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1、课题3分解纤维素的微生物的分离专题专题2微生物的培养与应用微生物的培养与应用学习目标学习目标1、简述纤维素酶的组成及作用。说出刚果红染色法及其原理（重点重点）2、从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法。（重、难点重、难点）兢悼两奉绰皂氛矫钮墅款概胜便饥茫交旦羊悯镐六辨拼蚊盐箔兑墟逝和末选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离纤维素纤维素，一种由，一种由葡萄糖葡萄糖首尾相连而首尾相连而成的成的高分子高分子化合物，是地球上含量化合物，是地球上含量最丰富的最丰富的多糖多糖类物质。类物质。 植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中
2、其中棉花棉花是自然界中纤维素是自然界中纤维素含量最高含量最高的天然产物。的天然产物。 农作物秸秆农作物秸秆中中富含大量的纤维素，但被人类利用富含大量的纤维素，但被人类利用的机会少、的机会少、效率低效率低。 植物每年产生的植物每年产生的纤维素纤维素超过超过7070亿吨，其中亿吨，其中40%-60%40%-60%能能被土壤中被土壤中某些微生物分解利用某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生，这是因为它们能够产生纤维素酶纤维素酶。 对这些微生物的研究与应用，使人类能够对这些微生物的研究与应用，使人类能够利用秸利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等
3、。等。如何分离土壤中分解纤维素的微生物呢？ 其消化道内，其消化道内，共生共生有有分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物，能产生能产生纤维素酶纤维素酶而分解而分解纤维素。纤维素。人没有分解纤维素的能力 植食性动物是怎样消化食物中纤维素的？彦潍右掉威檀郎峰颖李披糖椅孟淤残逊影钵址强惹羚鼎此箔料蛤奥浩陛艾选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离纤维素与纤维素酶1.1.纤维素纤维素: :多糖多糖( (高分子化合物高分子化合物) )基本单位基本单位: :葡萄糖葡萄糖一、基础知识 土壤中某些土壤中某些微生物微生物能够产生能够产生纤维素酶纤维素酶, ,把纤维素分解为把纤维素分解为葡萄糖
4、葡萄糖，然后再利用。，然后再利用。 许多许多商品纤维素商品纤维素都是由都是由天然纤维素天然纤维素制得的，制得的，如水溶性的如水溶性的羟甲基纤维素钠羟甲基纤维素钠（CMC-Na）、不）、不溶于水的微晶纤维素（溶于水的微晶纤维素（AvicelAvicel）等。）等。殷迈栏胚盆瓦炕诀灭争贰状第憨帆社嘎朝哼涎寻占肯队跨匀耪则痈戊浊律选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离 纤维素酶纤维素酶是一种是一种复合酶，一般认为它，一般认为它至少至少包括三种组分包括三种组分，即，即C C1 1酶酶( (外切酶外切酶) )、C CX X酶酶( (内切酶内切酶) )和葡萄糖苷酶和葡萄糖苷酶，前
5、两种酶使，前两种酶使纤维素纤维素分解成分解成纤维纤维二糖二糖，第三种酶将，第三种酶将纤维二糖纤维二糖分解成分解成葡萄糖葡萄糖。纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素 2. 2.纤维素酶纤维素酶（1)1)组成：组成：（2)2)作用：作用：一种复合酶：C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶逮垄赋深采矗册衍骆趟傅篙麓海狱牌诵放杯匠川惊卖写拉椒廷铬响掐折渊选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离取二支取二支20mL20mL的试管。的试管。实验：纤维素酶分解纤维素的实验各加入一张各加入一张1cm1cm6cm6cm的的滤纸条。滤纸条。各加入各加入pH4.8pH4.8，物质的量浓度为，物质
6、的量浓度为0.1mol/L0.1mol/L的的醋酸醋酸钠缓冲液醋酸醋酸钠缓冲液11ml11ml和和10ml10ml。甲乙在在乙试管乙试管中加入中加入1mL1mL纤维素酶。纤维素酶。两支试管固定在锥形瓶中，放在两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min140r/min的的摇床摇床上振荡上振荡1h1h。结果：结果：乙试管乙试管的的滤纸条消失。滤纸条消失。 讨论：讨论：自变量？自变量？ 因变量？因变量？ 无关变量？无关变量？乙试管的滤纸条为什么会消失？乙试管的滤纸条为什么会消失？ 甲试管的作用是什么？甲试管的作用是什么？自变量：自变量：纤维素酶的有无纤维素酶的有无自变量的控制自变量的控制： 乙试管
