实验四(新城疫病鸡剖检及病毒学检查)

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1、新城疫病鸡剖检新城疫病鸡剖检 及病毒学检查及病毒学检查蒲蒲 娟娟E-mail:Tel: 62732982一、兽医传染病学实验室注意事项一、兽医传染病学实验室注意事项二、兽医传染病的一般诊断程序二、兽医传染病的一般诊断程序三、病鸡剖检及细菌学检查三、病鸡剖检及细菌学检查一、兽医传染病学实验室注意事项一、兽医传染病学实验室注意事项 注意个人预防、避免病原传播注意个人预防、避免病原传播l穿着工作服，实验结束后需立即消毒清洗。穿着工作服，实验结束后需立即消毒清洗。l实验操作期间，勿以手指或其他器物等接触口实验操作期间，勿以手指或其他器物等接触口唇、眼、鼻及面部。唇、眼、鼻及面部。l实验完毕，应洗手消毒

2、后离去。实验完毕，应洗手消毒后离去。一、兽医传染病学实验室注意事项一、兽医传染病学实验室注意事项危险材料及其污染的器物处理危险材料及其污染的器物处理l动物尸体、内脏、血液等废弃病料，以及废弃的病原动物尸体、内脏、血液等废弃病料，以及废弃的病原培养物、生物制品等须深埋或经过严格消毒处理（焚培养物、生物制品等须深埋或经过严格消毒处理（焚烧、煮沸、高压灭菌等）后丢弃到公共垃圾处理场，烧、煮沸、高压灭菌等）后丢弃到公共垃圾处理场，严禁将未经消毒的危险性材料直接丢弃。严禁将未经消毒的危险性材料直接丢弃。l用过的棉球、纱布、吸水纸等污物须置于固定容器内用过的棉球、纱布、吸水纸等污物须置于固定容器内统一消毒

3、处理，不得任意抛弃。统一消毒处理，不得任意抛弃。l桌面、地板或地面被污染时，应用适当消毒液清洗。桌面、地板或地面被污染时，应用适当消毒液清洗。二、兽医传染病的一般诊断程序二、兽医传染病的一般诊断程序 实验室诊断实验室诊断病理组织学、病理组织学、病原学病原学（涂片镜检、病原分离、（涂片镜检、病原分离、PCR、动、动物回归）、物回归）、血清学血清学（HI、AGID、ELISA）等）等临床诊断临床诊断流行病学、流行病学、临床症状临床症状、病理解剖病理解剖等等发生疫情发生疫情确确 诊诊三、病鸡剖检及病毒学检查三、病鸡剖检及病毒学检查实验目的实验目的l1. 掌握动物病毒病实验室诊断的一般程序。掌握动物病

4、毒病实验室诊断的一般程序。l2. 掌握病鸡剖检的一般方法。掌握病鸡剖检的一般方法。l3了解鸡新城疫的病理变化和临诊要点。了解鸡新城疫的病理变化和临诊要点。l4掌握新城疫病毒的分离鉴定。掌握新城疫病毒的分离鉴定。三、病鸡剖检及病毒学检查三、病鸡剖检及病毒学检查疑似新城疫病疑似新城疫病流行病学调查流行病学调查尸体剖检尸体剖检（取样、病变的观察）（取样、病变的观察）病原的分离病原的分离病原的鉴定病原的鉴定做出诊断做出诊断（发病时间、发病率、死亡率、发病鸡群（发病时间、发病率、死亡率、发病鸡群的用药和免疫情况等）的用药和免疫情况等）取样：取样：病变组织（脾脏病变组织（脾脏病毒分离）、血液病毒分离）、血

