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1、n实验一实验一 细胞形态结构的观察、细胞细胞形态结构的观察、细胞n 计数和显微测量计数和显微测量 实验目的实验目的n1、进一步熟悉显微镜的使用方法；n2、熟悉动植物、人体细胞的基本结构；n3、掌握显微测微的原理和方法，通过测微对细胞的大小有所了解；n4、学习细胞计数方法；n5、掌握临时装片、涂片的制作方法。 实验原理n 细胞是生命活动的基本结构和功能单位，其形态与功能相适应，种类繁多，形态各异，有球形、椭圆形、扁平形、长梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都是由细胞膜（动物），细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。一般光学显微镜分辨率为0.2um，细胞中的线粒体、高
2、尔基体、中心体、核仁、染色体等细胞器长度或直径大于0.2um，一般经过一定固定染色处理后，借助显微镜可以观察细胞及其内部结构。实验原理 不同的组织细胞不仅形态上有差异，大小也往往各不相同。有机体的每种细胞都有其特定的尺寸和形态，这与它们发挥特定的功能有关，而一旦细胞不能保持固有形态，其功能就会受到损害，从而会给有机体带来一系列问题。n 利用显微镜附带的测微尺可以对观察到的细胞或其结构进行长度测量，从而对其体积进行计算。实验原理n 细胞计数法是细胞培养过程中的一项基本技术，只有控制合适的细胞密度才能确保细胞顺利生长，同时在研究细胞生长状态，绘制生长曲线等实验中也会用到细胞计数。细胞计数的原理较简
3、单，只要从需要计数的细胞悬液中取一定体积的悬液，稀释后在显微镜下利用细胞计数板进行计数，即可换算出原始细胞悬液中细胞的密度以及细胞总数。洋葱鳞茎表皮细胞人口腔上皮细胞人的红细胞神经细胞酵母菌细胞实验用品实验用品 n1、器材：普通光学显微镜，测微尺，细胞计数板，刀片，剪刀，小镊子，玻片，擦镜纸；n2、材料：洋葱，人口腔上皮细胞，鸡血细胞悬液；n3、试剂：碘液，瑞特染液实验步骤n（一）洋葱鳞茎表皮细胞的观察（一）洋葱鳞茎表皮细胞的观察n1.临时装片的制备：在载玻片中央滴一滴1%的碘液，剥取洋葱鳞茎表皮，用小镊子撕取内表皮，用剪刀剪取2大小平铺在碘液中，用镊子夹取一块盖玻片，将一条边缘接触碘液，然后
4、缓缓盖在液滴上，防止产生气泡，轻压盖片，用吸水纸吸去挤出的碘液。n2.将制备好的装片放到显微镜下，先用低倍镜观察，寻找细胞形状规则、形态清晰的区域，换高倍镜观察细胞内部结构。洋葱鳞茎表皮细胞结构碘液染色放大10倍洋葱鳞茎表皮细胞图碘液染色放大40倍洋葱鳞茎表皮细胞图n（二）人口腔上皮细胞的观察（二）人口腔上皮细胞的观察n1.人口腔黏膜上皮细胞涂片标本的制备：在载玻片中央滴一滴1%碘液，用一根经过消毒的牙签在实验者口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，将其放入碘液中搅动使细胞散开。染色1分钟后小心加盖玻片，方法同前。n2.将制备好的装片置于显微镜下观察。人口腔上皮细胞结构人口腔上皮细胞结构 碘液染色放大
5、10倍口腔上皮细胞图 碘液染色放大40倍口腔上皮细胞图 碘液染色放大40倍口腔上皮细胞图n（三）鸡血细胞的观察（三）鸡血细胞的观察n1.血涂片的制备：用吸管吸取少量稀释了的鸡血，在载玻片右端滴一滴，另取一张载玻片，使其一条边缘接触血液，两玻片成3045，迅速向前推移，使血液被拉成均匀的薄膜。血液的大小、玻片的夹角、推移的速度对血膜的厚薄均有影响，将玻片在空气中晾干。n2.染色：在血膜上滴几滴瑞特染液，平置1分钟，再向染液中加入等量的蒸馏水，稀释染液，继续9分钟。用自来水轻轻冲洗玻片上的染液，晾干。n3.观察：分别用低倍镜和高倍镜观察血细胞的形态。血涂片的制片方法血涂片的制片方法 染色的鸽红细胞
