第8管为对照。23排按同法稀释。按8.7.1列的顺序，分别对第1排各管加入伤寒H抗原0.5ml ；第2排各管加入O抗原0.5ml ；同样对第3排各管加甲型副伤寒（PA）H抗原0.5ml ；第4排各管加乙型副伤寒（PB）H抗原0.5ml 。将各管混匀，置37水浴箱中1618小时后观察结果。肥达试验肥达试验结果观察结果观察根据凝集反应的强弱，分别以“+、+、+、+”记录：+：液体清澈透明，菌体全部被凝成块，沉于管底。+：液体较透明，大部分菌体被凝集而沉于管底。+：液体稍透明，管底有少量凝集沉淀物。+：液体较混浊，可见极少量凝集物。-：液体混浊，细菌因重力下降于管底呈边缘光滑圆点（与对照管相似）。血清效价（或滴度）血清效价（或滴度）：能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（即“+”凝集）的血清最高稀释倍数，称为血清的效价。血清的效价代表着血清中抗体的含量，其效价愈高，所含抗体的量愈多。如血清最低稀释倍数（140）仍无凝集，则视为阴性或效价低于140；如血清的最高稀释倍数（11280）仍完全凝集，则示血清效价高于11280。
