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1、实验八实验八 微生物无菌接种、分离和纯化技术微生物无菌接种、分离和纯化技术实验目的实验目的v学习和掌握学习和掌握微生物无菌接种技术微生物无菌接种技术v学习和掌握超净工作台的使用方法学习和掌握超净工作台的使用方法v学学习习和和掌掌握握涂涂布布分分离离和和划划线线分分离离等等微微生生物物分分离离纯纯化化技术技术实验原理实验原理微生物无菌接种技术微生物无菌接种技术在在无菌条件无菌条件下，用下，用接种工具接种工具从从原菌种原菌种中挑取少许菌体，接入到中挑取少许菌体，接入到新培养基新培养基上扩大培养的技术上扩大培养的技术p 常用接种工具常用接种工具接种环：划线、斜面转接、液体培养基接种环：划线、斜面转接
2、、液体培养基接种针：固体穿刺培养接种针：固体穿刺培养接种勾：多用于丝状微生物转接接种勾：多用于丝状微生物转接接种铲：多用于丝状微生物转接接种铲：多用于丝状微生物转接 无菌移液管：无菌移液管： 液体培养基间的接种液体培养基间的接种回转螺旋杆手柄实验原理实验原理无菌接种技术的注意事项无菌接种技术的注意事项要点：防止防止污染，染，严格的无菌操作格的无菌操作接种接种场所所必必须进行行严格的消毒格的消毒处理（接种理（接种间）实验室：在室：在超超净工作台工作台上上进行行接种者的双手接种者的双手要要进行消毒行消毒处理，一般用理，一般用75%酒精酒精或或0.01%新新洁而而灭擦洗擦洗接种工具、管、瓶口接种前后
3、接种工具、管、瓶口接种前后要通要通过灼灼烧灭菌菌塞子不能脱手塞子不能脱手实验原理于接种之前打开于接种之前打开接种室和超接种室和超净工工作台紫外灯消毒作台紫外灯消毒30min，同，同时打打开开风机机接种接种时必必须关关闭紫外灯紫外灯无菌接种技术的基本操作无菌接种技术的基本操作转接斜面 （斜面接种）演示：斜面转接演示：斜面转接1、标记2、左手持斜面3、灼烧接种环4、取塞，灼烧管口5、冷却，取菌转接6、重烧管口，盖塞7、重烧接种环微生物的分离纯化技术微生物的分离纯化技术分离：分离：从混杂的群体中把各种微生物分开从混杂的群体中把各种微生物分开纯化：纯化：进一步分离，得到纯培养物进一步分离，得到纯培养物
4、菌落纯：菌落纯：由一个由一个或几个或几个相同种细胞相同种细胞所得到的群体所得到的群体形态、结构、生物学特性基本相同的群体形态、结构、生物学特性基本相同的群体研究一般特性研究一般特性菌株纯：由菌株纯：由一个细胞一个细胞繁殖得到的后代（纯培养）繁殖得到的后代（纯培养）应用研究、生产应用研究、生产微生物的分离微生物的分离常用菌种分离方法常用菌种分离方法固体平板分离固体平板分离u 倒平板法倒平板法 （Pour-plate TechniquePour-plate Technique）u涂布平板法涂布平板法（Spread-Plate TechniqueSpread-Plate Technique）u平板划
5、平板划线法法 （Streak-Plate TechniqueStreak-Plate Technique）倒平板法倒平板法涂布平板法涂布平板法1、取样2、沾燃烧酒精3、灼烧4、涂布平板划线法平板划线法分区划线分离要点：分区划线分离要点：仅第仅第1次划线需要取菌。次划线需要取菌。其他每区划线之前一定要把残余的菌体烧掉；待接种环完全能却后通过前其他每区划线之前一定要把残余的菌体烧掉；待接种环完全能却后通过前1区划线区划线相隔的区域不要交叉相隔的区域不要交叉接种环要在培养基表面划线，不要空划，也不要划破培养基接种环要在培养基表面划线，不要空划，也不要划破培养基整个过程要无菌操作整个过程要无菌操作实验
6、内容1 1、倒平板：、倒平板：每人倒至少每人倒至少2 2个牛肉膏蛋白胨平板个牛肉膏蛋白胨平板2 2、细菌斜面接种：、细菌斜面接种：每人每人1 1支，牛肉膏蛋白胨固体斜面培养基支，牛肉膏蛋白胨固体斜面培养基3 3、涂布法分离混合微生物：、涂布法分离混合微生物：每组每组4 4个牛肉膏蛋白胨平板，不同稀个牛肉膏蛋白胨平板，不同稀释度菌悬液释度菌悬液4 4、划线法纯化分离：、划线法纯化分离：每人一个牛肉膏蛋白胨平板每人一个牛肉膏蛋白胨平板实验报告1 1、培养基的配制和消毒灭菌（过程）、培养基的配制和消毒灭菌（过程）2 2、微生物的无菌接种、分离和纯化技术、微生物的无菌接种、分离和纯化技术3 3、结果：划线及涂布分离的效果、结果：划线及涂布分离的效果4、分析讨论分析讨论 操作过程及结果中遇到的问题，解决方法操作过程及结果中遇到的问题，解决方法思考题微生物接种微生物接种时，采取哪些措施来防止，采取哪些措施来防止杂菌菌污染？染？下一次下一次预习 实验9和和10实验内容：细菌生理生化反应试验和实验内容：细菌生理生化反应试验和pHpH对对大肠杆菌生长的影响大肠杆菌生长的影响