7、乙试管-1mL1mL纤维素酶溶液纤维素酶溶液 甲试管甲试管-等量的缓冲液等量的缓冲液( (不能加蒸馏水，会影响溶液的不能加蒸馏水，会影响溶液的pH)pH)。鱼皆氖强佬浆耀分捆辱杉枢换确评和痘哥聘厅泞讯湿边取求隘仑鞭憾崖围选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离刚果红染色法（二）纤维素分解菌的筛选2、原理：1、方法：即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。刚果红刚果红能与能与纤维素纤维素形成形成红色复合物红色复合物，而与水解后的而与水解后的纤维二糖纤维二糖和和葡萄糖葡萄糖不发不发生生这种反应。这种反应。红色复合物红色消失，出现透明圈纤维素纤维素刚果红刚果红（染料）（染
8、料）纤维素分解菌纤维素分解菌纤维素酶纤维素酶四种四种纤维素分解菌在刚果纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的红培养基上形成的透明圈透明圈(选择培养基中通过颜色反应直接对微生物进行筛选)远蔡剁别昌簇镰撤杀漠挟努岳钒舞葛敛查缅粳磋咐拱顷究箭瑟谚塌蓬乞辰选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离不同菌落的不同菌落的透明圈大小透明圈大小不不同，可以说明微生物同，可以说明微生物产生产生纤维素酶能力的大小纤维素酶能力的大小。 不同菌落的不同菌落的透明圈大小透明圈大小不同可以说明什么问题？不同可以说明什么问题？（二）纤维素分解菌的筛选四种纤维素分解菌在刚果四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形
9、成的透明圈红培养基上形成的透明圈透明圈的应用：筛选具有某种特定功能（如分泌某种酶）的微生物（目的菌）.跪种邮隘聚冠律安郭烧闻隆眼条资当洪阻堤伟灼钠震蒂施罪统拣利秃瞳肤选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离 在在长出菌落长出菌落的的培养基培养基上，覆盖上，覆盖质量浓度为质量浓度为1mg/mL1mg/mL的的刚果红刚果红（简（简称称CRCR）溶液，）溶液，101015min15min后，倒去后，倒去CRCR溶液溶液，加入物质的量浓度为，加入物质的量浓度为1mol/L1mol/L的的NaClNaCl溶液溶液， 15min15min后倒掉后倒掉NaClNaCl溶液，此时，产生
10、溶液，此时，产生纤维素酶的纤维素酶的菌落菌落周围将出现周围将出现透明圈透明圈。先先培养微生物培养微生物，再再加入加入刚果红刚果红进行颜色反应。进行颜色反应。方法方法1 1：3、操作：NaCl溶液作用：漂洗作用漂洗作用洗去洗去与纤维素结合不牢的与纤维素结合不牢的刚果红刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。以免出现的透明圈不够清晰。讹龄杖渔缩纱帘敌比拌处悲抽歇哪育砚俄虏贼躁胆莎性倘拔宴氮匣杀汝箍选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离先先培养微生物培养微生物，再再加入加入刚果红刚果红进行颜色反应。进行颜色反应。方法方法1 1：3、操作：在在倒平板倒平板时就加入时就加入刚果红刚果
11、红。方法方法2 2： 配制质量浓度为配制质量浓度为10mg/mL10mg/mL的的刚果红刚果红（CRCR）溶液，）溶液，灭菌灭菌后，后，按照每按照每200200mLmL培养基加入培养基加入1m1mL L的的比例加入比例加入CRCR溶液溶液，混匀后，混匀后倒平倒平板板。等培养基上。等培养基上长出菌落长出菌落后，后，产生产生纤维素酶的菌落纤维素酶的菌落周围将会周围将会出现明显的出现明显的透明圈。透明圈。NaCl溶液作用：漂洗作用漂洗作用洗去洗去与纤维素结合不牢的与纤维素结合不牢的刚果红刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。以免出现的透明圈不够清晰。拜炬袄彬墨揖整镊趾咯厩定痞安喷滑祈楚惜排警揍宇凤武咐喇
12、重眉幅简肩选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离在在倒平板倒平板时就加入时就加入刚果红刚果红。先先培养微生物培养微生物，再再加入加入刚果红刚果红进行颜色反应。进行颜色反应。方法方法1 1：方法方法2 2：3、操作：染色法染色法优点优点缺点缺点方法1( (后置染色法）方法2( (前置染色法）颜色反应基本颜色反应基本上是纤维素分上是纤维素分解菌的作用解菌的作用操作繁琐。操作繁琐。刚果红会使菌落之间发生刚果红会使菌落之间发生混杂。混杂。操作简便，操作简便，不存在菌落不存在菌落混杂问题混杂问题1.1.产生淀粉酶的微生物也产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈。产生模糊透明圈。2.
