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1、experiment4experiment4酵母菌形态酵母菌形态观察资料观察资料 一、目的要求一、目的要求 1. 观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。 2.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。3. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。4.学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。二、基本原理二、基本原理酵母菌形态酵母菌形态 酵酵母母菌菌是是多多形形的的、不不运运动动的的单单细细胞胞真真核核微微生生物物，细细胞胞核核与与细细胞胞质质已已有有
2、明明显显的的分分化化，菌菌体体比比细细菌菌大大。繁繁殖殖方方式式也也较较复复杂杂，无无性性繁繁殖殖主主要要是是出出芽芽生生殖殖，仅仅裂裂殖殖酵酵母母属属是是以以分分裂裂方方式式繁繁殖殖；有有性性繁繁殖殖是是通通过过接接合合产产生生子子囊囊孢孢子子。本本实实验验通通过过用用美美蓝蓝染染色色浸浸片片来来观观察察生活的酵母形态和出芽生殖方式。生活的酵母形态和出芽生殖方式。 二、基本原理二、基本原理美蓝染色液美蓝染色液美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内它对酵母菌染色时，由于活细胞的
3、新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。形态，还可以区分死、活细胞。 美蓝（氧化型）美蓝（氧化型）蓝色蓝色美蓝（还原型）美蓝（还原型）无色无色还原剂还原剂氧化剂氧化剂二、基本
4、原理二、基本原理死活细胞鉴别原理死活细胞鉴别原理美蓝（氧化型）美蓝（氧化型）蓝色蓝色美蓝（还原型）美蓝（还原型）无色无色酵母活细胞酵母活细胞新陈代谢新陈代谢还原能力还原能力 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏麦氏 (McClary
5、) 培养基培养基 ( 葡萄糖醋酸钠培养葡萄糖醋酸钠培养基基 ) 有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 二、基本原理二、基本原理子囊孢子观察子囊孢子观察三、实验器材三、实验器材1.菌种：菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)2.溶溶液液与与试试剂剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，0.5%沙黄、95%乙醇3. 培养基：培养基：麦芽汁琼脂斜面，麦氏琼脂斜面。 4. 仪仪器器或或其其他他用用具具：显微镜，载玻片，盖玻片酒精灯、接种环等。四、操作步骤四、操作步骤美兰染色美兰染色v在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少在载玻片中央
6、加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔，混合均匀；量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少）（注：染液不宜过多或过少）v用用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；（片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下）注：盖玻片不宜平着放下）v将将制片放置约制片放置约3min3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。况，并根据颜色区别死活细胞。v染色染色30min30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化；后再次观察，注意死
7、活细胞数量的变化；v用用其它浓度的吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。其它浓度的吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。四、操作步骤四、操作步骤子囊孢子观察子囊孢子观察1.1.1.1.菌种活化：菌种活化：将酿酒酵母酒酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，2528 度培养24h左右，然后再转种23次。（注：麦芽汁（注：麦芽汁斜面培养基需用新配制、表面湿润的。）斜面培养基需用新配制、表面湿润的。） 2. 2. 产孢培养：产孢培养：将经活化的菌种转接到麦氏琼脂斜面上，2528度培养约一周。 3. 3. 制片：制片：取经产孢培养的酵母斜面培养物，在洁净载玻片上按常规涂片、干燥、固定。 4. 4. 染色：染色：滴加孔雀
8、绿染液染色 1min。 5. 5. 脱色：脱色：用 95% 的乙醇脱色 30s，水洗。 6. 6. 复染：复染：用番红复染 30s，水洗，用吸水纸吸干。 7. 7. 镜检：镜检：干后用油镜观察子囊孢子呈绿色、菌体和子囊孢子呈粉红色。 五、实验报告五、实验报告 1. 结果结果 （1） 绘图说明你所观察到的酵母菌的细胞结构及出芽生殖方式。绘图说明你所观察到的酵母菌的细胞结构及出芽生殖方式。 （2）绘图说明酿酒酵母的营养细胞、子囊和子囊孢的形态特征。）绘图说明酿酒酵母的营养细胞、子囊和子囊孢的形态特征。2. 思考题思考题 （1）吕吕氏氏碱碱性性美美蓝蓝染染液液浓浓度度和和作作用用时时间间的的不不同同
9、，对对酵酵母母菌菌死死细细胞胞数数量量 有有何何影响试分析其原因。影响试分析其原因。 （2）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌 （3）如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子）如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子（4）酵母菌在实际应用中有什么作用？）酵母菌在实际应用中有什么作用？ 酵母菌图片（酵母菌图片（1 1）酵母菌图片（酵母菌图片（2 2）酵母菌图片（酵母菌图片（3 3）酵母菌子囊孢子的形成过程 1、2、3、4：两个细胞结合；：两个细胞结合；5：接合子；：接合子；6、7、8、9：核分裂；：核分裂；10、11：核形成孢子：核形成孢子 结束结束