6、图 染色的鸽红细胞图 染色的鸽红细胞图 未被染色的鸽红细胞图n（四）鸡血细胞计数（四）鸡血细胞计数n1.细胞计数板的结构：细胞计数板是一块2的厚玻片，通常有两个正方形计数室。计数室较周围稍低，其上覆盖一片盖玻片时，之间的距离为。每个计数室被分成9个大方格（边长为1mm），四角的四个大格又均分为16个中方格，这四个大格通常用于白细胞计数和组织培养细胞计数。中间的大格被分成25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，这些小方格一般用于红细胞和血小板的计数。用擦镜纸轻轻擦拭计数板，盖上盖玻片，在显微镜低倍镜下熟悉方格的布局。n2.加样：从显微镜上取下计数板，盖上盖玻片，用吸管吸取稀释的鸡血细胞悬液
7、，滴在计数板上盖玻片的边缘，细胞悬液会因为表面张力作用自然流入计数室内（注意不要产生气泡）。静置2分钟，待细胞沉降后即可上镜观察。n3.计数：在低倍镜下按照固定方向数出计数室四个角上的每个大方格内的细胞数目，如果细胞正好停留在格线上，则按照数上不数下、数左不数右的原则计数。n4.计算：按照下列公式计算每毫升鸡血细胞悬液包含的细胞数。n细胞总数（个细胞总数（个/毫升）毫升）=（四个大格细胞数目总和（四个大格细胞数目总和/4）*104*稀释倍数。稀释倍数。10倍放大倍数下鸽红细胞计数图10倍放大倍数下鸽红细胞计数图n （五）细胞的显微测量（五）细胞的显微测量n 我们在理论课上学习过细胞的大小，知道
8、细胞一般都很小，如一般植物细胞的直径为10100m，人和动物的细胞直径为1020m，细菌的细胞就更小了，那么有没有一种工具能够测量细胞大小呢？今天，我们就来学习一种测量细胞大小的工具显微测微尺显微测微尺。n（1）、显微测微尺的组成n 镜台测微尺n 显微测微尺显微测微尺n 目镜测微尺n镜台测微尺镜台测微尺：镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一个具有精细刻度的标尺，标尺长1mm，分成100等份的小格，每小格长为10m，标尺的外围有一黑色的小环，以便在显微镜下寻找标尺位置。n目镜测微尺目镜测微尺：分为线性目镜测微尺和网状目镜测微尺。目镜测微尺是一块比目镜筒内径稍小的有标尺的
9、圆形玻璃片，标尺长10mm、分为100等份的小格。每小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。线性目镜测微尺一般用来测量长度，网状目镜测微尺上有数个正方格的网状刻度，经常使用网状目镜测微尺测面积。n（2）、测微原理测微原理n 镜台测微尺是显微长度测量的标准，但它并不被用来直接测量（为什么）。目镜测微尺每小格的实际长度随不同显微镜、不同放大倍数而不同，因为目镜测微尺是安装在目镜隔板上，显微镜下被测标本的物像是经过物镜、目镜两次放大成像后才进入视野的，而目镜测微尺上的刻度只经过一次放大成像，放大倍数与显微镜下标本的放大倍数不同，因此目镜测微尺每小格的长度只代表相对长度，是变化的，
10、必须由镜台测微尺校正后才有意义，因此镜台测微尺和目镜测微尺必须配合使用。n 所以先要用镜台测微尺对目镜测微尺进行校正，测出不同放大倍数下目镜测微尺每小格的实际长度。在测量标本时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。镜台测微尺用来校正目镜测微尺，故其质量对所测细胞影响极大。n 通过测量细胞的长度可以计算出细胞的面积和体积。0.01mm镜台测微尺镜台测微尺目镜测微尺目镜测微尺0102030405060708090100（3）、显微测微尺的使用方法n（）安装安装n1、卸下目镜的一个上透镜，将目镜测微尺刻度线向下安装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。n2、将镜台测
11、微尺刻度向上安装在载物台上夹好，打开电源开关，调节载物台使测微尺分度位于视野中央。用低倍镜（4倍）观察，调焦至能看清镜台测微尺的刻度线。n（）校正校正n 调换物镜至10倍放大倍数，调节焦距使镜台测微尺的刻度线最清晰。此时在视野内可以同时看到镜台测微尺和目镜测微尺。移动载物台将镜台测微尺标尺移至目镜测微尺的下方以避免后者标尺上的刻度线妨碍视线。旋转目镜镜筒使目镜测微尺的标尺与镜台测微尺平行且靠近，移动载物台使镜台测微尺左端的0刻度线与目镜测微尺左端的0刻度线重叠，从左至右依次间隔（为什么）读出两尺刻度线重合的位置，记录格数，至少记录5个读数。n 若以S表示镜台测微尺的格数、E表示目镜测微尺的格数