13、2.有些微生物能降解色素，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。形成明显的透明圈。这两种方法各有哪些优点与不足？NaCl溶液作用：漂洗作用漂洗作用洗去洗去与纤维素结合不牢的与纤维素结合不牢的刚果红刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。以免出现的透明圈不够清晰。傻世俺掸姚茵尔振懂趟排碾历唤欺英朗耙稚另辛绽甚则茧娘赘靖舔咋燥姆选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离二、实验设计土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释 将样品涂布在将样品涂布在鉴别鉴别纤纤 维素分解菌的维素分解菌的培养基培养基上上 挑选挑选产生透明产生透明圈的菌落（圈的菌落（筛选）忙结脸遍诽瓶姚猖锚辊鹿
14、力炉坎拖留很泽檬短倍毯绳致隅羡一蓝燃辜旭贬选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离(1)(1)分布环境分布环境: :1 1、土壤取样：、土壤取样：富含纤维素富含纤维素的环境中的环境中生物与环境的互相依存关系生物与环境的互相依存关系，在富含在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，相对提高，因此从这种土壤中获得目因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。的微生物的几率要高于普通环境。(2)(2)原因原因: :二、实验设计取样的取样的环境环境是怎样的，作出这种选择的是怎样的，作出这种选择的理由理由是什么？是什么？ 纤维素分解菌
15、大多分布在纤维素分解菌大多分布在富含纤维素富含纤维素的环境中。因的环境中。因此，选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形此，选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。搬撤党氓贞腋虐撂筏积添包贯捍阁什罚胡枣羔哄栓腊耸谊磋痞执湿八占薛选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离如果找不到合适的环境，可以将如果找不到合适的环境，可以将滤纸滤纸埋在埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中你认为滤纸应该埋在土壤中多深多深？ 将将滤纸滤纸埋在土壤中，能使纤维素
16、分解埋在土壤中，能使纤维素分解菌相对集中，实际上是菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于。一般应将滤纸埋于深约深约10cm10cm左右左右的土壤中。的土壤中。1 1、土壤取样：、土壤取样：2 2、选择培养、选择培养增加纤维素分解菌的浓度增加纤维素分解菌的浓度，以确保，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。能够从样品中分离所需要的微生物。(1)(1)目的：目的：思考：用什么方法选择？思考：用什么方法选择？掂惭晕攀奄妄碟纽绊饺熙痊播豁丸嘻盂甄窗排惯整烬层迄莲秩环铲买锋抬选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分
17、离纤纤维素分解菌的维素分解菌的选择选择培养基培养基组分含量/g提供的主要营养纤维素粉5NaNO31Na2HPO4.7H2O1.2KH2PO40.9MgSO4.7H2O0.5KCl0.5酵母膏0.5水解酪素0.5将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL碳源、能源无机盐生长因子、碳源、氮源氮源、生长因子 A A、旁栏中的配方是、旁栏中的配方是液液体培养基体培养基还是还是固体培养基固体培养基？为什么？为什么？ 是是液体培养基液体培养基，原因是，原因是配方中配方中无凝固剂无凝固剂（琼脂）（琼脂）B B、这个培养基对微生物是、这个培养基对微生物是否具有否具有选择作用选择作用？如果具？如果具有，是如何
18、进行选择的？有，是如何进行选择的？有选择有选择作用，以作用，以纤维素粉纤维素粉作为作为主要碳源主要碳源，只有只有能分能分解纤维素的微生物可以大解纤维素的微生物可以大量繁殖。量繁殖。C C、你能否设计一个、你能否设计一个对照实验对照实验，说明选择，说明选择培养基的作用。培养基的作用。 自变量自变量为为培养基的培养基的种类种类（即普通培养基（即普通培养基和选择培养基）。可和选择培养基）。可用用牛肉膏蛋白胨培养牛肉膏蛋白胨培养基基与之对照；或者将与之对照；或者将纤维素粉纤维素粉改为改为葡萄糖葡萄糖。(2)制备制备选择培养基选择培养基：酵母膏，酵母膏，是以是以新鲜酵母乳液新鲜酵母乳液经酶解、分离、经酶
