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1、实实 验验 五五实验四实验四 微生物的显微生物的显微镜直接计数法和微镜直接计数法和大小的测定大小的测定 实验目的实验目的学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。微镜下测定微生物大小的方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。方法。实验材料实验材料显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。实验步骤实验步骤测定酵母菌细胞的大小测定酵母菌细胞的大小测定的工具：目镜测微尺测
2、定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺镜台测微尺目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。目镜测微尺的校正：在目镜测微尺的校正：在40镜下，看清镜台测镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的
3、算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10m，所以可得所以可得目尺每格长度目尺每格长度(m)=（台尺格数台尺格数10）/目尺格数目尺格数菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在40镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。酵母菌酵母菌显微直接计数显微直接计数 方法：活菌计数法方法：活菌计数法平板菌落计数法；总菌计数平板菌落计数法；总菌计数法法血球计数板或霍瑟（血球计数板或霍瑟（Pero
4、ff Hausser）细菌计细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。 1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。盖血盖片。 2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。气泡。3.用用10镜观察并将计数室移至视野中央。镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在在10镜下计数：计数镜下计数：计数4个（或个（或5个）中格的平个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上均值，然后
5、求得每个中格的平均值。乘上16（或（或25）就得出计数区总菌数，最后再换）就得出计数区总菌数，最后再换算到每算到每mL菌液中的含菌数。菌液中的含菌数。5.注意事项：注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计上不计下，计左不计右。出芽计一半计一半实验结果实验结果目镜测微尺标定结果：40镜下倍目镜测微尺每格长度是 m。菌号酵母的直径大小测定结果目镜测微尺格数实际直径/m12345均值将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。各中格中菌数TD二室平均值个/ml12345第一室第二室问题与讨论问题与讨论为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？校正？在显微镜下直接测定微生物数量有什么在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？优缺点？
