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1、活性氧（活性氧（ROSROS）介导的乙醛氧化损）介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研究伤心肌致细胞凋亡的初步研究上海中山医院上海中山医院心血管病研究所心血管病研究所酒精性心肌病迅速蔓延酒精性心肌病迅速蔓延在西方世界，酒精是继发性非缺血性扩张型心肌病主要原因在西方世界，酒精是继发性非缺血性扩张型心肌病主要原因1) 据统计，成年人2/3不同程度饮酒2) 酒精性心肌病,1/3以上与酒精有关在中国，随着生活水平不断提高，酒精性代谢相关疾病增多在中国，随着生活水平不断提高，酒精性代谢相关疾病增多乙醇？乙醛？损伤心肌乙醇？乙醛？损伤心肌乙醇，乙醛诱导心肌细胞比较实验1）养化应激水平2）细胞凋亡水平转基
2、因过表达ADH或ALDH比较实验1）过表达ADH加剧心肌收缩功能障碍2）过表达ALDH减少心肌细胞凋亡乙醇 乙醛 乙酸乙醛通过何种途径损伤心肌？乙醛通过何种途径损伤心肌？心肌肥大、凋亡致功能改变心肌肥大、凋亡致功能改变遗传因素病毒感染DNA突变免疫改变T细胞杀伤心肌炎ROSROSROS途经导致静脉内皮细胞凋亡途经导致静脉内皮细胞凋亡J. Biol. Chem. 279:11244. 心肌细胞胞浆特异表达 -MHC, 200 体外心肌细胞培养体外心肌细胞培养ROSROS随乙醛诱导浓度增加的变化随乙醛诱导浓度增加的变化umol/LROSROS随乙醛诱导时间增加的变化随乙醛诱导时间增加的变化h乙醛诱
3、导心肌细胞乙醛诱导心肌细胞Bcl-2Bcl-2蛋白表达蛋白表达不同条件诱导下不同条件诱导下ROSROS的变化的变化乙醛诱导细胞培液上清乙醛诱导细胞培液上清SODSOD活性活性乙醛诱导心肌细胞实验结论乙醛诱导心肌细胞实验结论ROS介导的氧化损伤是乙醛诱导心肌细胞凋亡的主要原因乙醛较H2O2诱导产生的ROS增量水平低，提示乙醛对心肌作用为慢性氧化损伤乙醛介导的氧化损伤可能经线粒体途径发挥作用降低细胞内氧化应激水平可有效改善心肌缺氧缺血状态， 减少心肌细胞凋亡 ROS？蛋白质组学研究意义蛋白质组学研究意义筛选出差异蛋白研究与疾病的相关性SDSD鼠心力衰竭模型中鼠心力衰竭模型中ALDH2ALDH2明显
4、下调明显下调染色体定位：12q24.2 蛋白定位：线粒体内膜线粒体内膜醛脱氢酶醛脱氢酶 2 2 aldehydealdehyde dehydrogenase(ALDH2) dehydrogenase(ALDH2)线粒体功能线粒体功能ROS产生主要场所引起氧化损伤ATP能量来源抗氧化酶系凋亡和抗凋亡蛋白 Bcl家族线粒体功能线粒体功能ALDH2的mRNA 转录水平表达 Normal TransplantGAPDHALDH2心肌组织心肌组织ALDH2ALDH2活性测定结果活性测定结果RT-PCRWestern Blot在在SD鼠心衰模型中鼠心衰模型中DDDDReal time-PCR54KD36K
5、DALDH2/pAd-HM4ALDH2/pAd-HM4质粒构建质粒构建CAG poly API-PI-SceISceII- I-CeuICeuIKpnIApaIXhoI (2)SalI (2)BamHI(2)XbaI (2)SalI (2)PstI (2)?SphIHindIII (3)total 35.3kb1720bp730bp30.3kbAmprXbaI（ （ 2)ALDH21954bpEcoRPstBglBglHind0.8kb2.5kbAdeno virus genomeE3(-)(28133-30818)Adeno virus genomeE1(-)(342-3523)ITRITRPacIPacI技术路线技术路线细胞培液上清细胞培液上清DCM组组转转ALDH2*1形形 DNA ladder态态 TUNEL基基 ALDH2因因 ADH-1蛋蛋 Bcl-2家族家族白白 caspase移植心脏组织移植心脏组织 SD鼠心肌细胞鼠心肌细胞 活活 ALDH2性性 ROS对照组对照组对照组对照组乙醛干预乙醛干预转转ALDH2*2未转未转未干预未干预通通 MAPK路路 RAS总结陈词总结陈词乙醛乙醛 - 氧化损伤氧化损伤ROS心肌凋亡心肌凋亡-功能障碍功能障碍MAPK信号通路信号通路扩张型心肌病扩张型心肌病?