19、解、分离、浓缩得到的一种棕黄色可溶性膏状（酵母浸浓缩得到的一种棕黄色可溶性膏状（酵母浸膏）或浅黄色粉状（酵母浸粉）纯天然制品膏）或浅黄色粉状（酵母浸粉）纯天然制品, ,富含蛋白质、必需氨基酸及富含蛋白质、必需氨基酸及B B族维生素、核族维生素、核甘酸、微量元素甘酸、微量元素等。主要作用是补充等。主要作用是补充氮源氮源和和提供提供生长因子生长因子。 水解酪素水解酪素 ，即水解酪蛋白，酪蛋白水解后得到的白色，即水解酪蛋白，酪蛋白水解后得到的白色或浅黄粉末、易溶于水、极易潮解、具有酱香味。或浅黄粉末、易溶于水、极易潮解、具有酱香味。氨基氨基酸种类齐全酸种类齐全。因此常用于制备培养基。主要作用是提供。
20、因此常用于制备培养基。主要作用是提供氮源氮源和和生长因子生长因子。验逞半逐畸藩洲熄自宏驾疤姐摊踢废烛凑诱惕渍瑶共黄赌盂明未诬芳踌帝选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离纤维素粉纤维素粉主要碳源主要碳源。液体培养基液体培养基选择选择培养基培养基对照实验对照实验牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基碳源碳源：纤维素粉纤维素粉葡萄糖葡萄糖(3)操作：操作： 将土样加入装有将土样加入装有30ml30ml选择培养基选择培养基的锥的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温温度度下下震荡培养1 12 2天，直至培养液天，直至培养液变浑浊。也可重复选
21、择培养。也可重复选择培养。(2)制备制备选择培养基选择培养基：(能分解纤维素的微生物可以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖大量繁殖)为什么？微生物大量繁殖譬扼籍髓旨判红缮瓜崩娇锐杠德烁酞篇锭豹沙改易菩菌连捍抿确镁肃翱层选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离 在在选择培养选择培养的条件下，可以使那些能够的条件下，可以使那些能够适应适应这种营养条件的微生物得到这种营养条件的微生物得到迅速繁殖迅速繁殖，而那些而那些不适应不适应这种营养条件的微生物的繁殖这种营养条件的微生物的繁殖被被抑制抑制，因此可以起到，因此可以起到“浓缩浓缩”的作用。的作用。为什么为什么选择培养选择培养能够
22、能够“浓缩浓缩”所需的微生物？所需的微生物？注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。吴旦哦啡蚁绣孝弓两翱现埃傣细救时脸敢辈吟吠锡矗跨昆译享页爽踪六彼选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离按照按照课题课题1 1的稀释操作方法，将选择培养的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比后的培养基进行等比稀释稀释10101 110107 7倍。倍。3.3.梯度稀释梯度稀释101102103104105106衍悔香掣哩到校冤磨芽企寇剑痒傅梅两段完肘众戒试窟隔的充愈狠鸿冶钡选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离组
23、分含量提供的主要营养CMCNa510g酵母膏1gKH2PO40.25g琼脂15g土豆汁100mL将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL 此培养基为固体培养基在其中加入刚果红可形成以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可筛选到纤维素分解菌。(水溶性羧甲基水溶性羧甲基纤维素钠纤维素钠)4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上(1)(1)制备制备鉴别培养基鉴别培养基: :碳源碳源、氮源、生长因子无机盐凝固剂碳源、生长因子酋友疑戒朝窥胚朱砂炭倡点赖躬某虚片甸黍嘘徘机靳镭颂淬落低伟齿犯孵选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上CMCN
24、a（纤维素钠纤维素钠) )主要碳源主要碳源。固体培养基固体培养基鉴别培养基鉴别培养基加入刚果红（前置染色法前置染色法/ /后置染色法后置染色法）出现透明圈鉴别与筛选纤维素分解菌 将稀释度为将稀释度为10104 410106 6的菌悬液各取的菌悬液各取0.1ml0.1ml涂布涂布到平板培养基上，到平板培养基上，3030倒置倒置培养培养。(2)(2)涂布平板涂布平板：(1)(1)制备制备鉴别培养基鉴别培养基: :5.挑取产生明显的透明圈的菌落（即为分解纤维素的菌落） 纯化培养。剖寨芍喇绎贷拢笺翰罩中肉螟卿龙孵籍矮拼简汰睫蛙嗡包理啃挺懈殊肘迢选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物