12、，L表示目镜测微尺每小格代表的实际长度，计算5次数值的平均值即为该放大倍数下目镜测微尺每小格代表的实际长度。 n L S/E*10mn 10倍放大倍数下的校正值L=(L1+L2+L3+L4+L5)/5 =(10+10+10.3+10.2+10.2)/5=10.14 (m)n 依次在高倍镜和油镜下对目镜测微尺进行校正。在高倍镜和油镜下镜台测微尺的刻度线显得很粗，目镜测微尺的刻度线与它相比是很细的，为了减少误差，校正时目镜测微尺左端的刻度线应放在镜台测微尺左端刻度线的左旁边缘。n （）测微测微n 移去镜台测微尺，换上洋葱鳞茎表皮装片，用目镜测微尺测量一个细胞所占小格数并乘以目镜测微尺每小格代表的实
13、际长度，即为被测细胞的实际长度。在10倍放大倍数下测得一个洋葱鳞茎表皮细胞的宽共有23格，由此可以计算出这个洋葱表皮细胞的宽：n 10.1423=233.22 (m)m)n 用同用同样的方法可以的方法可以测量量洋葱鳞茎表皮细胞的长，测出长后可以计算出细胞的面积。0102030405060708090100洋葱鳞茎表皮细胞测量口腔上皮细胞大小图n 在测量过程中，为了数值的准确性，一般通过多次测量取平均值。另外我们在测量的过程中还会出现被测标本的长度不是整数格，这个时候就要估计，有时遇到比较大的细胞，目镜测微尺的长度不够长，要通过几次测量才可以把一个长度测出来，出现这两种情况就会产生误差。n （4
14、）.使用显微测微尺注意事项n 1.镜台测微尺标尺的圆环上盖有一圆形盖玻片起保护刻度线的作用，盖玻片是用树胶粘在载玻片上的，因此避免二甲苯与其接触。（酒精和乙醚2：8或3：7混合液擦洗 ）n 2.在用镜台测微尺对目镜测微尺进行校正时，注意不要把镜台测微尺放反或放倒。 n 3.在用镜台测微尺对目镜测微尺进行校正时，显微镜的光亮度不易太亮。n 4.测微尺都是用玻璃材质做的，在使用的时候要小心，不要摔碎或压碎。n 结果讨论结果讨论 n思考题：思考题：n1、将所观察到的几种细胞绘制在实验报告上，并表明其内部结构。n2、计算1ml鸡血细胞悬液中所包含的细胞数。n3、测量一个洋葱鳞茎表皮细胞的大小。生物学绘
15、图方法及注意事项生物学绘图方法及注意事项n 生物绘图是形象地描绘生物外形、结构和行为等的一种重要的科学记录方法。其原则是要求对所描绘的生物对象做深入细致的观察，从科学的角度充分了解其有关形态结构特征，在此基础上准确、严谨地绘制。生物绘图要求具有科学性、真实性，并且要求清晰。n一、绘图用具一、绘图用具n2H或3H铅笔、绘图纸、削笔刀、橡皮、小尺等。n二、生物绘图的主要技法二、生物绘图的主要技法n(一一)基本要求基本要求 (1).仔细观察标本，区分正常结构与偶然、人为的差异，选择典型和正常的部分认真观察。充分了解各部分的结构特点是绘图的前提。科学、认真、实事求是的态度是绘图的保证。 (2).实验报
16、告纸要保持平整、清洁，不得折褶、玷污。n（二）基本方法（二）基本方法 (1).合理布局：一次实验要绘的图，无论数量多少及大小，一般都只能在一张实验报告纸的正面绘制。每幅图包括图和图注。绘图前，应根据要绘图的数量、大小、主次，在报告纸上作合理安排，使每一幅图在报告纸上的位置和大小适中，避免版面偏差。 (2).绘图一律用线条和点表示：各部分外围轮廓用线条表示，线条要一笔绘出，确保细致、清晰、光滑、连续。阴暗、深色部分用点的疏密表示，不能附加阴影，更不可涂抹。打点时，铅笔垂直，手腕均匀向下适当用力，致使所打之点细小、均匀、圆正，不拖尾。n(3)绘图时，先将要绘部分的全形轮廓用铅笔轻轻勾出，内部各部分亦然，求得准确后，再逐一绘实。n(4)每幅图均应有图注，图注由注示线和注释文字组成。注示线一律用平行横线引至图的右侧适当的位置，右端上下要对齐，间隔距离保持相等。图中较为集中的部分，可先用直斜线向右引出，然后再接用平行横线引至右侧，横线与斜线间的夹角应大于90度。注示线互不交叉，所指部位要清楚明确，一目了然。注释文字一律横向书写于注示线的右端，多字数名称紧缩字距，少字数名称匀开字距，使每一注释的首尾字上下对齐。 n(5)每幅图的正下方须横向标出详细图名和图示主题，并宜将该图的缩放比例准确标出。n下次实验：线粒体和液泡系的超活体染色下次实验：线粒体和液泡系的超活体染色