5、液病变的观察：病变的观察：口腔、嗉囊、气管及肺、腺胃口腔、嗉囊、气管及肺、腺胃与肌胃、肠道粘膜。与肌胃、肠道粘膜。病毒分离：鸡胚病毒分离：鸡胚血凝（血凝（HA）与血凝抑制（）与血凝抑制（HI）试验）试验尸体剖检尸体剖检尸体剖检尸体剖检病鸡剖检基本原则病鸡剖检基本原则1、外、外 内内2、观察、观察 取样取样 剖检剖检3、肝、肝 脾脾 胃胃 肠肠 法氏囊法氏囊 肾脏肾脏 肺肺 心心 喉头、气喉头、气管管 脑脑尸体剖检尸体剖检1. 全身黏膜和浆膜出血，淋巴系统肿胀、出血和坏死，以消全身黏膜和浆膜出血，淋巴系统肿胀、出血和坏死，以消化道和呼吸道为明显。化道和呼吸道为明显。 2. 口腔有黏液，嗉囊内积酸

6、臭味液体和气体；口腔有黏液，嗉囊内积酸臭味液体和气体；3. 腺胃黏膜水肿，其乳头或乳头间有鲜明的出血点，或有溃腺胃黏膜水肿，其乳头或乳头间有鲜明的出血点，或有溃疡或坏死。肌胃角质层下也可见出血点。疡或坏死。肌胃角质层下也可见出血点。病毒分离病毒分离将脾脏剪碎，按照将脾脏剪碎，按照1:5的比例加入含三抗的的比例加入含三抗的PBS，用研磨器研磨成组织匀浆，用研磨器研磨成组织匀浆将匀浆置于将匀浆置于1.5ml离心管中，离心管中，5000rpm离心离心10min。离心后，取上清离心后，取上清0.1ml接种鸡胚接种鸡胚 37度孵化鸡胚度孵化鸡胚72h（每隔（每隔12h照胚，挑出死胚和弱胚），照胚，挑出死

7、胚和弱胚），弃掉弃掉24h之内的死亡胚之内的死亡胚收获鸡胚尿囊液之前，将鸡胚置于收获鸡胚尿囊液之前，将鸡胚置于4度度6h以上，促进血管收缩以上，促进血管收缩 收获尿囊液，测定尿囊液的收获尿囊液，测定尿囊液的HA效价，效价， 并用新城疫的阳性血清进行并用新城疫的阳性血清进行HI实验，做出鉴定实验，做出鉴定l鸡胚培养法鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的病原的一种培养方法，此方法可用以进行多种病原的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。 l鸡新城疫病毒鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内，生长后，鸡胚全身皮肤出现出血点，以脑后最显著。 常见接种方法：常见接种方法：1.尿囊腔接种

8、2.绒毛尿囊膜接种3.卵黄囊接种4.羊膜腔接种尿囊腔接种步骤尿囊腔接种步骤标本处理：标本处理：病料研磨（5倍至10倍稀 释），除菌处理照胚：照胚： 活胚检查：活胚检查： 胚动、血管、绒毛尿囊 膜发育 确定接种部位：确定接种部位：画气室、画接种部 位（避开大血管及头部）消毒：消毒：酒精碘酒酒精接种：接种：0.1-0.2ml，气室下孵育：孵育：气室向上放置，孵育的最适温度为37，相对湿度为4070，孵育7296h911日龄鸡胚日龄鸡胚鸡胚孵育鸡胚孵育 气室向上放置，孵育的最适温度为37，相对湿度为4070，孵育7296h接种后检查接种后检查 接种后24h内死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去； 24h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内（72h）不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死，以便收缩血管。 死亡的鸡胚置冰箱中12h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。鸡胚收获鸡胚收获原则上接种什么部位，收获什么部位。原则上接种什么部位，收获什么部位。 尿囊腔内接种者用无菌手术去气室顶壳，打开整个气室区； 以无菌镊子撕去一部分蛋膜，撕破绒尿膜而不撕破羊膜； 用镊子轻轻按住胚胎，以无菌吸管或消毒注射器吸取绒毛尿囊液置于无菌试管中，多时可收获58mL； 将收获的材料低温保存。