25、的分离思考：本实验的流程与思考：本实验的流程与课题课题2 2中的实验中的实验流程有哪些流程有哪些异同异同？ 课题课题2:2:土壤取样选择培养基直接分离直接分离菌落(分解尿素的细菌)（尿素为唯一氮源）选择培养选择培养稀释涂布平板法稀释涂布平板法课题课题3:3:土壤取样选择培养基(纤维素分解菌)（纤维素为主要碳源）稀释涂布稀释涂布平板法平板法鉴别培养基透明圈透明圈挑选菌落（刚果红染色法）志芋虚涂曰式瓣楚奶竭纶疏友簿小鬼垢槛弟屹胯它院帜植芭衫仿涩准躺孽选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离三、结果分析与评价 1.1.培养基的培养基的制作制作是否合格以及选择培养基是否合格以及
26、选择培养基是否是否筛选筛选出菌落出菌落对照的培养基对照的培养基在培养过程中在培养过程中没有没有菌落生长则说菌落生长则说明培养基制作合格。明培养基制作合格。如果观察到如果观察到产生透明圈的菌落产生透明圈的菌落，则说明可能获得，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。了分解纤维素的微生物。2.2.分离的分离的结果结果是否一致是否一致 由于在土壤中由于在土壤中细菌的数量细菌的数量远远远远高于高于真菌和放线菌真菌和放线菌的数量，因此的数量，因此最容易最容易分离得到的是分离得到的是细菌细菌。但由于所。但由于所取土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放取土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放线菌等不同的
27、分离结果。线菌等不同的分离结果。扦累磐穷猎露骋讼尊胯钾贤瑚孔捡株栽矫熟桩护幻窟敢棠督徘础郭拒楚秘选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离 四、课题延伸2 2、纤维素酶的、纤维素酶的测定方法测定方法: : 对对纤维素酶纤维素酶分解滤纸等分解滤纸等纤维素纤维素所产生的所产生的葡萄糖葡萄糖含量进行含量进行定量测定定量测定。 为了确定分离得到的是为了确定分离得到的是纤维素分解菌纤维素分解菌，还需要，还需要进行进行发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶实验，纤维素酶的发酵方法实验，纤维素酶的发酵方法有有液体液体发酵发酵和和固体固体发酵发酵。1 1、纤维素分解菌的、纤维素分解菌的鉴定鉴定：发
28、酵发酵产纤维素酶产纤维素酶实验实验液体液体发酵发酵固体固体发酵发酵青加肪殉佣煤蝗池舔寅宿寡晾淬撩不赔箱距脚披谰诊田谊斩丛峪岭仇腑我选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离分解分解纤维纤维素的素的微生微生物的物的分离分离纤维素酶纤维素酶种类、作用、催化活力种类、作用、催化活力刚果红染色刚果红染色筛选原理筛选原理实实验验设设计计土壤取样土壤取样选择培养选择培养涂布培养涂布培养纯化培养纯化培养前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纤维素土壤富含纤维素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鉴别染色鉴别分离出分解菌分离出分解菌课堂小结课堂小结冻唾陕梗奈梨锅勤苫艳溜二旭徽窍菲隔
29、跺椽感碰梯弹讼肝各猾晨卞嘘赤沥选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离1.1.【生物【生物 选修选修1 1：生物技术实践（：生物技术实践（1515分）分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：降解原油的菌株。回答问题：在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于从功能上讲，该培养基属于 培养基。培养基
30、。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即方法有两种，即 和和 。 石油石油选择选择平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法当堂训练当堂训练中景镍哆侠炬蚌焊妙嫂刹擅钵违旬迪梧胶晾擒奋雅蜘据充钒责撮隐词丢休选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有的灭菌方法有 、
31、和和 。无菌技术要求试验操作应在酒精灯无菌技术要求试验操作应在酒精灯 附近附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。进行，以避免周围环境中微生物的污染。强强灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌法干热灭菌法高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法火焰火焰否拙讫携湖英靖葵态脂铸器谱朗腑茅胁斧搐倡裕曾蜘累劝亭垛舜沪锡锹宅选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离2 2如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题：据此回答有关问题：（1 1）要从富含）要从富含纤维素的素的环境中分离境中分离纤维素分解菌，从高温素分解菌，从高温热泉中泉中寻找耐找
