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1、血清总胆固醇浓度的测定血清总胆固醇浓度的测定2021/4/261【目的目的】1.1.掌握掌握721721分光光度计的使用；分光光度计的使用；2.2.熟悉比色分析法的基本原理；熟悉比色分析法的基本原理；【原理原理】血清中总胆固醇血清中总胆固醇(TC)包括游离胆固醇包括游离胆固醇(FC)和胆固醇和胆固醇酯酯(CE)两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，游离胆固醇在胆固，游离胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成醇氧化酶的氧化作用下生成4-胆甾烯酮和胆甾烯酮和H2O2，H2O2在在4-氨基安替比林和酚存在时，由过
2、氧化物酶氨基安替比林和酚存在时，由过氧化物酶催化，反应生成红色醌类化合物，其颜色深浅与标催化，反应生成红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中本中TC含量成正比，最大光吸收在含量成正比，最大光吸收在505nm 2021/4/2622021/4/263原理分光光度计工作原理：分光光度计工作原理：物质对不同波长光的吸收具有选择物质对不同波长光的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收光带。当光色散后的光谱性，不同的物质都有各自的吸收光带。当光色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸收。通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸收。在一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度在
3、一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度有一定的比例关系，即符合朗伯有一定的比例关系，即符合朗伯-比耳定律比耳定律 (Lambert-Beer law)。 T = I/Io A=lg(Io/I)=abc 式中，式中，T为透过率，为透过率，Io为入射光强度，为入射光强度，I为透射光强度，为透射光强度，A为消光值为消光值(吸光度吸光度)，a为吸收系数，为吸收系数，b为溶液的光径长度，为溶液的光径长度，c为溶液的浓度。从以上公式可以看出，当入射光、吸收为溶液的浓度。从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液厚度一定时，透光率是根据溶液的浓度而变化系数和溶液厚度一定时，透光率是根据溶液的浓度
4、而变化的。的。 2021/4/264步骤1、取取干燥试管干燥试管3支，编号，按下表操作：支，编号，按下表操作：混匀后，混匀后，37水浴水浴5 min，立即用分光光度计比色，于，立即用分光光度计比色，于505 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度波长处以空白管调零，读出各管吸光度 空白管空白管标准管标准管测定管测定管血清血清20 l标准液标准液20 l蒸馏水蒸馏水20 lR试剂试剂2ml2ml2ml2021/4/265【参考范围】正常人血清总胆固醇：3.1-5.95 mmol/L(120-230 mg/dl)血清总胆固醇胆固醇标准液浓度 （200 mg/dl）2021/4/266 721分光光
5、度计的使用分光光度计的使用1.打开电源开关，预热仪器打开电源开关，预热仪器20 min。2.选定所需波长，灵敏度档调至选定所需波长，灵敏度档调至1档。档。3.打开暗盒盖，调打开暗盒盖，调0(用用0透光率旋钮将指针调节到透光率透光率旋钮将指针调节到透光率0处处)。4.关上暗盒盖，调关上暗盒盖，调100%(用用100%透光率旋钮将指针调节到透光透光率旋钮将指针调节到透光率率100%处处)。重复。重复3-4步骤数次，直至指针稳定。步骤数次，直至指针稳定。5.将装有空白液、标准液、待测液的比色皿依次放入比色架中，将装有空白液、标准液、待测液的比色皿依次放入比色架中，盖上暗盒盖，此时光路开启，使空白液位
6、于光路部分，用盖上暗盒盖，此时光路开启，使空白液位于光路部分，用100%透光率调节旋钮使电表指针指在透光率透光率调节旋钮使电表指针指在透光率100%位置位置(即即A=0.00)。6.将标准液、待测液分别推入光路，读取吸光度值，读罢将暗盒将标准液、待测液分别推入光路，读取吸光度值，读罢将暗盒盖打开。盖打开。注意事项：注意事项：在使用过程中应注意保护比色皿的透光面，避免其在使用过程中应注意保护比色皿的透光面，避免其受损或产生划痕，影响透光率。受损或产生划痕，影响透光率。2021/4/267n9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。03-9月-2403-9月-24Tuesday, Septembe
7、r 3, 2024n10、低头要有勇气，抬头要有低气。*9/3/2024 7:48:56 PMn11、人总是珍惜为得到。03-9月-24*Sep-24 03-Sep-24n12、人乱于心，不宽余请。*Tuesday, September 3, 2024n13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。03-9月-2403-9月-24*03 September 2024n14、抱最大的希望，作最大的努力。03 九月 2024*03-9月-24n15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月 24*03-9月-24*03 September 2024n16、业余生活要有意义，不要越轨。*9/3/2024n1
8、7、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。*03-9月-24谢谢大家谢谢大家2021/4/268n9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/3 2024/9/3 Tuesday, September 3, 2024n10、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024 7:48:56 PMn11、人总是珍惜为得到。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 Sep-24 03-Sep-24n12、人乱于心，不宽余请。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 Tuesday, September 3, 202
9、4n13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024n14、抱最大的希望，作最大的努力。03 九月 20242024/9/3 2024/9/3 2024/9/3n15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月 242024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024n16、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/3 2024/9/3 03 September 2024n17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3谢谢大家谢谢大家
10、2021/4/269n9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/3 2024/9/3 Tuesday, September 3, 2024n10、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024 7:48:57 PMn11、人总是珍惜为得到。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 Sep-24 03-Sep-24n12、人乱于心，不宽余请。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 Tuesday, September 3, 2024n13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/3 2024/9/3
11、 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024n14、抱最大的希望，作最大的努力。03 九月 20242024/9/3 2024/9/3 2024/9/3n15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月 242024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024n16、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/3 2024/9/3 03 September 2024n17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3n9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/3 2024/9/3 Tuesda
12、y, September 3, 2024n10、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024 7:48:57 PMn11、人总是珍惜为得到。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 Sep-24 03-Sep-24n12、人乱于心，不宽余请。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 Tuesday, September 3, 2024n13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024n14、抱最大的希望，作最大的努力。03 九月 20242024/9/3 2024/9/3 2024/9/3n15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月 242024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 9/3/2024n16、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/3 2024/9/3 03 September 2024n17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3 2024/9/3