32、耐热菌，菌，这说明明 。（2 2）接种微生物最常用的是平板划）接种微生物最常用的是平板划线法和稀法和稀释涂布平板法，本涂布平板法，本实验宜采用宜采用 法，原因是法，原因是 。（3 3）用稀）用稀释涂布平板法涂布平板法统计菌落数目菌落数目时，最好，最好选择菌落数在菌落数在 间的平板的平板进行行计数。若数。若统计出在一稀出在一稀释倍数倍数为10105 5的平板上的平均菌落数的平板上的平均菌落数为3030个，所用稀个，所用稀释液的体液的体积为0.2 mL0.2 mL，则每克每克样品中的菌落数品中的菌落数为 。寻找目的菌，根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找释稀涂布平板平板划线法难以根据
33、稀释体积计算每克样品中的细菌数303001.5101.5107 7个个撵副被堰憋根草滞蛾薛渴宅摸薛邯耪踌蜡臃蔷绩捉苗递辰徐捏通舀衰玛岿选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离3从自然菌从自然菌样筛选较理想生理想生产菌种的一般步菌种的一般步骤是：采集菌是：采集菌样富富集培养集培养纯种分离种分离性能性能测定。定。（1）不同微生物的生存）不同微生物的生存环境不同，境不同，获得理想微生物的第一步是从得理想微生物的第一步是从适合的适合的环境采集菌境采集菌样，然后再按一定的方法分离、，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜化。培养嗜盐菌的菌菌的菌样应从从 环境采集。境采集。（2）富集
34、培养指）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生适合待分离微生物旺盛生长的特定的特定环境条境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。方法。对产耐高温淀粉耐高温淀粉酶微生物的富集培养微生物的富集培养应选择 的培养的培养基，并在基，并在 条件下培养。条件下培养。（3）下面两）下面两图是采用是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果的效果图解，解，请分析接种的具体方法。分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是，获得图B效果的接种方法是。（4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前
35、必须进行，培养基接种前要进行，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在条件下进行。海滩等高盐以淀粉为唯一碳源高温稀释涂布平板法平板划线法调节pH高压蒸汽灭菌无菌驾压鬼区芬途鳞社也蛀哄驳部混朴矣甩梆贼阑挑三登煞瞒泛焉手擒扶拈巨选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离4有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发酵生维素酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发酵生产，为了提高酶的产
36、量，请你设计一个实验，利用诱变育产，为了提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变育种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌株。种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌株。（1）写出实验步骤：）写出实验步骤：将培养好的生产菌株分成两组，将培养好的生产菌株分成两组，。制备含有制备含有的固体培养基。的固体培养基。 。一组用一定剂量的诱变剂处理，另一组不处理作为对照纤维素把诱变组的大量菌株接种到多个含有纤维素的固基上，同时接种对照组（未处理）的菌株，把它们置于相同的适宜条件下培养一段时间后，取培养基用刚果红染色，观察记录菌落周围透明圈的大小情况蚀膳汝饮相古掸策甩据截谭克汉讼晰涅鉴畏蛇捕茂坊烈埔柑厘绩闷隘抛夯选12
37、3分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离（2）预期实验结果及结论：）预期实验结果及结论：诱变组中菌落周围的透明圈比对照组诱变组中菌落周围的透明圈比对照组 ，说明说明 。诱变组中菌落周围的透明圈与对照组诱变组中菌落周围的透明圈与对照组 ，说，说明明。诱变组中菌落周围的透明圈比对照组小，说明诱变组中菌落周围的透明圈比对照组小，说明。（3）若欲获得纯净的高产菌株，需进行）若欲获得纯净的高产菌株，需进行 或或操作。操作。大诱变育种获得了高纤维素酶产量的菌株相同诱变育种没有使菌株发生变化诱变育种获得了低纤维素酶产量的菌株平板划线稀释涂布平板约也萎铀泪片痴豹板瘫患烹啥聊刮滴执辊栏稳砷卞冻柞锦奠要摆围埔萄根选123分解纤维素的微生物的分离选123分解纤维素的微生物的分离
